龔考玲，許宏偉，劉衛(wèi)平

（1.湖南石門縣人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，湖南 常德 415300；2.中南大學(xué)湘雅一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，湖南 長(zhǎng)沙 410008）

動(dòng)脈粥樣硬化（ Atherosclerosis，AS）是心腦血管疾病的共同病理基礎(chǔ)，是危害人類健康的最嚴(yán)重疾病之一，其患病率和死亡率均居各類疾病之首。探討AS的發(fā)病機(jī)理，從而更有效地防治AS是世界各國(guó)共同關(guān)注的重大課題。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的認(rèn)識(shí)不斷深入，抗動(dòng)脈粥樣硬化的治療方法和治療藥物均取得了較大的進(jìn)展，但療效滿意的阻止AS進(jìn)展的藥物尚未發(fā)現(xiàn)。大量研究證明中醫(yī)藥在防治AS方面有明顯的臨床療效，其作用機(jī)制通過多靶點(diǎn)而實(shí)現(xiàn)。本研究采用食餌性動(dòng)脈粥樣硬化家兔為受試對(duì)象，觀察中藥復(fù)方血脈健對(duì)血脂及血管病理形態(tài)學(xué)的影響。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康日本大白耳兔50只，體重1.5～2 kg，雌雄各半，分籠喂養(yǎng)，室溫18～22 ℃，自由攝食、飲水，購(gòu)于武漢市萬千佳實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖有限公司，動(dòng)物合格證SCXK（鄂）2004-0006。

1.2 主要藥品及試劑

血脈?。河牲S精、山茱萸、澤瀉、三七等組成，藥材購(gòu)自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，經(jīng)鑒定后得水煎液備用；阿托伐他汀鈣：Pfizer Ireland Pharmaceuticals生產(chǎn)，輝瑞制藥有限公司進(jìn)口分裝，規(guī)格: 20 mg/粒，產(chǎn)品批號(hào)：95837030；牛血清白蛋白： Roche公司，批號(hào)：20082012；卵血清白蛋白: Sigma公司；膽固醇：北京鼎國(guó)生物技術(shù)有限責(zé)任公司；豬油：由市售新鮮豬板油煉制而成；蛋黃粉：安徽毫州市眾意蛋業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)；總膽固醇（TC）試劑：Roche公司；甘油三脂（TG）試劑：Roche 公司；高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）試劑: Roche公司。

1.3 高脂飼料配方

高脂飼料：按普通飼料79%、膽固醇1%、豬油5%、蛋黃粉15%比例配制，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心加工成高脂顆粒飼料備用。普通飼料：玉米20%、麩皮22%、豆粕18%、苜蓿草粉38%、磷酸氫鈣1.5%、食鹽0.5%。

1.4 分組及造模方法

將健康日本大白耳兔50只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組（10只）和造模組（40只）?？瞻讓?duì)照組予基礎(chǔ)飼料飼養(yǎng)，不進(jìn)行任何處理；造模方法參照文獻(xiàn)[1]，通過高脂飼料喂養(yǎng)及血管內(nèi)皮細(xì)胞免疫損傷復(fù)制兔動(dòng)脈粥樣硬化模型，以高脂飼料飼養(yǎng)，120 g/d，不足部分補(bǔ)充基礎(chǔ)飼料，自由飲水，在造模的第1天從兔耳緣靜脈注射牛血清白蛋白進(jìn)行免疫刺激（25 mg/kg，1次/w，共注射3次），同時(shí)用卵清白蛋白進(jìn)行皮下注射（2.5 mg/kg，1次/2d，共注射5次）。模型復(fù)制成功的家兔隨機(jī)分為3組，即模型組、阿托伐他汀組、血脈健組，每組10只。

1.5 給藥方法

分組后開始灌胃給藥，CG和MG予冷開水灌胃，AG和XG組給予相應(yīng)的藥物灌胃，1 次/d，灌胃體積5 mL/kg，灌胃療程1月。用藥劑量阿托伐他汀0.45 mg/（kg·d），血脈健劑量0.4 g/（kg·d）。

