劉侃峰,張彩霞

(中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院 核醫(yī)學(xué)科,遼寧沈陽 110001)

吲哚美辛(Indometacin,IN)是一種非甾體抗炎藥,是最強(qiáng)的前列腺素(PG)合成酶抑制劑之一。它具有鎮(zhèn)痛、抗炎及解熱作用,緩解炎性疼痛作用強(qiáng),在臨床使用多年。近年來,有大量臨床研究顯示,該藥對(duì)肺癌、膀胱癌、食管癌、腸癌、肝癌等都有較好的療效[1-9]。本研究小組[10-13]曾將氚標(biāo)記的吲哚美辛引入到荷瘤小鼠體內(nèi),應(yīng)用放射自顯影(ARG)和液閃測量(LSC)技術(shù),觀察氚標(biāo)記的吲哚美辛在荷瘤鼠體內(nèi)的分布情況及其親腫瘤性的強(qiáng)弱,證實(shí)了氚標(biāo)記的吲哚美辛在荷瘤鼠的腫瘤組織中有明顯放射性濃聚,即吲哚美辛有較好的瘤組織親和性,且能在腫瘤細(xì)胞中存留較長時(shí)間,這為吲哚美辛發(fā)揮抗腫瘤作用提供了必要的條件。但由于3H的半衰期很長,不適于臨床應(yīng)用。故選擇臨床常用放射性核素131I標(biāo)記吲哚美辛,本工作擬將131I標(biāo)記的組胺-吲哚美辛(131I-His-IN)引入荷瘤鼠體內(nèi),以了解其對(duì)腫瘤的SPECT顯像效果。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及儀器

Infinia2 VC Hawkeye SPECT、OLYMPUS C-5050光學(xué)顯微鏡、OLYMPUS BX41數(shù)碼相機(jī):由中國醫(yī)科大學(xué)盛京醫(yī)院病理科提供。

吲哚美辛:化學(xué)純度98.5%,山西臨汾云鵬藥業(yè)公司提供;組胺-IN(His-IN):化學(xué)純度＞95%,委托沈陽藥科大學(xué)合成。131I-His-IN:放化純度＞95%,比活度＞185 GBq/g,由江蘇省原子醫(yī)學(xué)研究所同位素標(biāo)記實(shí)驗(yàn)室協(xié)同標(biāo)記。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

21只近交系Wistar大鼠(體重120±20 g,鼠齡約2個(gè)月,均為雌性,普通級(jí)),購于中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;荷Lewis肺癌模型鼠:購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所。

1.3 動(dòng)物模型復(fù)制與分組處理

將荷Lewis肺癌鼠處死,選擇生長良好的瘤組織,剪成小塊,用200目不銹鋼篩網(wǎng)摩擦,過濾制成單細(xì)胞懸液,用細(xì)胞計(jì)數(shù)板測得活瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)約為2×106/mL,接種于21只大鼠右腋皮下,每只0.6 mL。待瘤體直徑長至1.5～2 cm時(shí),隨機(jī)取6只大鼠進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn):先給予復(fù)方碘溶液,行甲狀腺封閉,每次1滴,每天3次,連續(xù)7 d,此后采用灌胃法,一次性分別給予370～2 220 kBq131I-His-IN,于 24、48、72 h 進(jìn)行SPECT顯像,確定最適劑量。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,將另外15只大鼠平均分為3組,同樣采用灌胃法一次性給予 1480 kBq131I-His-IN,分別于 24、48、72 h進(jìn)行SPECT顯像。

1.4 SPECT顯像

顯像前夜所有模型鼠均被禁食,可自由飲水。將大鼠俯臥位固定后應(yīng)用SPECT進(jìn)行掃描。掃描條件:高能平行孔準(zhǔn)直器,靜態(tài)平掃,矩陣為128×128;能峰為 364 keV;窗寬為20%;放大2.5倍。利用感興趣區(qū)(ROI)技術(shù)計(jì)算腫瘤部位的放射性計(jì)數(shù)。

1.5 病理檢查

取出腫瘤組織用10%中性甲醛緩沖液固定,石蠟切片、做HE染色。光鏡下觀察各治療組腫瘤細(xì)胞的壞死情況。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果與討論

