咪達(dá)唑侖(Midazolam)是一種苯二氮卓類藥物，臨床上常用于麻醉誘導(dǎo)的術(shù)前用藥和維持、診斷性或治療性操作的鎮(zhèn)靜等。咪達(dá)唑侖在強(qiáng)堿條件下不溶，因此臨床應(yīng)用時注射液采用其鹽酸鹽、口服制劑采用其馬來酸鹽。咪達(dá)唑侖鹽酸鹽顯弱酸性，文獻(xiàn)報道其水溶液具有共軛性質(zhì)，但沒有說明引起共軛現(xiàn)象的具體條件，因此在進(jìn)行藥物分析、藥物配伍及藥代動力學(xué)研究時常誤將咪達(dá)唑侖的共軛化物當(dāng)成其有關(guān)物質(zhì)[1～3]。

作者以高效液相色譜法為分析手段，考察了溶液pH值、放置時間以及溶液稀釋濃度對咪達(dá)唑侖共軛體系的影響。

1 實驗

1.1 試劑與儀器

咪達(dá)唑侖注射液(批號：090301，090508)，宜昌人福藥業(yè)有限責(zé)任公司；甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

高效液相色譜儀(配有Waters e2695進(jìn)樣系統(tǒng)、Waters 2489紫外可見檢測器、Empower色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng))，美國Waters公司；FE20型pH計，Mettler Toledo公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：CPS-2 HYPERSIL(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-緩沖溶液(0.1 mol·L-1磷酸與0.03 mol·L-1三乙胺等量混合，用0.1 mol·L-1氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至3.5)=65∶35，流速1.0 mL·min-1，檢測波長220 nm，柱溫40℃，進(jìn)樣量20 μL。

1.3 方法

(1)取咪達(dá)唑侖注射液(規(guī)格2 mL∶2 mg)調(diào)成不同pH值樣品若干份，均用流動相稀釋到0.5 mg·mL-1，放置3 h后測其pH值，然后采用HPLC法測定咪達(dá)唑侖的閉環(huán)物及開環(huán)物，并用歸一法計算含量。

(2)取咪達(dá)唑侖注射液(規(guī)格2 mL∶2 mg)，放置不同時間，然后采用HPLC法測定咪達(dá)唑侖的閉環(huán)物及開環(huán)物，并用歸一法計算含量。

(3)取不同規(guī)格咪達(dá)唑侖注射液，加入不同量的流動相得到不同稀釋濃度(以流動相與樣品體積比表示)樣品(表1)，終濃度均為0.5 mg·mL-1，放置3 h后測其pH值，然后采用HPLC法測定咪達(dá)唑侖的閉環(huán)物及開環(huán)物，并用歸一法計算含量。

表1 不同稀釋濃度樣品的配制

2 結(jié)果與討論

2.1 共軛體系的確定

實驗發(fā)現(xiàn)，咪達(dá)唑侖注射液的液相色譜圖中在相對主峰保留時間為0.6 min的地方出現(xiàn)一未知雜質(zhì)峰，其峰面積隨著條件的改變發(fā)生變化。采用HPLC-MS方法，測定該雜質(zhì)分子量為343，經(jīng)確認(rèn)為化合物Ⅱ，即咪達(dá)唑侖的開環(huán)物；主峰分子量為325，經(jīng)確認(rèn)為化合物Ⅰ，即咪達(dá)唑侖閉環(huán)物。說明咪達(dá)唑侖水溶液中確實存在共軛平衡體系(圖1)。這可能是因為咪達(dá)唑侖在酸性溶液中，會在4,5雙鍵處開環(huán)，形成相應(yīng)的開環(huán)物，并以開環(huán)和閉環(huán)的形式均衡存在于溶液中。

(Ⅰ)閉環(huán)物 (Ⅱ)開環(huán)物

2.2 pH值對共軛體系的影響(圖2)

由圖2可知，咪達(dá)唑侖在酸性條件下形成一個開環(huán)物與閉環(huán)物的動態(tài)平衡，pH值越大，開環(huán)物的含量越低，反之閉環(huán)物的含量越高，但開環(huán)物及閉環(huán)物的總含量基本不變。pH<2.5時，開環(huán)物的含量隨pH值的降低而快速上升；當(dāng)pH值接近5時，開環(huán)物完全轉(zhuǎn)化成閉環(huán)物。

圖2 pH值對共軛體系的影響

2.3 放置時間對共軛體系的影響(圖3)

由圖3可知，隨著放置時間的延長，咪達(dá)唑侖共軛體系由開環(huán)物向閉環(huán)物形式轉(zhuǎn)化；放置3 h后，開環(huán)物基本完全轉(zhuǎn)化為閉環(huán)物。

2.4 稀釋濃度對共軛體系的影響(圖4)

圖4 稀釋濃度對共軛體系pH值(a)和開環(huán)物含量(b)的影響

由圖4可知，稀釋濃度可以引起咪達(dá)唑侖溶液pH值的微小差異，由于咪達(dá)唑侖的共軛體系對pH值敏感，這個微小差異也可以破壞共軛體系的平衡，因此稀釋濃度越小，體系中開環(huán)物的含量越高，最高達(dá)6.91%，最低約0.14%。

3 結(jié)論

采用高效液相色譜法研究了咪達(dá)唑侖共軛體系。結(jié)果表明，咪達(dá)唑侖在水中以開環(huán)物和閉環(huán)物的共軛體系形式存在；隨著放置時間的延長，咪達(dá)唑侖共軛體

共軛體系逐漸由開環(huán)物向閉環(huán)物轉(zhuǎn)化,放置3 h后幾乎完全轉(zhuǎn)化為閉環(huán)物；溶液pH值增大時，開環(huán)物向閉環(huán)物轉(zhuǎn)化，當(dāng)pH值接近5時，幾乎都轉(zhuǎn)化為閉環(huán)物；反之溶液pH值降低時，閉環(huán)物向開環(huán)物轉(zhuǎn)化，當(dāng)pH<2.5時，開環(huán)物的含量隨pH值的降低而快速上升；不同規(guī)格樣品，稀釋濃度越小，共軛體系中開環(huán)物的含量越高。

參考文獻(xiàn)：

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