1.6 觀察指標(biāo)及測(cè)定方法

分別于實(shí)驗(yàn)開始前第1天，實(shí)驗(yàn)開始后第60天和第90天末取血液標(biāo)本。禁食12 h，不禁水，分別從兔耳中動(dòng)脈采血2 mL，試管斜放，血液順管壁緩慢流入，防止溶血。待血液完全凝固、血塊收縮釋出血清后，3000 rmp離心15 min，收取上清液（血清）。采用酶比色法在MODULAR P800全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清總膽固醇（TC）、甘油三脂（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C），低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）由Friedewald公式（LDL-C=TC－HDL-CTG/2.2）計(jì)算所得。動(dòng)物由空氣栓塞法處死，迅速開胸，完整剝離主動(dòng)脈（從主動(dòng)脈起始部至髂總動(dòng)脈分叉處），清除外膜附著組織。主動(dòng)脈弓部分用生理鹽水沖洗干凈后，平鋪于濾紙上并攝像，用作肉眼觀察主動(dòng)脈內(nèi)膜面病變情況及斑塊形成情況，并用4%的多聚甲醛固定。常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚的切片，行蘇木素-伊紅（HE）染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 各組家兔血清TC、TG、HDL-C、LDL-C的水平

給藥前，與空白組比較，模型組、阿托伐他汀組和血脈健組TC、HDL-C和LDL-C含量均升高（P＜0.01），但三組之間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；TG在各組變化不明顯（P＞0.05）；如表1所示。

表1 給藥前各組家兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C

表1 給藥前各組家兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C

注：與空白組比較，▲示P≤0.01。

group n TCmmoL/L TGmmoL/L HDLmmoL/L LDL-CmmoL/L CG 10 1.47±0.47 1.07±0.32 0.42±0.14 0.56±0.21 MG 10 30.97±2.11▲ 1.26±0.39 5.23±1.38▲ 25.17±4.18▲AG 10 30.66±2.71▲ 1.21±0.56 5.42±1.27▲ 24.69±4.27▲XG 10 30.91±2.59▲ 1.18±0.48 5.18±1.34▲ 25.19±3.710▲

經(jīng)治療1個(gè)月后，模型組血脂四項(xiàng)變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；而阿托伐他汀組和血脈健組TC、HDL-C和LDL-C均下降，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），高于空白對(duì)照組（P＜0.01）；血脈健組與阿托伐他汀組各項(xiàng)指標(biāo)變化基本一致，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 治療1月后各組家兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C比較

表2 治療1月后各組家兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C比較

注 ：與模型組比較，★示P＜0.01；與空白組比較，▲示P ＜0.01。

groupn TCmmoL/L TGmmoL/L HDLmmoL/L LDL-CmmoL/L CG 10 1.43±0.35 0.99±0.28 0.46±0.16 0.52±0.16 MG 9 30.36±2.9▲ 1.22±0.35 5.21±1.31▲ 24.60±4.47▲AG 9 14.34±2.32★▲ 1.14±0.46 2.46±1.11★▲ 11.36±3.17★▲XG 9 13.28±2.08★▲ 1.15±0.34 2.25±0.95★▲ 10.51±3.62★▲

