王吉欣,張艷華

(北京大學臨床腫瘤學院北京腫瘤醫(yī)院暨北京市腫瘤防治研究所,北京 100142)

99Tcm-MDP作為一種有效的骨顯像劑,在臨床已應用多年,但99Tcm-MDP注入體內(nèi)后,全身放射性本底很高,需等待2～3 h本底下降后,才能進行骨顯像。懷疑是由于99Tcm-MDP放化純度偏低導致。薄層色譜(TLC)“一條(onestrip)”法[1-2],可以在一條硅膠板上將主產(chǎn)品及多種雜質(zhì)如游離锝、锝錫膠體及可能存在的相對分子質(zhì)量相差較大的其他雜質(zhì)分離清楚后,按組分分段測定放射性,并計算放化純度。此“一條”法曾用于檢測99Tcm-PYM,具有分離組分準確、可信,分離效果較好的優(yōu)點。故于2002年采用此法試測由原子高科股份有限公司(京原)提供的99Tcm-MDP,用傳統(tǒng)的放射性自顯影(Radioautography,簡稱自顯影)觀察斑點,按锝錫膠體、標記物、游離锝分離清楚的三段,分別刮板測放射性,并計算其放化純度為26%。2008年采用免洗膠片自顯影法,檢查99Tcm-MDP等6種常見锝藥物用此“一條”法的分離效果,并定性估測99Tcm-MDP的放化純度。2009年用同法復查3種锝藥物,目的是試用一種方法測定多種锝藥物,達到放化純度檢測的規(guī)范化和統(tǒng)一化。

1 實驗材料

2008 年 用99Tcm-MDP、99TcmO4-、99Tcm-DTPA 、99Tcm-EC 、99Tcm-MIBI 和99Tcm-MAA 6種藥物由北京欣科思達醫(yī)藥科技有限公司(簡稱京欣)提供,2009年用99Tcm-DTPA和99Tcm-MIBI均為京欣產(chǎn)品,99Tcm-MDP為京原與京欣兩種產(chǎn)品,所有藥物注射液的pH均接近生理鹽水(4.5～7.0);SG硅膠板:青島海洋化工廠產(chǎn)品,切成1 cm×10 cm硅膠條備用;曝光用免洗膠片:ISP International Specialty Products Inc提供,切成1 cm×10 cm;其他化學試劑均為北京化工廠產(chǎn)品。

2 實驗方法

采用上行TLC法,固定相為硅膠條,流動相為V(10%醋酸銨)∶V(甲醇)=1∶1。用微量注射器分別取材料中所提供的6種锝藥物,每次2μL,分3～5次點樣,斑點直徑小于4mm,趁斑點未干時立即放入色譜槽的流動相中,展開約6 cm取出,用吹風機干燥后,將硅膠條與免洗膠片全部緊密接觸,用兩條比硅膠條大些的玻璃片夾住,并用橡皮筋纏緊,自顯影24 h,取下膠片,測量膠片上各斑點中心與原點的距離,計算R f,實驗重復4次,取平均值,以±s表示。

3 結 果

3.1 6種常見99Tcm藥物的自顯影

2008年,TLC“一條”法后的自顯影采用免洗膠片代替?zhèn)鹘y(tǒng)的X光膠片,共測定了6種锝藥物(含99TcmO4-),99Tcm-DTPA 測 2次,其余各測1次,結果示于圖1。由圖1可以看出,除99Tcm-MAA保留在原點未被分開外,另5種锝藥物的組分均可被分開。按在硅膠條上展開后,標記主要產(chǎn)物與原點間的距離由大到小依次為99TcmO4-、99Tcm-EC 、99Tcm-MDP 、99Tcm-DTPA(1為2009-05-13產(chǎn)品,2為2009-05-16產(chǎn)品)和99Tcm-MIBI,表明移動距離與標記物的相對分子質(zhì)量相關,也進一步說明此法可用于檢測多種锝藥物。按圖1計算99Tcm-MDP的Rf為0.7,肉眼觀察其放化純度偏低,但高于2002年測定結果;99Tcm-DTPA 2次自顯影的斑點顏色深淺不同,表明其放化純度有差異。

