王亞平，周麗雅（.德惠市中醫(yī)院，吉林德惠；.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林長(zhǎng)春307）

二參湯對(duì)大鼠心肌缺血抗脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的保護(hù)作用

王亞平1，周麗雅2
（1.德惠市中醫(yī)院，吉林德惠；2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林長(zhǎng)春130117）

目的利用垂體后葉素腹腔注射制造大鼠心肌缺血模型，觀(guān)察二參湯對(duì)大鼠心肌缺血的保護(hù)作用。方法將60只Wistar大鼠分為正常對(duì)照組、模型組、二參湯低、中、高劑量組、腸溶阿斯匹林組，觀(guān)察二參湯對(duì)各組大鼠心電圖、血清及心肌組織丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）活力的影響。結(jié)果二參湯可以對(duì)抗垂體后葉素腹腔注射造成大鼠心肌缺血損傷的心電圖ST段異常升高數(shù)減少，血清及心肌組織MDA、NO、NOS的含量明顯下降，SOD活力顯著升高。結(jié)論二參湯對(duì)大鼠心肌缺血有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抗脂質(zhì)過(guò)氧化反映有關(guān)。

二參湯；心肌缺血；抗脂質(zhì)過(guò)氧化；大鼠

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)中藥二參湯對(duì)大鼠心肌缺血抗脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的保護(hù)作用的研究，觀(guān)察二參湯對(duì)各組大鼠心電圖、血清及心肌組織丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）活力的影響，以驗(yàn)證二參湯對(duì)大鼠心肌缺血的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與藥物Wistar大白鼠60只，體重250～300 g，8～10周齡，雄性，購(gòu)自長(zhǎng)春開(kāi)發(fā)區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。二參湯（黃芪、黨參、丹參、川芎、降香、麥冬、五味子、木香、薤白、三七、水蛭、甘草），本院制劑。垂體后葉素、ATP酶測(cè)試盒、MDA、SOD、NO、NOS測(cè)試盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法將大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只：正常對(duì)照組，用10mL／kg蒸餾水灌胃；模型組，用10 mL／kg蒸餾水灌胃；二參湯低、中、高劑量組，用濃度分別為50，200，400 g／L的二參湯10mL／kg灌胃；腸溶阿斯匹林組，用濃度為3.33 g／L的腸溶阿斯匹林10mL／kg灌胃。連續(xù)灌胃14 d后，除正常對(duì)照組外，其余5組大鼠用垂體后葉素20 U／kg腹腔注射造成心肌缺血模型。各組在給與垂體后葉素前后均描記心電圖。24 h后全部大鼠用20%烏拉坦10 mL／kg腹腔注射麻醉，進(jìn)行指標(biāo)測(cè)定。

1.3 指標(biāo)測(cè)定（1）麻醉后，將大鼠仰臥位固定，四肢皮下插入針狀電極及胸前電極，每只大鼠先做心電圖。各組動(dòng)物均記錄正常Ⅱ?qū)?lián)，測(cè)定用垂體后葉素ST段異常偏移總毫伏數(shù)（∑ST）、每組出現(xiàn)ST段異常的動(dòng)物數(shù)及ST偏移的平均值，作為判斷心肌缺血程度和藥物療效的指標(biāo)。（2）造模成功后，剖腹，自腹主動(dòng)脈無(wú)菌取血，在4℃下3 000 r／min離心10 min，分離血清置于－70℃冰箱待測(cè)。（3）模型成功后，大鼠于腹主動(dòng)脈取血后立即冰面上快速取心肌組織，平行于冠狀溝均勻地將心室部分橫斷成5份，取其2份放入2 mL預(yù)冷4℃的生理鹽水中，用玻璃勻漿器制備心肌組織勻漿鏡下觀(guān)察到細(xì)胞磨破，取10%勻漿上清加生理鹽水，按1∶9制成10%勻漿液，3 500 r／min離心15min，取上清液，－70℃凍存作相關(guān)檢測(cè)。（4）大鼠處死后，取其余心肌組織進(jìn)行病理學(xué)檢查。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所有數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS 11.0軟件包處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，所得數(shù)據(jù)作方差齊性試驗(yàn)后作配對(duì)t檢驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 二參湯對(duì)心肌缺血大鼠的心電圖ST段偏移的影響見(jiàn)表1。

