陳立，陳宇星，林佳(.福建醫(yī)科大學(xué)省立臨床醫(yī)學(xué)院/福建省立醫(yī)院，福州市35000；.福建中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，福州市35008)

神經(jīng)性皮炎是一種臨床常見的皮膚功能障礙性疾病，具有明顯的皮膚損害，癥狀主要表現(xiàn)為劇烈瘙癢，故可嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。臨床使用地塞米松磷酸鈉與鹽酸利多卡因進(jìn)行皮下淺層局部注射給藥治療，療效顯著。其中地塞米松磷酸鈉具有抗炎抗過敏的作用，可減輕和防止組織對炎癥的反應(yīng)，從而減輕炎癥的表現(xiàn)；鹽酸利多卡因作為公認(rèn)的強(qiáng)效局部麻醉藥，可阻斷神經(jīng)傳導(dǎo)，用于皮膚局部鎮(zhèn)痛及麻醉，減少劇烈瘙癢給患者帶來的痛苦。但上述給藥方法具有一定的局限性:(1)皮下淺層注射要嚴(yán)格掌握其深淺度，患者無法自行給藥；(2)其為創(chuàng)傷性給藥，部分患者會(huì)產(chǎn)生恐懼心理從而影響給藥的依從性。因此，將地塞米松磷酸鈉、鹽酸利多卡因作為主成分制成乳膏，可直接涂于神經(jīng)性皮炎的皮損部位[1]，避免上述給藥方式帶來的局限性。為此，本文就其制備及含量測定方法報(bào)道如下。

1 材料

1.1 儀器

LC-2010AHT型高效液相色譜(HPLC)儀(日本島津公司)；pH計(jì)(瑞士Mettle-toledo公司)；JB-2型溶液軟膏攪拌器(上海崇明東平醫(yī)藥設(shè)備廠)；KQ-500B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；TU-1221型紫外-可見分光光度儀(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。

1.2 試藥

地塞米松磷酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品(批號:100016-200712，含量:91.1%)、鹽酸利多卡因標(biāo)準(zhǔn)品(批號:100341-200301，含量:93.5%)均由中國藥品生物制品檢定所提供；復(fù)方地利乳膏(福建省立醫(yī)院自制，批號:20090318、20090319、20090320，規(guī)格:每50 g含鹽酸利多卡因0.5 g、地塞米松磷酸鈉0.05 g)；地塞米松磷酸鈉原料藥(天津天藥藥業(yè)股份有限公司，批號:DNa081001，含量:98.1%)；鹽酸利多卡因注射液(上海禾豐制藥有限公司，批號:081206，規(guī)格:每5 mL含鹽酸利多卡因0.1 g)；三乙胺、甲醇、乙腈均為色譜純；其它試劑為分析純。

2 處方與制備

2.1 處方

鹽酸利多卡因10 g、地塞米松磷酸鈉1 g、單硬脂酸甘油酯70 g、液體石蠟100 g、蜂蠟25 g、硬脂酸80 g、甘油120 g、羥苯乙酯1 g、乳化劑辛基苯酚聚氧乙烯醚(OP)30 g、薄荷醇適量，純化水加至1000 g。

2.2 制備

采用乳化劑后加法，稱取處方量各成分置于同一容器中，加熱至92～95℃，于攪拌器下攪拌，轉(zhuǎn)速300～350 r·min－1；當(dāng)溫度降至80～84℃時(shí)，加入乳化劑OP，繼續(xù)攪拌，待溫度降至40℃以下時(shí)，加入薄荷醇，攪拌至冷凝，即得。

3 含量測定[2，3]

3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:HYPERSIL ODS-2(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相:0.75%三乙胺溶液(磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇-乙腈(45∶55∶5)；檢測波長:242 nm；進(jìn)樣量:20 μL；流速:1.0 mL·min－1。理論板數(shù)按地塞米松磷酸鈉峰計(jì)大于5000，鹽酸利多卡因大于3000，2主峰與雜質(zhì)峰的分離度均大于4，2主峰間的分離度大于12。取“3.2”項(xiàng)下3種溶液以及溶劑(流動(dòng)相)在該色譜條件下進(jìn)樣，色譜見圖1。

3.2 溶液的制備

3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備:精密稱取地塞米松磷酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品約10 mg，置于25 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得甲液；精密稱取鹽酸利多卡因標(biāo)準(zhǔn)品約20 mg，置于50 mL容量瓶中，并從甲液中精密量取5 mL至上述容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

