羅勇 林少華

（中山市第一人民醫(yī)院神經(jīng)外科 廣東中山 5284000）

眾所周知,腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移是血管依賴性的。腦膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)同樣也依賴于持續(xù)和廣泛的新生血管生成，而腦膠質(zhì)瘤又不斷刺激新生血管生成以保證其生長(zhǎng)。本研究采用免疫組化SP法檢測(cè)微血管密度MVD在腦膠質(zhì)瘤中央及外周的計(jì)數(shù)情況，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)進(jìn)行分析比較，探討微血管生成在腦膠質(zhì)瘤中央及外周的分布關(guān)系，為了解腦膠質(zhì)瘤侵襲性生長(zhǎng)的生物學(xué)行，并在以微血管為靶點(diǎn)的抗腦膠質(zhì)瘤的治療指導(dǎo)方面為提供臨床參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院從2005年至2009年經(jīng)病理證實(shí)為腦星型細(xì)胞瘤的石蠟標(biāo)本42例，其中Ⅰ級(jí)星型細(xì)胞瘤16例、Ⅱ級(jí)星型細(xì)胞瘤8例、Ⅲ級(jí)星型細(xì)胞瘤10例，Ⅳ級(jí)星型細(xì)胞瘤8例；男性27例，女性15例，男女比例為1.8：1。

1.2 免疫組織化學(xué)方法

本實(shí)驗(yàn)采用鏈霉素抗生物蛋白－過(guò)氧化酶免疫組織化學(xué)染色法，即S-P法。所用的CD34抗體以及SP試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。免疫組織過(guò)程中，以PBS置換一抗染色作為陰性對(duì)照，用已知的CD34染色陽(yáng)性的乳腺癌切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 血管內(nèi)皮細(xì)胞染色的判斷和MVQ計(jì)數(shù)

染色以在腫瘤間質(zhì)血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿出現(xiàn)棕褐色顆粒為陽(yáng)性，凡呈現(xiàn)棕褐色的單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞群均作為一個(gè)血管計(jì)數(shù)，管腔直徑>8個(gè)紅細(xì)胞的血管不計(jì)數(shù)。參照Niu等[1]的方法，在低倍鏡下（100×）全面觀察切片，尋找高血管密度區(qū)，然后在高倍視野內(nèi)（200×）計(jì)數(shù)微血管的數(shù)目。記錄3個(gè)視野內(nèi)的微血管數(shù)，取其平均值作為該病例的MVQ值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用配對(duì)樣品t檢驗(yàn)分析，以P＜0.01判斷為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MVD的計(jì)數(shù)

腦膠質(zhì)瘤中央?yún)^(qū)MVD為(25.84±4.11)，腦膠質(zhì)瘤外周部MVD為(42.13±5.50)，配對(duì)t檢驗(yàn)分析分析，2組數(shù)據(jù)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

表1 MVD在腦膠質(zhì)瘤中央?yún)^(qū)與外周部的t檢驗(yàn)分析(±s)

表1 MVD在腦膠質(zhì)瘤中央?yún)^(qū)與外周部的t檢驗(yàn)分析(±s)

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2.2 MVD在腦膠質(zhì)瘤中央?yún)^(qū)與外周部的分布關(guān)系

腦膠質(zhì)瘤中央?yún)^(qū)的微血管密度（MVD）明顯低于外周部。

3 討論

微血管密度（micro vessel density,MVD）是一個(gè)反映腫瘤小血管生成的重要指標(biāo)本[2]。采用對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞抗原的免疫組織化學(xué)技術(shù)染色進(jìn)行微血管定量的方法（即MVD測(cè)定），能較準(zhǔn)確地反映腫瘤的血管生成。在內(nèi)皮細(xì)胞的眾多標(biāo)記物中，抗人原始造血細(xì)胞抗原（CD34）單克隆抗體對(duì)淋巴細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞不存在交叉反應(yīng)，比Ⅷ因子和CD31更具敏感性和特異性，微血管染色較Ⅷ因子、CD31定位更準(zhǔn)確[3]。血管生成（angiogenesis）是指在原有微血管（毛細(xì)血管和小靜脈）的基礎(chǔ)上通過(guò)“出芽”方式形成新的毛細(xì)血管。實(shí)體瘤的生長(zhǎng)亦和成熟組織的生長(zhǎng)、重建、再生一樣伴隨著血管生成。腫瘤血管生成是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ),它不僅向腫瘤提供充足的營(yíng)養(yǎng),同時(shí)也向機(jī)體輸出腫瘤細(xì)胞,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的惡性性長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，所以腫瘤的血管生成與它的生物學(xué)行為息息相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：腦膠質(zhì)瘤組織中微血管染色呈棕褐色，清晰可辨，切片背景清晰，為準(zhǔn)確計(jì)數(shù)MVD提供保障。腦膠質(zhì)瘤中央?yún)^(qū)MVD為(25.84±4.11)，腦膜瘤外周部MVD為(42.13±5.50)，腦膠質(zhì)瘤中央?yún)^(qū)的微血管密度（MVD）明顯低于外周部,這也解析了腦膠質(zhì)瘤具有侵襲性生長(zhǎng)的特性。本實(shí)驗(yàn)對(duì)微血管生成在腦膠質(zhì)瘤中分布規(guī)律的研究結(jié)果，為了解腦膠質(zhì)瘤侵襲性生長(zhǎng)的生物學(xué)行，并在以微血管為靶點(diǎn)的抗腦膠質(zhì)瘤的治療指導(dǎo)方面為提供臨床參考。

[1]Niu XY,Wang ZR,Zhang YF,et al.Relationship between NOS expression and angiogesis in gallbladder carcinoma tissue[J].Fourth MilMed Univ,2003,24(3):265～268.

[2]Kerbel RS.Tumor angiogenesis,past,present and the near future[J].Carcinogenesis,2000,21:505～515.

[3]顧應(yīng)江,夏祥國(guó).缺氧誘導(dǎo)因子-1的表達(dá)與腦膜瘤血管生成的關(guān)系[J].國(guó)際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志,2006,35(5):402～405.