2.2 主動(dòng)脈弓病理形態(tài)學(xué)變化

空白對(duì)照組主動(dòng)脈弓內(nèi)膜光滑平整，未見粥樣斑塊及脂質(zhì)點(diǎn)；血管壁三層結(jié)構(gòu)清晰，血管內(nèi)皮完整，無增厚及粥樣斑塊形成，中膜可見梭形平滑肌細(xì)胞，彈力纖維層結(jié)構(gòu)清晰完整，外膜為薄層疏松結(jié)締組織。模型組動(dòng)脈內(nèi)膜粗糙、不平，可見大小不等的乳白色斑塊，部分可融合成片的大斑塊，重者整條主動(dòng)脈內(nèi)膜見彌散分布脂質(zhì)斑塊，以主動(dòng)脈起始部為重；動(dòng)脈內(nèi)膜明顯增厚，脂質(zhì)斑塊彌漫，內(nèi)有泡沫細(xì)胞大量積聚，內(nèi)皮下大量脂質(zhì)和泡沫細(xì)胞堆積，并可見破裂的斑塊，中層結(jié)構(gòu)紊亂，中膜平滑肌細(xì)胞排列紊亂，內(nèi)彈性纖維斷裂，排列紊亂，并有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。阿托伐他汀組和血脈健組較模型組病變減輕，以小片狀、條索狀斑塊散在于主動(dòng)脈起始部；血管內(nèi)膜略增厚，結(jié)構(gòu)基本完整，內(nèi)皮下僅見少量泡沫細(xì)胞，血管平滑肌細(xì)胞增生不明顯；中層內(nèi)彈力纖維膜連續(xù)，有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，外膜未見脂肪細(xì)胞。見圖1。

圖1 各組家兔主動(dòng)脈弓HE染色圖（×400）

2.3 主動(dòng)脈弓斑塊厚度及斑塊面積

正常組血管內(nèi)膜無斑塊；阿托伐他汀組和血脈健組斑塊面積和斑塊厚度低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與阿托伐他汀組比較，血脈健組斑塊厚度和斑塊面積差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

表3 各組家兔斑塊厚度及斑塊面積情況

表3 各組家兔斑塊厚度及斑塊面積情況

注：與模型組比較，★示P＜0.01。

group n 斑塊厚度(μm)斑塊面積(μm2)CG 10 0 0 MG 9 155.26±33.45 103497.12±36247.65 AG 9 129.05±41.30★ 71511.13±26379.40★XG 9 119.52±33.56★ 69170.82±28143.88★

3 討論

祖國(guó)醫(yī)學(xué)沒有動(dòng)脈粥樣硬化這一病名記載，一般認(rèn)為屬“血瘀”、“真心痛”、“眩暈”、“胸痹”等范疇?！端貑枴け哉摗吩疲骸靶谋哉?，脈不通”，“痹在于骨則重，在于脈則血凝而不流”,《金匱要略》載：“胸痹之病，喘急、咳唾、胸背痛、短氣、寸口脈沉而遲，關(guān)上小緊數(shù)……”，以上都符合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)高脂血癥和冠心病心絞痛及腦動(dòng)脈粥樣硬化臨床癥狀的描述。祖國(guó)醫(yī)學(xué)有關(guān)類似動(dòng)脈粥樣硬化治療的論述也很多，《素問·至真要大論》中提出：“疏其血?dú)?，令其調(diào)達(dá)”?！督饏T要略》曰：“胸痹不得臥，……瓜蔞薤白半夏湯主之”。朱丹溪重視解郁散結(jié)，創(chuàng)氣、血、濕、痰、食、熱六郁之說。王清任創(chuàng)活血化瘀方劑血府逐瘀湯，專治“胸中血瘀證”。