2.1 SPECT顯像結(jié)果

荷瘤鼠灌服131I-His-IN后,其SPECT顯像結(jié)果示于圖1。大鼠各部位不同時(shí)間的放射性攝取及腫瘤與非腫瘤的放射性攝取比(T/NT)分別列于表1和表2。

由圖1可以看出,注藥后24 h時(shí),胃、膀胱、腫瘤區(qū)域放射性核素濃度較高,24 h后各區(qū)域濃度呈下降趨勢,但是腫瘤區(qū)域相對(duì)放射性濃度增高,表明吲哚美辛在胃及膀胱進(jìn)行攝取及排泄,而在腫瘤區(qū)域吲哚美辛有選擇性吸收及儲(chǔ)留作用。

由圖1還可以看出,各顯影區(qū)域放射性核素濃聚程度隨時(shí)間的延長而降低,注藥后24 h,腫瘤區(qū)域、胃區(qū)、膀胱區(qū)域顯影,其中以胃的放射性核素分布最為濃聚,膀胱和腫瘤區(qū)域次之;注藥后48 h,各顯像區(qū)域放射性核素分布較前明顯稀疏,腫瘤區(qū)域相對(duì)放射性核素分布濃聚超過膀胱區(qū)域;注藥后72 h,僅可見少量放射性核素分布于各區(qū)域,此時(shí)腫瘤區(qū)相對(duì)放射性核素濃聚度最高。這表明131I-His-IN主要經(jīng)泌尿系統(tǒng)排泄,在胃部組織中有一定程度攝取,而在腫瘤組織中有選擇性地吸收及儲(chǔ)留。

由表1可見,131I-His-IN在腫瘤、胃、膀胱的不同時(shí)間的放射性攝取具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p＜0.05。這也證實(shí)了圖1的顯像結(jié)果。

由表2可見,腫瘤與非腫瘤組織的 T/NT也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p＜0.05。說明131I-His-IN能釋放γ射線,使腫瘤組織能進(jìn)行 SPECT顯像。

圖1 荷瘤大鼠灌服131 I-His-IN后的SPECT顯像圖

表1 SPECT顯像各部位不同時(shí)間放射性計(jì)數(shù)(,n=5)

表1 SPECT顯像各部位不同時(shí)間放射性計(jì)數(shù)(,n=5)

注:各組間比較,p＜0.05

時(shí)間/h放射性計(jì)數(shù)腫瘤 胃 膀胱24 679.4±45.8 3 108.8±194.2 1 034±131.7 48 394.6±18.8 506.8±38.6 218.4±14.8 72 105.4±13.8 60.4±3.2 19.4±7.7

表2 不同時(shí)間腫瘤與非腫瘤的放射性計(jì)數(shù)比(T/NT,n=5)

2.2 腫瘤的病理檢查結(jié)果

肉眼觀察腫瘤組織可見腫瘤中心壞死組織隨時(shí)間延長而有所增多。光鏡下觀察病理結(jié)果示于圖2。由圖2可以看出,HE染色切片鏡下見腫瘤細(xì)胞有不同程度的壞死,各組腫瘤細(xì)胞的壞死部分隨時(shí)間推移而有所增多,并且出現(xiàn)了一定量的碎裂細(xì)胞,細(xì)胞碎裂數(shù)目逐漸增多。這也表明腫瘤區(qū)域?qū)N及131I-His-IN有選擇性吸收及儲(chǔ)留作用,131I-His-IN是將IN作為載體特異地聚集于腫瘤細(xì)胞內(nèi)或其表面,131I釋放出的射線(β粒子)的電離輻射生物效應(yīng)作用于腫瘤,殺傷或殺死腫瘤細(xì)胞,因此131I-His-IN具有雙重治療腫瘤作用。

圖2 荷瘤大鼠灌服131I-His-IN后腫瘤組織病理檢查結(jié)果a——服藥后 24 h;b——服藥后48 h;c——服藥后 72 h

4 結(jié) 論

131I-His-IN能選擇性在腫瘤組織濃集并長時(shí)間儲(chǔ)留,可以作為顯像和治療用放射性藥物進(jìn)行深入研究。

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