表1 二參湯對(duì)心肌缺血大鼠Ⅱ?qū)?lián)ST偏移的影響（ˉx ±s，n＝10）

2.2 二參湯對(duì)心肌缺血大鼠血清SOD、MDA、NO、NOS的影響見(jiàn)表2。

2.3 二參湯對(duì)心肌缺血大鼠心肌組織SOD、MDA、NO、NOS的影響見(jiàn)表3。

表2 二參湯對(duì)心肌缺血大鼠血清的影響（ˉx±s，n＝10）

表3 二參湯對(duì)心肌缺血大鼠心肌組織的影響（ˉx±s，n＝10）

3 討論

垂體后葉素誘發(fā)的心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ蛷V泛應(yīng)用于篩選抗心肌缺血藥物的研究。垂體后葉素能收縮冠狀動(dòng)脈，引起心肌缺血，同時(shí)能收縮全身小血管，使心肌耗氧增加，心電圖表現(xiàn)為ST－T改變和心律失常等。同時(shí)心肌缺血導(dǎo)致細(xì)胞損傷時(shí)，心肌可釋放或反射性引起腎上腺素釋放大量?jī)翰璺影?，其釋放與梗死嚴(yán)重性及過(guò)程相關(guān)，進(jìn)一步加重心肌缺血損傷。

MDA是氧自由基引發(fā)的生物膜不飽和脂肪酸過(guò)氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物，對(duì)組織有損傷作用［1］。而MDA為脂質(zhì)過(guò)氧化物的代謝產(chǎn)物，其含量在一定程度上反映組織細(xì)胞損傷的程度。超氧化物歧化酶（SOD）作為一種抗氧化酶，有助于清除氧自由基，阻斷脂質(zhì)過(guò)氧化連鎖反應(yīng)，但在清除自由基的過(guò)程中SOD活性卻顯著下降。因此，通過(guò)自由基的生成和清除兩方面的檢測(cè)，可以推斷出缺血的損害程度。一氧化氮（NO）作為一種重要的神經(jīng)介質(zhì)、分子信使和細(xì)胞功能調(diào)節(jié)因子，廣泛參與了體內(nèi)血管功能調(diào)節(jié)、神經(jīng)傳遞、炎癥免疫反應(yīng)等機(jī)體眾多生理活動(dòng)和病理過(guò)程［2］。NOS作為NO合成的限速酶，是調(diào)節(jié)NO含量的最重要環(huán)節(jié)。NO過(guò)多可直接影響鐵蛋白的功能、能量代謝，并對(duì)基因產(chǎn)生毒性作用，抑制DNA和蛋白質(zhì)的合成，從而表現(xiàn)出強(qiáng)烈的細(xì)胞毒性作用，與缺血損傷的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

從本實(shí)驗(yàn)看，二參湯低、中、高劑量組均可顯著升高心肌缺血大鼠血中SOD含量，降低MDA含量，表明二參湯可通過(guò)提高機(jī)體抗氧化能力，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物形成，達(dá)到保護(hù)心臟缺血再灌注損傷的作用。二參湯組大鼠血清及心肌組織NO、NOS含量均明顯低于正常對(duì)照組。證明本藥可有效的阻止大鼠心肌缺血后血清及心肌組織NO、NOS含量的升高，該方可能通過(guò)其抗氧自由基作用，改善線(xiàn)粒體功能而改善心肌組織的能量代謝，使蛋白激酶活性升高，從而使NOS磷酸化，活性降低，使NO的合成減少，起到保護(hù)心肌組織的作用。

［1］Schmidley JW.Free radical incentral nervous system，Ischemia Stroke.1990，21（7）：10-86.

［2］AlessandriB，Bullock R.Glutamate and its receptors in the path ophusiology of brain and spinal cord injuries，Progr Brain Res.1998，116：303.

R285.5

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