現(xiàn)代中醫(yī)研究認(rèn)為，高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化屬痰、濕、濁阻、血瘀范疇，為肝腎不足，脾失健運(yùn)，痰瘀同病，主要表現(xiàn)為本虛標(biāo)實(shí)、虛實(shí)夾雜。本虛可累及心、脾、肝、腎四臟，為病之本，以痰瘀互阻為病之標(biāo)。正虛邪實(shí)相互影響，致使病變不斷發(fā)展。其病在血脈，根在臟腑。認(rèn)為腎精虧損，淤血阻絡(luò)是本病的基本病機(jī)[2]；脾失健運(yùn)，痰凝瘀停是該病的病機(jī)關(guān)鍵[3]；亦有認(rèn)為肝郁氣滯，痰濁內(nèi)生之病機(jī)[4]。對(duì)AS防治的辨證論治原則一般歸納為健脾益氣、滋陰養(yǎng)血、補(bǔ)益肝腎以治其本，活血化瘀，軟堅(jiān)散結(jié)，消食化痰，通脈化濁以治其標(biāo)。張大寧[2]等于70年代末首先提出的補(bǔ)腎活血法治療AS取得一定的療效；趙學(xué)軍[3]等運(yùn)用健脾益氣化痰法在一定程度上阻抑家兔早期AS病變的形成；趙玉霞[5]等注重活血化瘀通絡(luò)，以水蛭為主藥活血化瘀，對(duì)AS患者有明顯的療效；張柏麗[4]等運(yùn)用調(diào)肝導(dǎo)濁法治療AS取得明顯的療效。筆者認(rèn)為，隨著人們生活水平的提高，青少年肥胖，高脂血癥越來越多，AS發(fā)病年齡逐漸前移。青少年素體陽盛，加之恣飲酒漿，喜食辛辣厚味，則易形成胃腸積熱，燥熱內(nèi)結(jié)，以致火盛水虧，津液不生，損及脾陰，而胃陽獨(dú)旺。滯熱積聚，熏蒸上炎，損及心陰，陰血虧虛，心神失養(yǎng)而致心悸胸悶。加之所食之水谷化生精微過多，脾之運(yùn)化功能負(fù)荷過重，常會(huì)引起濕困脾陽，脾失健運(yùn)，水谷肥甘之物無以化生氣血精微，脾之清氣不能化濁，血中脂質(zhì)增高，阻遏經(jīng)行，脈絡(luò)不暢，心絡(luò)阻于痰濁。胃強(qiáng)脾弱，痰瘀阻絡(luò)是其病機(jī)關(guān)鍵，治宜平胃健脾，化痰祛瘀，乃組建血脈健處方，方中黃精、云苓補(bǔ)脾益氣，黃連、漏蘆瀉胃火，同時(shí)黃精與山茱萸配伍補(bǔ)益肝腎，使脾陽得腎陽溫煦而運(yùn)化水谷精微和水濕，脾土賴腎水之濡養(yǎng)而健運(yùn)不息。郁金辛散苦泄，能芳香解郁，涼血清心，宣化痰濁；澤瀉消痰、利水、泄熱之效；蒲黃、地龍化痰、祛瘀、通絡(luò)的作用，俱藥合用，標(biāo)本兼治，補(bǔ)瀉并施，行滯通脈。

本研究所用AS模型通過牛血清白蛋白和卵清蛋白免疫刺激損傷血管內(nèi)皮，再飼以高脂飼料而成，模型家兔主動(dòng)脈內(nèi)膜和基層均符合AS病理改變；總膽固醇和HDL-C、LDL-C均顯著升高，并且LDL-C升高幅度顯著高于HDL-C，甘油三酯變化不顯著，以上結(jié)果提示，該模型與Ⅱa型高脂血癥相似，符合AS主動(dòng)脈病理學(xué)變化特征[6]，可以用于AS的防治研究。該實(shí)驗(yàn)性AS模型經(jīng)血脈健治療1月后，對(duì)血脂和主動(dòng)脈斑塊有明顯的改善作用，0.4 g/（kg·d）的作用效果與0.45 mg/（kg·d）阿托伐他汀的作用效果基本一致，提示血脈健是一個(gè)治療AS的有效中藥復(fù)方，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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[3]趙學(xué)軍,等. 理脾化痰方抗家兔早期食餌性動(dòng)脈粥樣硬化癥實(shí)驗(yàn)研究[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2001,25(6):461-462.

[4]張柏麗.調(diào)肝導(dǎo)濁中藥對(duì)大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖及胞內(nèi)鈣離子影響的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2002,25 (2):25-27.

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