王麗萍 韓丙遵 王洪英

山東省高密市中醫(yī)院檢驗(yàn)科（261500）

抗心磷脂抗體（anticardiolipin antibody，ACA）是一種以血小板和內(nèi)皮細(xì)胞膜上帶負(fù)電荷的心磷脂作為靶抗原的一種自身抗體，是直接溝通免疫和凝血兩大生理系統(tǒng)的橋梁之一，是迄今所知直接誘發(fā)血液高凝狀態(tài)的唯一自身抗體。ACA與腦卒中有關(guān)是近幾年血管病免疫功能變化方面的新課題，近年來不少學(xué)者認(rèn)為該抗體與血栓形成、血小板減少、自然流產(chǎn)或?qū)m內(nèi)死胎等關(guān)系密切。但它與腦血栓形成的關(guān)系研究報(bào)道較少，為了明確ACA在腦卒中發(fā)病中的作用，我們應(yīng)用ELISA法對(duì)288例急性腦血管病患者和131例健康體檢者的ACA含量進(jìn)行了檢測(cè)，探討ACA與急性缺血性腦血管病的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 病例選擇

290例患者中，腦供血不足患者51例，男29例、女22例，年齡39～78歲，平均年齡（58.6±13.4）歲；短暫性腦缺血發(fā)作患者42例，男24例、女17例，年齡35～78歲，平均年齡（55.9±13.4）歲；腦梗死患者131例，男75例、女56例，年齡26～86歲，平均年齡（63.5±15.3）歲；腦出血患者66例，男35例、女31例，年齡35～80歲，平均年齡（59.1±14.5）歲。所有患者均按全國(guó)腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)確診，腦卒中患者全部經(jīng)頭顱CT或磁共振(MRI)證實(shí)。全部病例均為起病后2周內(nèi)的住院患者。

1.2 對(duì)照組

健康體檢者131例，男性81例，女性50例，年齡26～71歲，平均年齡（57.9±13.9）歲。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

ACA IgG、IgA、IgM試劑盒由美國(guó)Trinil公司生產(chǎn)，以酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定。①待測(cè)樣本、標(biāo)準(zhǔn)、陽(yáng)性對(duì)照分別用樣本稀釋液1∶20稀釋；②各孔分別加入樣本、標(biāo)準(zhǔn)、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照各100μL，空白孔加入樣本稀釋液100μL，25℃孵育30min；③用洗滌液（1∶20稀釋）洗3次，每次均需注滿各孔，靜置2min，在吸水紙上扣干；④每孔各加入酶結(jié)合物100μL，25℃孵育30min，用洗滌液洗3次，扣干；⑤每孔各加入底物液100μL，25℃孵育15min，加入終止液100μL終止反應(yīng)，450nm波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（荷蘭產(chǎn)Multiskan MK3）讀取OD值，計(jì)算結(jié)合指數(shù)（Bigding Index，BI）。BI=（待測(cè)樣本OD-空白OD）/（標(biāo)準(zhǔn)OD-空白OD）×K，K為試劑盒因子系數(shù)。報(bào)告方式：BI＜0.90為陰性，0.90≤BI≤1.10為弱陽(yáng)性，BI＞1.10為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。

2 結(jié) 果

2.1 腦卒中患者ACA測(cè)定結(jié)果

131例腦梗死患者中，ACA陽(yáng)性53例，占40.46%，其中單純ACA IgG陽(yáng)性30例，占22.90%，ACA IgM陽(yáng)性16例，占12.21%，二者均陽(yáng)性7例，占5.34%；42例短暫性腦缺血患者中，僅 ACA IgG陽(yáng)性1例，占2.38%，與腦梗死組相比有顯著差異（P＜0.01）；51例腦供血不足患者僅ACA IgM陽(yáng)性1例，占1.96%，與腦梗死組相比有顯著差異（P＜0.01），與短暫性腦缺血組相比無差異（P＞0.05），以上兩組分別與正常對(duì)照組相比無差異（P＞0.05）；66例腦出血患者ACA陽(yáng)性8例，占12.12%，其中單純ACA IgG陽(yáng)性6例，占9.09%，ACA IgM陽(yáng)性2例，占3.03%，顯著低于腦梗死組（P＜0.01），但卻高于其他兩組和正常對(duì)照組（P＜0.05）?？梢?，腦梗死患者的ACA陽(yáng)性率顯著高于非腦梗死患者。所有研究對(duì)象均未檢出ACA IgA陽(yáng)性者。結(jié)果見表1。