圖1 6種常用锝藥物的放射性自顯影

3.2 部分99Tcm藥物的復查

2009年用上述方法對99Tcm-MDP、99Tcm-DTPA和99Tcm-MIBI進行復查,每種藥物重復4次,其自顯影圖像示于圖2。由 4次圖像計算Rf,結果顯示,99Tcm-DTPA 和99Tcm-MIBI均與2008年檢測結果相同,分別為 0.78±0.02和0.39±0.03;99Tcm-MDP的檢測結果與2008年的相差甚大,其自顯影斑點始終在原點附近,Rf接近于零,其組分未被分開。

圖2 3種锝藥物的TLC自顯影

4 討論與建議

4.1 99Tcm標記藥物應先被分離完全,再定量測定其放化純度

上述結果表明,用自顯影法檢查 TLC,除99Tcm-MAA外,實驗所用“一條”法可以將锝藥物的各種組分分開,與Vera的圖示分析結果[3]相符合。此后按各組分分段檢測放射性計數(shù),進而可定量計算藥物的放化純度。

4.2 即使在藥盒保質(zhì)期內(nèi),也應在標記完成后檢測其放化純度

2002年和2008年99Tcm-MDP的放化純度都偏低,但其組分可以分開,而2009年觀察到組分未分開,這可能是由于99Tcm-MDP是具有锝錫膠體特性的復合物,因標記用MDP藥盒有效期為52周,藥盒內(nèi)氯化亞錫含量隨貯存時間增加而降低,因此可能導致標記產(chǎn)品的R f發(fā)生顯著變化。這種變化用兩條法(一條測游離锝,另一條測锝錫膠體)難以測出,且其所測定的放化純度通常＞90%。因此,即使在MDP藥盒貯存有效期內(nèi)進行標記,也要在標記后用于臨床前檢測其放化純度。

4.3 發(fā)展檢測99Tcm藥物放化純度的高效薄層色譜法

2005年Lep ri等[4]提出了改善分離效率的高效薄層色譜法(HPTLC法),此法采用顆粒度較小(2～10μm)的硅膠板和較小的點樣體積(0.1～0.2μL,點樣原點約1.0 mm);Gocan[5]和張玉奎[6]等認為,限制點樣原點尺寸是 TLC分離和精確定量的關鍵。與HPTLC法相比,本方法的不足之處是試樣溶液的放射性濃度較低,加樣總體積也較小,只有2 m L,雖然多次點樣,點樣直徑也未達到1.0mm的要求。

生產(chǎn)單位擁有眾多的專業(yè)放化人才、大量放射性濃度的锝藥物和檢測放化純度必需的儀器設備,有條件繼續(xù)研究此項工作?？梢员容^多種固定相與流動相的組合,找出最佳層析體系及簡便的操作方法,并進一步促進锝藥物放化純度檢測方法的規(guī)范化。

致謝:本工作承蒙中國人民解放軍總醫(yī)院附一院核醫(yī)學科歐陽巧洪主任、藩茹等同志長期來提供場所、試樣和北方免疫試劑研究所孟福英同志的大力支持,北京大學第一醫(yī)院核醫(yī)學科王榮福主任、張春麗副主任、閻萍同志及本院藥劑科、放療科物理組等有關同志的鼎力幫助,在此表示衷心感謝!

[1] 張艷華,黃天貴,黃俊星,等.99Tcm-PYM的制備、動物實驗及臨床研究[J].北京醫(yī)科大學學報,1997,29:150-152.

[2] Huang TQ,Zhang YH,Wang JX,et al.Pingyangmycin as a99mTCCarrier in Tumor Localization[J].Nucl Med Biol,1995,22:537-542.

[3] Vera DR.Radionuclide p roduction&radiopharmaceuticals[R/OL].[2008-01-31].http:∥dep ts.washington.edu/uwm ip/Week-5/Radiopharms.pdf.

[4] Lepri L,Cincinelli A.TLC Sorbents[C]//Cazes J.Encyclopedia of Chromatography:Vol.Ⅱ.2nd ed.New York:Tay lor&Francis G roup,2005:1 645-1 649.

[5] Gocan S.Sample app lication in TLC[C]//Cazes J.Encyclopedia of chromatography:Vol.Ⅱ.2nd ed.New York:Taylor&Francis Group LLC,2005:1 480-1 486.

[6] 張玉奎,張維冰,鄒漢法主編.分析化學手冊:第六分冊[M].第二版.北京:化學工業(yè)出版社,2000:118-125.