張廣偉，周繼春

（河南省食品藥品檢驗(yàn)所，河南 鄭州 450003）

尼可剎米注射液為中樞興奮藥，主要用于治療疾病或呼吸抑制藥中毒引起的呼吸及循環(huán)衰竭[1]，收載于2005年版《中國藥典（二部）》，但并無熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。天津藥業(yè)焦作有限公司的藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)中增加了熱原檢查項(xiàng)目，但在實(shí)際操作中經(jīng)常出現(xiàn)注射本品后兔體溫急劇升高的現(xiàn)象，分析原因可能是注射速度過快所致不良反應(yīng)，為使標(biāo)準(zhǔn)更適宜操作、可控，該公司委托我所建立尼可剎米注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

DC3A型干式恒溫器（南京三愛斯技術(shù)開發(fā)有限公司）；ZH-2型自動漩渦混合器（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠）。尼可剎米注射液，（規(guī)格 1.5 mL ∶0.375 g，批號為 07070122，07091021，08032431，08051531，08062222，08110121，天津藥業(yè)焦作有限公司）。鱟試劑（TAL，批號為0710262、規(guī)格為0.5 mL/支、靈敏度 0.5 EU/mL，批號為0712270、規(guī)格為0.5 mL/支、靈敏度0.125 EU/mL；湛江安度斯生物有限公司；批號為0705300、規(guī)格為0.5 mL/支、靈敏度 0.25 EU/mL，批號為 0901122、規(guī)格為 0.5 mL/支、靈敏度0.125 EU/mL，湛江博康海洋生物有限公司）。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（WSE，規(guī)格為 120 EU/支，批號為 150601-200862），細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（BET用水，批號為2008-4，規(guī)格為10 mL/支）均由中國藥品生物制品檢定所提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品細(xì)菌內(nèi)毒素限值（L）確定

根據(jù)細(xì)菌內(nèi)毒素限值的計(jì)算公式：L=K/M，其中 K為人每kg體重每h最大可接受的內(nèi)毒素劑量，注射劑的K值為5 EU/（kg·h），M為人用每kg體重每h的最大供試品劑量，人均體重按60 kg計(jì)算。參照該藥品說明書及《臨床用藥須知》[1-2]，本品成人1次最大給藥劑量為1 250 mg/（60 kg·h），則L=K/M=5 EU/（kg·h）/1 250 mg/（60 kg·h）=0.24 EU/mg?？紤]到本品為急救用藥，應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)從嚴(yán)，結(jié)合干擾試驗(yàn)結(jié)果，確定 L為0.15 EU/mg。

2.2 TAL靈敏度復(fù)核

按照2005年版《中國藥典（二部）》附錄的要求復(fù)核所用TAL進(jìn)行復(fù)核，結(jié)果均符合規(guī)定。見表1。

2.3 干擾預(yù)試驗(yàn)

將樣品用 BET用水進(jìn)行倍比稀釋，分別稀釋 2，4，8，16，32，64，128，256，512 倍，制成質(zhì)量濃度為 125，62.5，31.25，15.62，7.8，3.9，1.95，0.98，0.49 mg/mL的溶液，將上述稀釋溶液用湛江安度斯生物有限公司生產(chǎn)的TAL（靈敏度為0.5 EU/mL，批號為08110121）依法進(jìn)行干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)[3]。結(jié)果見表2?？梢姡┰嚻啡芤涸?.49 mg/mL及其以下質(zhì)量濃度時(shí)對試驗(yàn)可能不造成干擾。為了較準(zhǔn)確地確定最大不干擾濃度，將樣品分別制成質(zhì)量濃度為2.0，1.0，0.9，0.8，0.7，0.6，0.5 mg/mL 的溶液，再次進(jìn)行干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)，結(jié)果樣品稀釋至0.9 mg/mL時(shí)即不再對試驗(yàn)產(chǎn)生干擾。

表1 TAL靈敏度復(fù)核結(jié)果

表2 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素干擾預(yù)試驗(yàn)結(jié)果

表3 尼可剎米注射液細(xì)菌內(nèi)毒素干擾試驗(yàn)結(jié)果

2.4 干擾試驗(yàn)

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，將3個(gè)批號的樣品稀釋至0.9 mg/mL，分別取上述2個(gè)廠家的 TAL（安度斯 λ0.5，海洋 λ0.25），依法進(jìn)行干擾試驗(yàn)[2]。結(jié)果見表3。可見，樣品高質(zhì)量濃度時(shí)對TAL與細(xì)菌內(nèi)毒素的凝集反應(yīng)有干擾作用，經(jīng)稀釋至0.9 mg/mL時(shí)即可排除干擾作用，Et均在0.5～2.0 ES之間，其最大不干擾質(zhì)量濃度為0.9 mg/mL。

表4 尼可剎米注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果

2.5 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

分別選擇2個(gè)廠家的TAL（靈敏度為0.125 EU/mL），對上述3批樣品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，結(jié)果均符合規(guī)定。見表4。

3 討論

對于提高尼可剎米注射液質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，筆者認(rèn)為采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法較熱原檢查法更為合適，可避免熱原檢查法中尼可剎米所致家兔體溫升高的假陽性結(jié)果，因此建議廠家用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法代替熱原檢查法對尼可剎米注射液進(jìn)行質(zhì)量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典臨床用藥須知（化學(xué)藥和生物制品卷）2005年版[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：54.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄ⅪE.

[3]中國藥品生物制品檢定所.中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2005：287.