李妍博，張生林

（山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)院老年病科，山西太原 030001）

依達(dá)拉奉是一種新型的腦保護(hù)藥，具有清除自由基、抗細(xì)胞凋亡和神經(jīng)保護(hù)作用[1]。臨床研究結(jié)果表明，依達(dá)拉奉在腦梗死中有顯著的神經(jīng)保護(hù)作用[2-3]。血管性疾呆（VD）是一組由于缺血或出血性的腦血管病及全腦缺血低氧引起的認(rèn)知功能障礙綜合征。本文通過(guò)觀察依達(dá)拉奉對(duì)VD大鼠海馬Chat、NR2B表達(dá)的影響，研究依達(dá)拉奉的預(yù)防及治療作用，為VD的治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組及模型制備

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，選用雄性Wistar大鼠 36只，體重 200～250 g，適應(yīng)性飼養(yǎng) 2周，采用“兩血管阻斷+硝普鈉降壓法”[4]制備VD大鼠模型，B組（VD組）、C組（依達(dá)拉奉治療組）、D組（預(yù)防治療組）行雙側(cè)頸總動(dòng)脈反復(fù)缺血-再灌注2次，每次10 min，同時(shí)在缺血-再灌注前給予硝普鈉2.5 mg/kg腹腔注射，A組僅暴露雙側(cè)頸總動(dòng)脈而不結(jié)扎，且不注射硝普鈉。

1.2 給藥方法

C組大鼠于術(shù)后第7天給予依達(dá)拉奉皮下注射3mg/kg，D組于造模麻醉前給予同等劑量的依達(dá)拉奉，每天1次給藥，共20 d；A組與B組給予等量生理鹽水皮下注射。

1.3 學(xué)習(xí)記憶能力的測(cè)定

根據(jù)Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)進(jìn)行大鼠學(xué)習(xí)記憶功能測(cè)定，歷時(shí)5 d，前4 d記錄在2 min內(nèi)找到并爬上平臺(tái)的時(shí)間為大鼠的逃避潛伏期，即學(xué)習(xí)成績(jī)；第5天撤掉平臺(tái)后，記錄大鼠穿越平臺(tái)的次數(shù)以測(cè)試其記憶能力。

1.4 制備組織切片

各組動(dòng)物分別于造模后第30天處死，灌洗固定后剝?nèi)『ｑR組織，石蠟包埋，脫蠟，應(yīng)用免疫組化方法制片。

1.5 灰度值分析

各組取海馬CA1、CA3區(qū)各10個(gè)測(cè)試點(diǎn)，求平均值進(jìn)行分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見(jiàn)表 1。

表1 各組大鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果（）

表1 各組大鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果（）

與 A 組比較，▲P＜0.05；與 B 組比較，●P＜0.05；與 C 組比較，■P＜0.05

?

2.1.1 定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果 B組逃避潛伏期均較A、C、D組延長(zhǎng)（P＜0.05），D 組較 C 組逃避潛伏期縮短（P＜0.05）。

2.1.2 空間搜索實(shí)驗(yàn)結(jié)果 B組穿越平臺(tái)次數(shù)較A、C、D組減少（P＜0.05），D 組較 C 組次數(shù)增加（P＜0.05），說(shuō)明 B 組記憶能力較其他三組均降低，D組較C組記憶能力提高。

2.2 圖像灰度值分析

與A組比較，B組海馬CA1、CA3區(qū)的Chat及NR2B表達(dá)明顯，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），C組、D組與B組比較，海馬 CA1、CA3 區(qū)的 Chat及 NR2B 表達(dá)增加（P＜0.05），但較 A 組減少（P＜0.05）。 見(jiàn)表 2。

表2 各組大鼠海馬 CA1、CA3區(qū)Chat、NR2B表達(dá)（）

表2 各組大鼠海馬 CA1、CA3區(qū)Chat、NR2B表達(dá)（）

與 A 組比較，■P＜0.05，▲P＜0.01；與 B 組比較，●P＜0.05

3 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，B組大鼠逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)，而C組與D組較B組均縮短，且D組與A組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明依達(dá)拉奉能夠改善VD大鼠的認(rèn)知，同時(shí)說(shuō)明依達(dá)拉奉有預(yù)防VD發(fā)生的作用。其機(jī)制可能與依達(dá)拉奉能夠抑制脂質(zhì)過(guò)氧化、清除過(guò)量自由基、保護(hù)細(xì)胞線粒體、阻止自由基釋放而引起的遲發(fā)型的組織損害有關(guān)[5]。

Chat是膽堿能神經(jīng)元的特殊標(biāo)志，Chat免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元減少與大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙程度呈正相關(guān)[6]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Chat蛋白在B組海馬區(qū)表達(dá)極少，可能是因?yàn)槟X組織遭受自由基的氧化損傷，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡。在C組與D組中其表達(dá)增加可能是因?yàn)橐肋_(dá)拉奉清除過(guò)量生成的自由基保護(hù)細(xì)胞線粒體，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用和血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷[2]，阻止了caspase-3的活化[7]，提高了Bcl-2的表達(dá)[8]，減少了缺血區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。

NR2B是NMDA受體的調(diào)節(jié)亞單位，在學(xué)習(xí)和記憶中起關(guān)鍵作用[9]。腦缺血引起神經(jīng)元去極化，導(dǎo)致谷氨酸（Glu）的大量釋放，Ca2+內(nèi)流主要由谷氨酸受體的一種亞型NMDA受體通道介導(dǎo)，Ca2+超載造成神經(jīng)元損傷，這就是Glu對(duì)神經(jīng)元的興奮毒性損傷[10]。本研究中，VD大鼠海馬NR2B表達(dá)減少的機(jī)制可能與海馬缺血、低氧致神經(jīng)元死亡或結(jié)構(gòu)受損有關(guān)，也可能與神經(jīng)元低代謝影響神經(jīng)傳遞有關(guān)，而經(jīng)依達(dá)拉奉干預(yù)后NR2B表達(dá)增加可能與依達(dá)拉奉能夠抑制谷氨酸釋放[11]，進(jìn)而改善局部腦血流量和腦微循環(huán)及腦能量代謝有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，C組Chat及NR2B表達(dá)與D組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但水迷宮實(shí)驗(yàn)中D組較C組學(xué)習(xí)記憶能力提高，可能仍有其他機(jī)制的影響，有待于進(jìn)一步研究。

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