6607 濟南軍區(qū)藥劑研究中心 姜海云 莫宗琪 蘇

250100 山東恒瑞醫(yī)藥開發(fā)有限公司 肖廣常3

單硝酸異山梨酯是硝酸異山梨酯的活性代謝產(chǎn)物，為臨床上常用的治療心絞痛的藥物。本試驗研究了單硝酸異山梨酯注射液中硝酸異山梨酯和2-單硝酸異山梨酯兩種有關(guān)物質(zhì)，為其注射液在配制、運輸及儲藏過程中的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Labaliiance高效液相色譜儀 (美國)，Anastar色譜數(shù)據(jù)工作站。單硝酸異山梨酯注射液(自制)，單硝酸異山梨酯對照品(自制，以無水物計為99.9%)，2-單硝酸異山梨酯(Fisher Scientific Inc.美國，含量99.9%)，硝酸異山梨酯(中國藥品生物制品檢定所)，甲醇(色譜純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應性 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(C18柱，4.6 mm×150 mm，5μm)；進樣量：20 μL。流動相：水∶甲醇=75∶25；流速：1 mL/min。檢測波長為210 nm。理論塔板數(shù)按單硝酸異山梨酯計算應不低于3 000。

2.2 檢測波長的選擇 對硝酸異山梨酯和2-單硝酸異山梨酯兩種有關(guān)物質(zhì)的水溶液分別進行紫外掃描，結(jié)果顯示兩種物質(zhì)在遠紫外區(qū)(近200 nm處)有逐漸增大的吸收，結(jié)合高效液相色譜的分析特點，故選用210 nm作為吸收波長。

2.3 破壞性試驗 本品經(jīng)熱、酸、堿、氧化等破壞，各破壞條件下色譜峰的分離度均大于1.5。

2.4 線性試驗 精密稱取硝酸異山梨酯、2-單硝酸異山梨酯對照品(以無水物計)用流動相溶解并依次稀釋成2、4、5、6、10 μg/mL的濃度，分別取20 μL進樣，以濃度與峰面積作線性回歸，曲線方程為：硝酸異山梨酯：C=0.144 53A＋5.402 2×10-5，r=0.999 5；2-單硝酸異山梨酯：C=0.023 95A＋9.502 2×10-5，r=0.999 8。

2.5 精密度試驗 取硝酸異山梨酯、2-單硝酸異山梨酯5 μg/mL濃度的溶液，連續(xù)進樣6次，結(jié)果分別為RSD=1.2%，RSD＝0.8%。

2.6 最低檢測限 用流動相配制不同濃度的硝酸異山梨酯和2-單硝酸異山梨酯的溶液，分別取20 μL進樣，記錄色譜圖，以信噪比為3，計算硝酸異山梨酯、2-單硝酸異山梨酯的檢測限分別為1 ng、0.5 ng。

2.7 有關(guān)物質(zhì)測定 取本品適量2 mL，加水制成每1 mL含單硝酸異山梨酯1 mg的溶液，作為供試品溶液；另精密稱取硝酸異山梨酯對照品與2-單硝酸異山梨酯對照品適量，以流動相稀釋制成每1 mL中含硝酸異山梨酯、2-單硝酸異山梨酯5 μg的溶液(1)、(2)，作為對照品溶液。取對照品溶液(2)注入液相色譜儀進行預試驗，調(diào)節(jié)檢驗靈敏度，使主成分的峰高約為記錄滿量程的20%～25%。再取供試品溶液與對照品溶液(1)、(2)注入高效液相色譜儀，記錄供試品色譜圖，供試品溶液中如有硝酸異山梨酯與2-單硝酸異山梨酯峰，其各自的峰面積，均不得大于對照品溶液(1)、(2)色譜圖上的主成分峰面積，結(jié)果(表1)。

表1 有關(guān)物質(zhì)的測定結(jié)果(%)

3 討論

本試驗表明該方法簡便、可靠、精密度高；試驗結(jié)果表明多批單硝酸異山梨酯注射液中硝酸異山梨酯均未檢出，2-單硝酸異山梨酯的量均較少，說明單硝酸異山梨酯注射液較穩(wěn)定，不易產(chǎn)生此兩種有關(guān)物質(zhì)。