梁志洪

肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)是由M和B亞基構(gòu)成的雜化型二聚體，主要存在于心肌細(xì)胞的外漿層，是心肌酶譜中最有特異性的酶，從80年代起公認(rèn)為心肌酶學(xué)診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，應(yīng)用于急性心肌梗塞(AMI)的早期診斷［1，2］1979 年Gerhardt等人首次報(bào)道用免疫抑制原理測(cè)定CK同工酶，免疫抑制法以其快速、靈敏、定量且可進(jìn)行自動(dòng)分析等優(yōu)點(diǎn)適合常規(guī)檢測(cè)，隨著方法與試劑不斷改進(jìn)與完善。用免疫抑制法測(cè)定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)在國(guó)內(nèi)各實(shí)驗(yàn)室已廣泛使用，然而由于方法學(xué)的不完善以及其他可引起腦型肌酸激酶同工酶(CK-BB)升高的因素，臨床上常出現(xiàn)所檢測(cè)的CK-MB活性假性增高的現(xiàn)象，甚至還會(huì)出現(xiàn)CK-MB活性高于或相當(dāng)于總CK活性的情況［3］。我科為了進(jìn)一步了解免疫抑制法檢測(cè)CK-MB是否受標(biāo)本溶血的影響，用三組不同溶血標(biāo)本進(jìn)行分析比較，同時(shí)進(jìn)行游離血紅蛋白測(cè)定與CKMB的相關(guān)關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本選擇 本文資料根據(jù)我院2009年2月住院患者及健康體檢人員血清標(biāo)本90份。其中CK-MB活性高于總活性的30例患者血清、30例心肌梗死患者血清、30例健康體檢者血清。30例患者CK-MB活性高于總活性患者中男性21例，女性9例，平均48±15歲(6～80歲)。30例心肌梗死患者血清中男19例，女11例，平均47±14歲(6～78歲);對(duì)照血清標(biāo)本30份，均為本院健康體檢者(非孕)，平均45±11歲(20～76歲)。三組病例的年齡、性別經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 儀器和試劑 儀器美國(guó)貝克曼CX7，試劑為中生公司提供試劑盒，游離血紅蛋白按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》自配試劑。

1.3 方法 CK-MB速率法雙試劑，主波長(zhǎng)340 mm，副波長(zhǎng)410 mm，樣品量 10 μl，試劑量 A 液 200 μl，B 液 50 μl，反應(yīng)時(shí)間180 s，終點(diǎn)讀數(shù)為120 s，溫度37℃。游離血紅蛋白按《臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》［1］操作。

2 結(jié)果

三組病例檢查結(jié)果見表1。

表1 三組病例檢查結(jié)果比較

3 討論

CK由M和B兩個(gè)亞單位組成，組合成CK-BB，CK-MM，CK-MB三種同工酶，在細(xì)胞線粒體內(nèi)還有另一種同工酶，稱之為CK-Mt。CK-BB主要存在于腦、前列腺等器官，CK-MM主要存在于骨骼和心肌，CK-MB則主要存在于心肌，正常人血液中大部分是CK-MM，少量CK-MB，而CK-BB極少。

在急性腦外傷、癲癇時(shí)BB明顯增高，惡性腫瘤(如惡性組織細(xì)胞病)因胚胎化細(xì)胞產(chǎn)生BB增加，這些患者的血清在應(yīng)用M亞基的抗體封閉法測(cè)定CK-MB活性時(shí)，也可見所謂的“CK-MB”增高，但實(shí)際是BB增高。CK-BB、巨CK、線粒體CK以及某些CK的變異體都不會(huì)被M亞基的抗體封閉，這些均致CK-MB結(jié)果偏高。

免疫抑制法測(cè)定CK-MB活性的原理是，通過(guò)抗CK-M抗體抑制M亞基的活性，測(cè)定B亞基的活性，正常血清中CK-BB含量極微［3］，用一般的方法檢測(cè)不出，故將結(jié)果乘以2便可大致代表CK-MB的活性。顯然凡是可使CK-BB升高的疾病均可影響CK-MB的測(cè)定，使其假性增高。

由于免疫抑制法測(cè)得CK-MB/CK＞50%的患者血清CK總活性均＜200 IU/L，而電泳結(jié)果顯示CK-MB含量并不高，CK-BB含量明顯增高，說(shuō)明這些患者并無(wú)心肌損傷，而是存在心外器官損傷。所以在CK總活性不高，而免疫抑制法測(cè)得CK-MB明顯增高時(shí)有必要對(duì)CK同工酶進(jìn)行分析，以判斷CK-MB是否假性增高，排除非心肌來(lái)源的可能［4］。

本試驗(yàn)在免疫抑制法測(cè)得CK-MB/CK＞50%的標(biāo)本中，經(jīng)CK同工酶電泳進(jìn)一步分離后均出現(xiàn)CK-BB水平不同程度的升高，同時(shí)在30份對(duì)照血清中未出現(xiàn)CK-BB含量增高。由于所選標(biāo)本患者年齡均＞6歲排除了胚胎期肝臟合成CKBB增高的影響，說(shuō)明腫瘤患者血清中檢出CK-BB的概率遠(yuǎn)大于正常人，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，符合腫瘤患者血清CK-BB升高可導(dǎo)致免疫抑制法測(cè)定CK-MB活性假性升高的說(shuō)法。

［1］潘柏中.美國(guó)臨床生化科學(xué)關(guān)于冠心病時(shí)心肌標(biāo)志物的應(yīng)用建議.上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2000，15(1):5.

［2］黃忠耀，朱洪生，趙函芳.缺血-再灌注心肌誘導(dǎo)型一氧化氮合酶基因表達(dá)及其活性的變化和卡托普利的影響.福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，40(3):207-210.

［3］張秀明，李健齋，侯振江，等.現(xiàn)代臨床生化檢驗(yàn)學(xué).人民軍醫(yī)出版社，2001:135-140.

［4］馬驄，李艷君，王海東，等.血清CK-MB/CK大于30%的病因分析.臨床檢驗(yàn)雜志，2003，18(3):167-181.