3.2.2 供試品溶液的制備:精密稱取樣品約1 g，置于25 mL容量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲10 min后，加流動(dòng)相至刻度；將其置于水浴中加熱30 min后，冷卻至室溫；過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

3.2.3 陰性樣品溶液的制備:按處方量制備不含2主藥的空白基質(zhì)，同“3.2.2”項(xiàng)下方法制備，得陰性樣品溶液。

3.3 專屬性試驗(yàn)

取溶劑(即流動(dòng)相)與“3.2”項(xiàng)下3種溶液，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，色譜顯示供試品溶液出現(xiàn)的2主峰與標(biāo)準(zhǔn)品溶液出現(xiàn)的2主峰的保留時(shí)間均一致，陰性樣品溶液在2主峰位置處均未出現(xiàn)其它的雜質(zhì)峰，說明此方法可避免其它成分和輔料的干擾，可用于樣品中地塞米松磷酸鈉與鹽酸利多卡因的含量測定。色譜見圖1。

3.4 線性關(guān)系考察

取同一份標(biāo)準(zhǔn)品溶液，以流動(dòng)相稀釋成含地塞米松磷酸鈉32.38、36.43、40.47、44.52、48.58 μg·mL－1及鹽酸利多卡因304.16、342.18、380.20、418.22、456.24 μg·mL－1的系列濃度溶液，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(C，μg·mL－1)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得地塞米松磷酸鈉、鹽酸利多卡因的回歸方程分別為A地＝32001C地－18536(r＝0.9999)、A利＝5291.1C利－27668(r＝0.9999)。結(jié)果表明，地塞米松磷酸鈉、鹽酸利多卡因檢測濃度的線性范圍分別為32.38～48.58 μg·mL－1、304.16～456.24 μg·mL－1。

3.5 精密度試驗(yàn)

取同一份標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜，以峰面積計(jì)算。結(jié)果，得地塞米松磷酸鈉、鹽酸利多卡因的RSD分別為0.08%、0.21%，表明進(jìn)樣精密度良好。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品共稱取6份，按“3.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按“3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，以地塞米松磷酸鈉與鹽酸利多卡因的含量計(jì)算。結(jié)果，地塞米松磷酸鈉、鹽酸利多卡因的RSD分別為0.5%、0.3%(n＝6)，表明方法重復(fù)性良好。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品1份，約1 g，按“3.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按“3.1”項(xiàng)下色譜條件于0、2、4、6、24 h內(nèi)進(jìn)行測定，測得地塞米松磷酸鈉、鹽酸利多卡因的RSD分別為0.05%、0.07%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.8 回收率試驗(yàn)

取空白基質(zhì)9份，約1 g，精密加入不同比例處方量的地塞米松磷酸鈉、鹽酸利多卡因標(biāo)準(zhǔn)品，按“3.1”項(xiàng)下方法測定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 1Results of recovery test

3.9 樣品含量測定

分別取3批樣品，按“3.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣，測定并計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品標(biāo)示含量測定結(jié)果Tab 2Determination of labeled contents of samples

4 討論

4.1 處方設(shè)計(jì)

制劑中地塞米松磷酸鈉具有抗炎、抗過敏、免疫抑制等作用，可減輕炎癥表現(xiàn)；鹽酸利多卡因具有較強(qiáng)的彌散力和組織穿透性，可抑制瘙癢與疼痛，且作用快，持續(xù)時(shí)間長，還可改善局部血流；薄荷醇具有止癢止痛、促透、增強(qiáng)麻醉的作用。三者相輔相成，在減輕炎癥的同時(shí)，還能緩解瘙癢、皮損后疼痛的癥狀，另鹽酸利多卡因的改善局部血流作用還可加快皮膚組織的修復(fù)。

本品在基質(zhì)的選擇上采用水包油(O/W)型乳膏基質(zhì)，該基質(zhì)質(zhì)地細(xì)膩、有光澤感，具有適當(dāng)?shù)酿こ硇?，易均勻涂布于皮膚或黏膜上，不融化，但能軟化。因O/W型乳膏基質(zhì)具有易洗除、穿透性好、易發(fā)揮藥效等作用而成為透皮給藥的理想基質(zhì)[4]。

本乳膏以硬脂酸與單硬脂酸甘油酯為輔助乳化劑，OP為主要乳化劑。OP制成的乳膏能形成一層乳化膜，增加乳膏的保濕作用，其穩(wěn)定性高，不易受強(qiáng)電解質(zhì)、無機(jī)鹽類的影響，耐酸、耐堿、耐熱方面均顯示優(yōu)良特性。因此，由其制得的乳膏穩(wěn)定性好并具有光澤，表明OP是一種優(yōu)良的乳化劑[5]。

