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        環(huán)孢素A單克隆全血試劑盒殘余試劑再利用研究

        2010-07-28 11:41:54鄭芝欣翟保同
        中國醫(yī)藥導(dǎo)報 2010年2期
        關(guān)鍵詞:環(huán)孢素血藥濃度試劑

        鄭芝欣,翟保同,周 成

        (河南省南陽市中心醫(yī)院,河南南陽 473001)

        環(huán)孢素A是目前臨床常用的強效免疫抑制劑,廣泛用于器官移植術(shù)后抗排異反應(yīng)和某些自身免疫性疾病的治療[1]。由于在治療劑量下,其生物利用度和藥動學(xué)個體差異很大,治療中進行血藥濃度監(jiān)測及藥動學(xué)和藥效學(xué)研究,對提高移植器官的存活率、減少毒性反應(yīng)和排異反應(yīng)的發(fā)生具有重要的臨床意義[2-3]。環(huán)孢素A的血藥濃度監(jiān)測方法有高效液相色譜法(HPLC)、放射免疫法(RIA)、熒光偏振免疫法(FPIA)等[4-5]。FPIA因方法快捷、靈敏可靠、重現(xiàn)性好而被臨床廣泛采用。在利用FPIA對環(huán)孢素A進行血藥濃度監(jiān)測過程中,主要依賴于環(huán)孢素A試劑盒,由于目前國內(nèi)尚無技術(shù)生產(chǎn)該試劑盒,試劑盒的供應(yīng)還依賴于進口,價格較為昂貴,是環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測的最主要耗材,也是造成臨床上環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測成本和費用較高的主要原因。在環(huán)孢素A的實際血藥濃度監(jiān)測中,每套試劑盒利用100次左右時就不能再用,而試劑盒中仍殘余不少試劑,扔掉極為可惜。為探討如何利用這些殘余試劑,降低臨床監(jiān)測成本,筆者進行了該項研究。

        1 材料與方法

        1.1 儀器與試劑

        TDX/FLX全自動快速血藥濃度測定儀,高速離心機,TDX單克隆全血濃度標準曲線盒(批號93258Q100),質(zhì)控盒(批號 03071Q100),標準試劑盒(批號 13107Q102),混合試劑盒(批號13107Q100的殘余試劑與批號17774Q101的殘余試劑進行混合);以上均為美國ABBOTT公司產(chǎn)品。

        1.2 樣品來源

        2007年6~9月在我院進行環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測的20例腎移植患者,年齡20~60歲,手術(shù)時間6個月~5年,均同時于9∶00服藥前抽取血樣,分別用標準試劑盒和混合試劑盒進行環(huán)孢素A血藥谷濃度測定。

        1.3 方法

        所有樣品均在同一上午測定。標準試劑盒測定:用微量移液器精密吸取150 μl混勻后的全血樣品,置于離心管中,精密加50 μl紅細胞溶解劑,再精密加300 μl沉淀劑,在渦旋混合器上充分混勻,高速離心后將上清液全部倒入樣品杯中用標準試劑盒進行測定?;旌显噭┖袦y定:用微量移液器精密吸取168 μl混勻后的全血樣品,置于離心管中,精密加50 μl紅細胞溶解劑,再精密加 282 μl沉淀劑,在渦旋混合器上充分混勻,高速離心后將上清液全部倒入樣品杯中用混合試劑盒進行測定。所有操作均嚴格按照操作規(guī)程進行,微量移液器使用也嚴格按照說明書要求進行。

        2 結(jié)果

        2.1 兩試劑盒的質(zhì)控結(jié)果比較

        質(zhì)控標準分三檔,分別為高(680~920 ng/ml)、中(340~460 ng/ml)、低(120~180 ng/ml),兩試劑盒質(zhì)控均符合標準要求,但混合試劑盒高、中、低質(zhì)控值均比目標濃度低約12%。見表1。

        表1 兩試劑盒質(zhì)控結(jié)果(ng/ml)Tab.1 The results of control in two reagent packs(ng/ml)

        2.2 兩試劑盒測定結(jié)果比較

        標準試劑盒測定結(jié)果(X)>混合試劑盒測定結(jié)果(Y)的樣品數(shù)為11個,X<Y的樣品數(shù)為9個,同一樣品最大差距為7.26 ng/ml,最小差距為0.44 ng/ml,兩組數(shù)據(jù)經(jīng)配對t檢驗,無顯著性差異(P>0.05)。 見表 2。

        表2 兩試劑盒測定結(jié)果統(tǒng)計學(xué)分析(n=20)Tab.2 The statistic analysis of the results in two reagent packs(n=20)

        2.3 兩試劑盒測定結(jié)果相關(guān)性分析

        以標準試劑盒測定結(jié)果為X,混合試劑盒測定結(jié)果為Y進行線性回歸分析,得回歸方程為:Y=-1.9380+1.0058X,r=0.9994(n=20)。

        3 討論

        由表1可以看出,標準試劑盒高、中、低質(zhì)控結(jié)果與目標濃度吻合較好,說明測定所用標準曲線液、試劑、質(zhì)控液均較穩(wěn)定,對測定結(jié)果影響較?。欢旌显噭┖懈?、中、低質(zhì)控結(jié)果雖然也在要求范圍之內(nèi),但3個質(zhì)控結(jié)果均比目標濃度低約12%,說明兩個殘余試劑盒混合后也很穩(wěn)定,但與標準試劑盒相比存在一定的偏差,而偏差方向一致,存在一定的系統(tǒng)誤差,為使測定結(jié)果更加準確,在利用混合試劑盒測定樣品時筆者對每個樣品均比常規(guī)抽取量(150 μl)多抽取12%(18 μl),而對沉淀劑比常規(guī)抽取量(300 μl)少抽取 18 μl,每份樣品混合后總量仍為500 μl。

        結(jié)果表明,利用標準試劑盒對標準抽取量的樣品進行測定結(jié)果與利用混合試劑盒對經(jīng)過調(diào)整抽取量的樣品測定結(jié)果吻合非常好,統(tǒng)計學(xué)處理顯示無顯著性差異,相關(guān)性分析顯示相關(guān)性較強,說明采取該種方案可行。據(jù)此,我們在實際操作中可以根據(jù)每套殘余試劑混合后與標準質(zhì)控存在的偏差比例,對抽取的樣品量作出適當(dāng)調(diào)整,使測定結(jié)果更加準確,更能反映真實的血藥濃度。由于機器內(nèi)部設(shè)定操作次數(shù)限制和試劑盒中殘余試劑液面較低,每套環(huán)孢素A試劑盒用到100次左右就無法再用,而每套試劑盒中殘余的試劑經(jīng)與另一套殘余試劑混合后至少還可操作15~20次,可節(jié)約成本2000~3000元,經(jīng)濟效益非常明顯。

        [1]陳耿,董家鴻.環(huán)孢素A治療藥物監(jiān)測的研究進展[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2003,25(6):551-554.

        [2]李金恒.臨床治療藥物監(jiān)測的方法和應(yīng)用[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:102-103.

        [3]魏筱華,劉通,劉明珪,等.腎移植術(shù)后CsA血藥濃度監(jiān)測及其臨床意義[J].江西醫(yī)藥,2003,38(6):414-416.

        [4]繆海均,鄧渝林,惲蕓蕾,等.不同免疫分析儀在環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測中的差異[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2004,24(4):223.

        [5]劉文豹,劉杰,劉增.FPIA、RIA在環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測中的對比分析[J].放射免疫學(xué)雜志,2008,21(5):423.

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