表1 腦卒中患者ACA測(cè)定結(jié)果

2.2 ACA陽(yáng)性與缺血性腦卒中的年齡和梗死灶之間的關(guān)系

我們的研究發(fā)現(xiàn)，在131例腦梗死患者中，年齡在34歲以下的12例患者ACA均陽(yáng)性。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)多灶梗死的ACA陽(yáng)性率為50.9%，較單灶梗死的陽(yáng)性率26.8%高，二者比較有顯著性差異（P＜0.05）。提示年齡因素參與了腦卒中的發(fā)病，對(duì)年齡較輕的ACA陽(yáng)性者應(yīng)引起重視，積極預(yù)防。

2.3 對(duì)腦梗死患者發(fā)病后第1、第2、第3和第4周分別檢測(cè)ACA，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間的變化，ACA陽(yáng)性例數(shù)逐漸減少，陰性率逐漸增加。將第1周的結(jié)果與第2、第3和第4周結(jié)果進(jìn)行比較，除第2周無差異外（P＞0.05），第3和第4周均有顯著性差異（P＜0 01），推測(cè)ACA量的變化與腦梗死的轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)，即ACA血中含量的減少與病情的發(fā)展呈正相關(guān)，病初含量高，此后逐漸減少，同時(shí)我們的研究還發(fā)現(xiàn)，ACA IgA在血液中的含量低，與腦卒中未見必然聯(lián)系。

2.4 對(duì)131例腦梗死患者在住院期間和出院后2年內(nèi)進(jìn)行隨訪，回訪中共再發(fā)腦梗死23例，其中第一次發(fā)病ACA陽(yáng)性的55例有17例再發(fā)腦梗死，ACA陰性的74例有2例再發(fā)腦梗死。ACA陽(yáng)性的腦梗死患者出院2年內(nèi)腦梗死的再次發(fā)病率為30.91%，遠(yuǎn)較ACA陰性患者的再次發(fā)病率2.70%為高（P＜0 01）。ACA陽(yáng)性再發(fā)腦梗死的例數(shù)與ACA陰性的再發(fā)腦梗死例數(shù)相比有顯著性差異（P＜0.01）。

3 討 論

3.1 ACA具有抗磷脂活性，可與磷脂的負(fù)電或中性部分結(jié)合，而磷脂是細(xì)胞、許多凝血因子、神經(jīng)元髓鞘等的主要成分。ACA作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞、血小板和神經(jīng)元膜上的磷脂抗原并與之結(jié)合，改變其細(xì)胞結(jié)構(gòu)，影響細(xì)胞功能，可引起包括偏頭痛、血小板減少、自發(fā)性流產(chǎn)、網(wǎng)狀青斑、肺動(dòng)脈高壓、復(fù)發(fā)性深靜脈血栓形成、多發(fā)性腦梗死和脫髓鞘病等一系列臨床綜合征。ACA與多數(shù)帶負(fù)電荷的磷脂如磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇等均有交叉反應(yīng)，而與帶兩性電荷的磷脂如磷脂酰乙醇胺、神經(jīng)鞘磷脂等則無交叉反應(yīng)。近年的研究認(rèn)為，ACA可能與遺傳有關(guān)[1]。

