肖淼生 ，葉立紅 ，姜華軍 ，郭 鵬

（1.武漢大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430072； 2.鄖陽醫(yī)學(xué)院附屬十堰市太和醫(yī)院，湖北 十堰 442000）

氯霉素二甲亞砜溶液是醫(yī)院自制的一種外用溶液劑[鄂藥制字（2001）第GX02-040號(hào)]，有抑菌、消炎作用，臨床主要用于治療毛囊炎。氯霉素的含量測(cè)定方法有旋光法[1]、紫外分光光度（UV）法[2]、高效液相色譜（HPLC）法[3]等。筆者采用HPLC法和UV法分別測(cè)定了氯霉素的含量，并將兩種方法進(jìn)行了比較，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Dionex Ultimate 3000型高效液相色譜儀（戴安公司）；Chromeleon色譜工作站（Dionex公司）；TU-1901型紫外-可見分光光度儀（北京普析通用公司）；FA2004型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；TP-150型超聲波震蕩器（北京鵬程公司）。氯霉素對(duì)照品（批號(hào)為130555-200602，中國藥品生物制品檢定所）；氯霉素二甲亞砜溶液（批號(hào)分別為20071013，20071215，20080228，本院制劑室）；甲醇為色譜純，水為注射用水，其他試劑為分析純或色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 高效液相色譜法

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Phenomenex Luna C18（2）不銹鋼柱（250 mm ×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇 - 水（40 ∶60）；流速：1 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；檢測(cè)波長：278 nm；靈敏度：0.01 AUFS；柱溫：30℃。在上述色譜條件下，對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.1.2 溶液制備

精密稱取氯霉素對(duì)照品適量，用甲醇稀釋成含氯霉素1 g/L的溶液，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜過濾，得對(duì)照品溶液。精密吸取氯霉素二甲亞砜溶液2 mL，置50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm的微孔濾膜過濾，得供試品溶液。照氯霉素二甲亞砜溶液制備工藝，制成不含氯霉素的陰性樣品溶液，精密吸取該溶液2 mL，置50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm的微孔濾膜過濾，得陰性對(duì)照品溶液。

2.1.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：取對(duì)照品溶液適量，分別用甲醇配成含氯霉素0.1，0.2，0.4，0.6，0.8 g/L 的溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y）、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=309.704 7 X-2.123 7，r=0.999 9（ n=5）。結(jié)果表明，氯霉素質(zhì)量濃度在0.1～0.8 g/L范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取質(zhì)量濃度為0.4 g/L的對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定氯霉素的峰面積。結(jié)果的 RSD=0.57%（n=6），表明儀器精密度良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)為20071215）5份，依法重復(fù)平行測(cè)定。結(jié)果氯霉素的平均含量為標(biāo)示量的100.2%，RSD=0.82%（n=5），表明方法重現(xiàn)性好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品（批號(hào)為20071215）溶液，室溫放置，10 h內(nèi)依法每隔2 h測(cè)定1次，結(jié)果氯霉素含量的 RSD=0.38%（n=6），表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。再每隔1 d測(cè)定峰面積1次，共3 d，其 RSD為0.86%，表明供試品溶液在3 d內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取陰性對(duì)照品溶液共3份，分別精密加入氯霉素對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 HPLC法加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.2 紫外分光光度法2.2.1 溶液制備

按2.1.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液的制備方法制得對(duì)照品溶液。精密量取氯霉素二甲亞砜溶液1 mL，置50 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，再取10 mL置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，即得供試品溶液。

2.2.2 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：取上述對(duì)照品溶液適量，分別用甲醇配成含氯霉素 0.1，0.2，0.4，0.6，0.8 g/L 的系列溶液，照 UV 法測(cè)定。以質(zhì)量濃度（Y）對(duì)吸收度（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=34.2224X-0.629 3，r=0.999 9。結(jié)果表明，氯霉素質(zhì)量濃度線性范圍為0.1～0.8 g/L。

精密度試驗(yàn)：取質(zhì)量濃度為0.4 g/L的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果吸收度的 RSD為0.83%（n=5）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，室溫放置，每隔1 d測(cè)定，共3 d。結(jié)果的 RSD為1.51%（n=3），表明供試品溶液在3 d內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取2.1.2項(xiàng)下陰性對(duì)照品溶液共3份，分別精密加入一定量的氯霉素對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制備溶液，搖勻，依法測(cè)定并計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

2.3 樣品含量測(cè)定

取3批氯霉素二甲亞砜樣品溶液，分別照上述兩種方法項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備相應(yīng)的溶液，各自依法測(cè)定，分別計(jì)算其含量。結(jié)果見表3。

表2 UV法加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

表3 兩種方法樣品含量測(cè)定結(jié)果比較（n=3）

3 討論

用HPLC法測(cè)定氯霉素的含量，文獻(xiàn)報(bào)道涉及幾種不同的流動(dòng)相[3-5]。由于甲醇-水（40∶60）配制簡單、分離效果較好，故以此為流動(dòng)相。稱取適量氯霉素對(duì)照品，置50 mL量瓶中，用水稀釋至刻度；按樣品比例同法配制二甲亞砜溶液，稀釋倍數(shù)同氯霉素。在TU-1901型全自動(dòng)紫外分光光度計(jì)上，分別以水為空白，在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，氯霉素最大吸收波長為278 nm，而在此波長處二甲亞砜對(duì)氯霉素含量測(cè)定不產(chǎn)生干擾。故選擇278 nm為檢測(cè)波長。

本研究采用HPLC法和UV法測(cè)定氯霉素二甲亞砜溶液中氯霉素的含量，樣品可以不經(jīng)過提取分離和預(yù)處理，方法簡單可行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，表明兩種方法都可以作為該制劑的含量測(cè)定方法，而本試驗(yàn)建立的HPLC法測(cè)定氯霉素二甲亞砜溶液中氯霉素的含量尚未見文獻(xiàn)報(bào)道，值得推廣。由于醫(yī)院制劑通常品種多而量少，采用HPLC法測(cè)定制劑含量雖然準(zhǔn)確，但操作較為費(fèi)時(shí)；UV法操作簡便，對(duì)使用者要求不高。因此，可將UV法用于制劑半成品的含量控制，而將HPLC法用于成品的含量控制，這樣既可保證制劑質(zhì)量，也可縮短制劑的檢驗(yàn)時(shí)間。

[1]馬慧平，郝丹力.氯霉素苯海拉明二甲基亞砜溶液的含量測(cè)定[J].蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1994，20（1）：23.

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部.中國醫(yī)院制劑規(guī)范·西藥制劑[M].第2版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1995：159-160.

[3]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：776.

[4]曹寧芳，劉鵬鳴.高效液相色譜法測(cè)定氯霉素注射液的含量[J].西北藥學(xué)雜志，2007，22（4）:167-168.

[5]劉曉菁，魏光榕.HPLC同時(shí)測(cè)定氯強(qiáng)滴眼液中氯霉素及醋酸潑尼松龍的含量[J]. 海峽藥學(xué)，2007，19（3）:57-58.