4.2 乳膏制備

常規(guī)的O/W型乳膏的制備，是將乳化劑按其性質(zhì)加入到相應(yīng)的水相或油相中。為提高其乳化成功率，本品采用乳化劑后加法制備，即:當(dāng)油相加入水相充分?jǐn)噭蚝?，在攪拌下，加入OP。此法所制得的基質(zhì)質(zhì)地細(xì)膩、光澤性好，操作輕松、簡便，工藝可控[6]。

由于薄荷醇遇熱易揮發(fā)，故本品在制備過程中薄荷醇應(yīng)以溫度降至40℃時(shí)加入為宜。

攪拌速度也是制備乳膏的一個(gè)重要方面。攪拌速度過快易產(chǎn)生大量氣泡，過慢又容易析出粗顆粒。曾有報(bào)道[7]提出:攪拌速度可按照基質(zhì)中水相量的多少來調(diào)節(jié):量多(水相量大于75%)以300～600 r·min－1為宜，量較多(水相量在65%～75%)以600～900 r·min－1為宜。本處方水相量為72%，考慮到試驗(yàn)階段為小處方量，其轉(zhuǎn)速降低為350 r·min－1，制得的乳膏質(zhì)量良好、性質(zhì)穩(wěn)定；在顯微鏡下觀察，乳滴均勻分布，偶見小水泡。

4.3 含量測定

在選擇含量測定方法時(shí)，曾利用紫外分光光度法測定本品含量，此法簡單且能在實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有條件下完成，但通過紫外掃描，發(fā)現(xiàn)2主分間存在干擾，無法測定。為尋找一種合適、簡便的含量測定方法，經(jīng)參考2005年版《中國藥典》收載的地塞米松磷酸鈉與鹽酸利多卡因含量測定方法，擬改用HPLC法[8]。在HPLC法的預(yù)試驗(yàn)階段，因考慮到2者的最大吸收波長比較接近，故選擇梯度洗脫進(jìn)行分離測定，結(jié)果，雖然2成分能夠被分離開，但二者分離時(shí)間相差甚遠(yuǎn)，鹽酸利多卡因在5 min時(shí)洗脫出柱，而地塞米松磷酸鈉在20 min才開始洗脫分離。有關(guān)資料[9]顯示，在流動(dòng)相(三乙胺-甲醇-乙腈為55∶40∶5)下，地塞米松磷酸鈉的出峰時(shí)間應(yīng)在6 min左右?？紤]到試驗(yàn)效率等方面問題，決定參考2005年版《中國藥典》，采用2種流動(dòng)相系統(tǒng)，對2組分分別進(jìn)行測定[8]。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2主分在流動(dòng)相(三乙胺-甲醇-乙腈為55∶40∶5)下也能被洗脫分離，且出峰時(shí)間減少；通過微調(diào)流動(dòng)相的比例，發(fā)現(xiàn)增加甲醇的量有助于地塞米松磷酸鈉提早出柱，對鹽酸利多卡因則影響不大，故最終選擇(三乙胺-甲醇-乙腈＝40∶55∶5)作為流動(dòng)相體系。在該流動(dòng)相體系下，鹽酸利多卡因在4 min出柱，地塞米松磷酸鈉在8 min出柱；2個(gè)峰之間還存在一較大吸收的雜質(zhì)峰，可能為羥苯乙酯。

用HPLC法測定本制劑中2成分含量，不僅專屬性強(qiáng)，精密度、重復(fù)性均高，且方法準(zhǔn)確、快速。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，表明本法可用于復(fù)方地利乳膏的含量測定。

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[2]沈少林.鹽酸利多卡因乳劑的制備與質(zhì)量控制[J].中國藥房，2006，17(1):29.

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[4]呂東.皮膚外用軟膏基質(zhì)變更的考慮要素[J].中國新藥雜志，2008，17(12):1085.

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[6]李艷民，鄭林，林滔.3種乳化法對水包油型乳膏基質(zhì)質(zhì)量的影響[J].中國實(shí)用醫(yī)藥，2008，3(26):172.

[7]鐘松陽.O/W乳膏基質(zhì)配制方法的改進(jìn)及質(zhì)量考察[J].西北藥學(xué)雜志，2002，17(2):75.

[8]國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典(二部)[S].2005年版.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:185.

[9]范玉峰，詹新衛(wèi)，胡守蓮，等.HPLC法測定復(fù)方地塞米松丁卡因乳膏中醋酸地塞米松和鹽酸丁卡因的含量[J].中國藥事，2007，21(8):596.