3.2 一般認(rèn)為多種機(jī)制參與了血栓形成的過程[2]，ACA引起血栓形成的機(jī)制可能是：②ACA與血小板膜磷脂結(jié)合，誘發(fā)免疫反應(yīng)，導(dǎo)致血小板膜損傷；②ACA抑制PGI2活性和纖維蛋白原降解，使纖溶系統(tǒng)激活；③ACA選擇性地作用于血小板或血管內(nèi)皮上的磷脂，抑制花生四稀酸的釋放，使PGI2生成受抑制，從而促進(jìn)了血小板的聚集；④ACA的IgG部分影響激活的蛋白C（PrC）活性，從而導(dǎo)致PrC抗血凝功能的缺陷，使血液處于高凝狀態(tài)，促進(jìn)血栓形成；⑤當(dāng)凝血酶原轉(zhuǎn)化成凝血酶時(shí)，需要凝血酶原激活物（包括磷脂、凝血因子Ⅱ、Ⅴ、鈣離子等）的激活，而ACA針對(duì)激活復(fù)合物中的磷脂發(fā)生反應(yīng)，使磷脂活性喪失，凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟笗r(shí)間延長(zhǎng)，導(dǎo)致血栓形成[3]。ACA的這些特征可能與血栓性疾病有關(guān)，對(duì)其確切機(jī)制的深入研究，有可能闡明腦血管病新的發(fā)病機(jī)制。

3.3 近年來的研究提示，自身免疫可能對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展起重要作用，用免疫學(xué)方法可以復(fù)制出類似人類動(dòng)脈粥樣硬化的動(dòng)物模型。據(jù)此，Poston及Klimona提出了腦動(dòng)脈粥樣硬化的免疫損傷學(xué)說。另外，在動(dòng)脈粥樣硬化及高血壓的患者體中也檢出了多種自身抗體。由于動(dòng)脈粥樣硬化是多種急性腦血管病的共同病理基礎(chǔ)和主要原因，所以腦出血的患者中也會(huì)有ACA陽(yáng)性的患者，我們檢測(cè)到腦出血患者的ACA陽(yáng)性率為10.29%，但大大低于腦梗死組。ACA是血液中獲得性免疫球蛋白的一種，主要為IgG、IgM。ACA中同型IgG比同型IgM陽(yáng)性率高，文獻(xiàn)報(bào)道為82%對(duì)11%，一致率為7%[4]。我們的檢測(cè)結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)。

3.4 本文通過對(duì)血栓性腦梗死患者與腦出血、短暫性腦缺血、腦供血不足及健康對(duì)照者的觀察認(rèn)為，ACA與血栓形成關(guān)系密切，ACA陽(yáng)性患者血栓發(fā)生率高，檢測(cè)ACA可以是血栓性腦梗死發(fā)生的高危人群的篩選試驗(yàn)，同時(shí)也為進(jìn)行早期預(yù)防性干預(yù)提供了可能。隨著病情轉(zhuǎn)歸，腦梗死患者ACA陰轉(zhuǎn)率也明顯增高，說明ACA與腦梗死的轉(zhuǎn)歸也密切相關(guān)。通過回訪資料顯示，腦梗死患者ACA陽(yáng)性者2年再發(fā)率與陰性者腦梗死再發(fā)率對(duì)比有顯著性差異，說明ACA陽(yáng)性的腦梗死患者遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)率高。這就為腦梗死患者的轉(zhuǎn)歸找到一種可能的預(yù)測(cè)指標(biāo)，即將ACA陽(yáng)性患者作為遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)的高危人群進(jìn)行干預(yù)。本研究還發(fā)現(xiàn)，年齡偏輕的腦梗死患者，ACA陽(yáng)性率明顯增高，表明ACA參與了該類患者的致病過程。目前認(rèn)為血栓前狀態(tài)與青壯年腦卒中關(guān)系甚大，如無明顯原因，特別是缺乏心原性栓塞時(shí)，有早發(fā)腦卒中家族史或反復(fù)缺血史者，均應(yīng)做ACA檢查。我們對(duì)ACA陽(yáng)性的腦梗死患者，已試用抗凝治療，以求降低腦梗死的發(fā)生率，效果如何，有待積累更多的研究資料證明

[1] Levine SR. Recurrent stroke and thrombo-oculusive events in the antiphospholipia syndrome [J]. Ann Neurol,1995,38(1):119.

[2] 田錦勇.抗心磷脂抗體與缺血性腦血管病的關(guān)系[J].貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2003,28(3):219-222.

[3] 馬金棟,邰俊榮,高穎,等. 急性冠脈綜合征患者抗心磷脂抗體檢測(cè)的臨床意義[J]. 中華急診醫(yī)學(xué)雜志,2006,15(10):933-935.

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