梁紅峰 梁 健

廣東省陽江市人民醫(yī)院檢驗科（529500）

目前，乙型肝炎病毒 （hepatitis B virus，HBV）感染的診斷主要依賴于血清特異性抗原抗體和HBV DNA檢測，外周血中HBV DNA是病毒復(fù)制活躍最直接和可靠的標(biāo)志，其含量能直接代表患者病毒血癥的水平。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）是檢測乙型肝炎病毒血癥的最敏感技術(shù)，應(yīng)用定量 PCR技術(shù)檢測病毒基因水平國內(nèi)已有報道[1]。我們采用熒光定量PCR方法檢測150例不同類型慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA基因含量，以探討輕、中、重度慢性乙型肝炎患者與病毒復(fù)制水平之間的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 病例選擇

研究對象為2007年8月至2008年8月陽江市人民醫(yī)院傳染科收治住院的不同類型慢性乙型肝炎患者150例，診斷符合2000年（西安）全國病毒性肝炎與肝病學(xué)術(shù)會議修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。其中慢性乙型肝炎輕度70例、中度60例、重度20例，男性126例，女性24例，年齡5～60歲，平均32.7歲，平均病程（6.0±5.4）年。

表1 慢性乙型肝炎患者肝損害程度與血清 HBV DNA含量的關(guān)系（±s）

表1 慢性乙型肝炎患者肝損害程度與血清 HBV DNA含量的關(guān)系（±s）

注：*與重度比較P＞0.05

組別 例數(shù) HBV DNA (拷貝/mL) HBV DNA≤103 104～106 ≥107慢性乙型肝炎(輕度) 70 17 44 16 5.57±1.80*慢性乙型肝炎(中度) 60 11 35 26 6.25±1.95*慢性乙型肝炎(重度) 20 5 17 7 5.71 ±1.89

1.2 檢測方法

HBV DNA基因含量檢測采用美國Biotronics公司生產(chǎn)的熒光標(biāo)記（Amp liSensor）HBV DNA定量試劑盒進(jìn)行定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測，檢測儀器采用美國Biotronics公司AG9600熒光定量PCR分析儀，以＜5×103拷貝/mL為陰性結(jié)果。為易于統(tǒng)計，均以檢測結(jié)果絕對值的對數(shù)值進(jìn)行比較。血清TBil、ALT、AST測定采用美國 BECKMAN COUT LER CX5PRO全自動生化分析儀測定，TBil＞17.1μmol /L、ALT＞ 40U/L、AST＞40U/L為異常，所有檢測及實驗均嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用t檢驗及χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 慢性乙型肝炎血清 HBV DNA基因含量與肝損害程度的關(guān)系

見表1。

2.2 血清 HBV DNA基因含量與肝功能的關(guān)系

見表2。

表2 慢性乙型肝炎血清 HBV DNA基因含量與肝功能的關(guān)系（±s）

表2 慢性乙型肝炎血清 HBV DNA基因含量與肝功能的關(guān)系（±s）

注:各組間比較無明顯差異，TBil組、ALT組、AST組，P＞0.05

HBV DNA(拷貝/mL) 例數(shù) TBil(μmol /L) ALT(U /L) AST(U /L)≤103 23 42.00±56.79 222±343 137±220 104～106 86 38.22±54.02 259±326 204±335≥107 41 28.41±39.00 335±447 218±278合計 150 36.13±50.73 274±368 196±301

3 討 論

在我國HBV慢性感染者大約占10%，是慢性肝炎、肝硬化、肝癌發(fā)生的主要原因。而 HBV感染傳統(tǒng)的血清學(xué)診斷指標(biāo)多采用ELISA法檢測，它實際檢測的是人體對HBV的免疫反應(yīng)狀態(tài)，該方法除敏感性較PCR低外，而熒光定量PCR方法則是檢測 HBV DNA的基因含量，更準(zhǔn)確靈敏、真實地反映了HBV的感染狀態(tài)和復(fù)制情況，對于乙型肝炎的臨床診斷、治療方案的選擇和療效評價均具有較重要的指導(dǎo)作用[3]。文獻(xiàn)報道檢測血清HBV DNA含量，能較好地反映HBV感染者的病毒血癥水平和傳染性強(qiáng)弱程度，本研究150例慢性乙型肝炎雖然有的病例血清HBeAg陰性，但部分患者有高水平的HBV DNA，提示有活躍的病毒復(fù)制[4]。對于血清HBeAg陰性、抗-HBe陽性，而HBVDNA高水平、肝功能異常的患者在臨床上應(yīng)引起足夠的重視，因此類患者常存在HBV持續(xù)活躍復(fù)制，且與乙型肝炎慢性化、病變活動或重型化等有關(guān)[5,6]。血清HBV DNA含量與慢性乙型肝炎病情輕重的關(guān)系仍不十分清楚。國內(nèi)報道，慢性乙型肝炎患者中隨著肝損害程度的加重（依次為輕度、中度、重度），其HBV DNA基因含量逐漸下降，認(rèn)為患者病情越重病毒復(fù)制水平越低[7,8]。本研究結(jié)果顯示，慢性乙型肝炎輕度、中度血清HBV DNA基因含量與慢性乙型肝炎重度比較，無明顯差異，未發(fā)現(xiàn)慢性乙型肝炎患者隨肝損害程度的加重HBV DNA基因含量逐漸下降的現(xiàn)象。本文研究結(jié)果顯示血清HBV DNA基因含量與血清TBil、ALT、AST水平無相關(guān)性，即血清HBV DNA的復(fù)制水平與肝臟的炎癥程度無關(guān)，提示機(jī)體對HBV的免疫應(yīng)答是造成肝組織破壞和肝功能損害的主要機(jī)制，而HBV并不直接導(dǎo)致肝臟細(xì)胞病變。

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