朱曉月，劉 虹，郝 彧，曾 森，張德芹，吳 帥

荷葉（Folium nelumbinis）為睡蓮科植物蓮（Nelumbo nucifera Gaertn）的干燥葉。夏、秋兩季采收，在中國湖南、湖北、浙江、江蘇等地均有廣泛的種植。荷葉中含有碳水化合物、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、無機鹽、生物堿、黃酮、精油、鞣質(zhì)等多種成分，其中生物堿和黃酮是荷葉的主要活性成分。2005版《中華人民共和國藥典》規(guī)定，荷葉藥材以荷葉堿為含量測定指標(biāo)，其含量不得低于0.10%。因此，為了了解現(xiàn)有市售荷葉藥材的合格率，筆者依據(jù)藥典，以荷葉藥材中荷葉堿為指標(biāo)成分，對24批市售荷葉藥材進行含量測定[1-3]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀：Agilent1100色譜系統(tǒng)（VWD檢測器）；數(shù)顯恒溫水浴鍋（HH-2，國華電器有限公司）；電子天平（METTLER TOLEDO AX-205）；微孔濾膜（0.45 μm）。

1.2 試藥 24批市售荷葉藥材（樣品保存于天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究中心藥學(xué)部，經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院郭俊華副研究員鑒定）；荷葉堿對照品（批號：121322-200301，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇（色譜純，天津市康科德科技有限公司），甲醇（分析純，天津協(xié)和昊鵬色譜科學(xué)技術(shù)有限公司），乙腈（HPLC/SPECTRO，TEDIA），三乙胺（分析純，天津市化學(xué)試劑三廠），冰醋酸（分析純，天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠），超純水（經(jīng)Millipore純水系統(tǒng)處理）。

2 方法與結(jié)果

荷葉藥材中荷葉堿的含量測定方法參考2005版中國藥典[1]。

2.1 對照品溶液的制備 取荷葉堿對照品適量，精密稱定，用甲醇配制成濃度為0.015 4 g/L的荷葉堿對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備 取荷葉藥材粗粉（過40目篩）約0.5 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，置恒溫水浴鍋上加熱回流2.5 h，放冷，用甲醇補足損失質(zhì)量，搖勻，微孔濾膜（0.45 μm）濾過，即得。

2.3 色譜條件色譜柱：PhenomsilC18（4.6mm×250mm，5 μm）；流動相：乙腈-水-三乙胺-冰醋酸（27∶70.6∶1.6∶0.78）；檢測波長：270 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取荷葉堿對照品適量，精密稱定，用甲醇配成系列濃度的對照品溶液。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，進樣量（X）為橫坐標(biāo)作圖，得荷葉堿回歸方程為Y=3.22X+12.02，r=0.999 8，線性范圍為 9.56×10-3～0.478 μg。

2.5 樣品測定 取對照品溶液5 μL，供試品溶液各20 μL，依次注入高效液相色譜儀，測定荷葉堿峰面積，按外標(biāo)一點法計算荷葉堿含量。見表1，圖1。

表1 樣品測定結(jié)果

圖1 荷葉堿對照品及荷葉藥材HPLC圖（1—荷葉堿）

由測定結(jié)果可見，在所測24個荷葉藥材樣品中，2個樣品合格，22個樣品不合格，合格率為8.3%。

3 討論

3.1 應(yīng)規(guī)范荷葉藥材的種植 實驗中測定的24批荷葉藥材，只有2批合格，合格率僅為8.3%。由此可見，目前市售荷葉藥材中荷葉堿含量普遍低于藥典規(guī)定。因此，為了保證荷葉藥材的質(zhì)量，應(yīng)建立符合GAP標(biāo)準(zhǔn)的荷葉種植基地，規(guī)?；⒁?guī)范化種植荷葉。

3.2 關(guān)于單一指標(biāo)成分含量測定的科學(xué)性 荷葉中含有多種生物堿類物質(zhì)，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，荷葉生物堿具有降脂減肥、抑菌、抗病毒、抗氧化等活性[4]。而荷葉堿只是荷葉總生物堿中的一個化學(xué)成分，荷葉堿的含量并不能全面代表荷葉藥材的質(zhì)量。雖然多指標(biāo)成分的含量測定[5]可能是比較有效的質(zhì)控途徑，但是缺少相關(guān)中藥化學(xué)對照品、荷葉中其他生物堿成分多含量較低的問題又使多指標(biāo)的測定較難實現(xiàn)；而且增加了中藥生產(chǎn)企業(yè)的檢測成本。因此筆者建議在荷葉藥材的含量測定中增加荷葉總生物堿的測定，從而更真實、全面的反映荷葉藥材的質(zhì)量。應(yīng)建立符合中醫(yī)藥特點的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系，指標(biāo)成分的含量測定結(jié)合大類成分的含量測定不失為一種經(jīng)濟有效的方法。

3.3 關(guān)于中藥的入藥形式 傳統(tǒng)的中藥入藥方式為不論其指標(biāo)成分（或活性成分）含量高低，均以處方中的藥材量入藥。藥材中指標(biāo)成分含量的波動勢必影響到中成藥的質(zhì)量。但作為藥品，必須要求其質(zhì)量穩(wěn)定、一致；但是作為中成藥原料的中藥材大都來源于生物，不管是野生的，還是栽培的，甚至是GAP基地生產(chǎn)的，其質(zhì)量不可能穩(wěn)定、一致。因此，應(yīng)該改變傳統(tǒng)觀念，提倡以中藥提取物的形式入藥（投料量按活性成分的含量計算），保證中成藥的質(zhì)量穩(wěn)定可控。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:195-198.

[2]朱秀萍,徐 翔.荷葉生物堿研究進展[J].中國藥房,2008,19(6):459-461.

[3]孔文琦,李嚴巍.荷葉活性成分及藥理活性研究進展[J].中藥信息與研究,2005,7(6):22-24.

[4]肖桂青,盧向陽,田 云，等.荷葉生物堿藥理作用的研究進展[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué),2006,(2):80-81.

[5]吳 昊,劉 斌,王 偉，等.HPLC法測定不同市售荷葉藥材中4種生物堿類成分的含量[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2008,31(7):479-481.