陳良東 林潔 周劍波 顧麗萍

類風濕關節(jié)炎又稱類風濕(rheum atoid arth ritis,RA)，是一種可累及全身的慢性炎癥性自身免疫性疾病，以慢性、對稱性、多滑膜關節(jié)炎和關節(jié)外病變?yōu)橹饕卣?，其發(fā)病機制尚未完全清楚，與多種因素有關。各種細胞因子和炎癥介質的異常表達在RA的發(fā)病過程中發(fā)揮重要的作用?，F(xiàn)將我院2006年3月～2008年4月收治的RA患者各種細胞因子和炎癥介質的檢測結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 按照美國風濕病協(xié)會(ACR)1987年修訂的診斷標準選擇RA患者,根據(jù)Stoke指數(shù)分為活動期和穩(wěn)定期[1]。RA患者均為我院2006年3月～2008年4月的患者?；顒悠赗A患者40例，其中男性9例，女性31例，年齡36～63歲，平均(50.5±6.62)歲；穩(wěn)定期RA患者40例，其中男性11例，女性29例，年齡37～68歲，平均(48.6±8.52)歲；對照組40例為我院正常體檢健康者，性別、年齡與患者組相匹配。

1.2 方法 白細胞介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量的測定均采用雙抗夾心ELISA法，試劑盒由第四軍醫(yī)大學免疫學教研室生產；白細胞介素-17(IL-17)和白細胞介素-18(IL-18)檢測試劑盒購自美國eBioscience公司；所有操作均嚴格按照說明書要求進行。

2 結果

2.1 RA患者不同病期四項指標檢測結果 活動期RA患者的血清中IL-17、IL-18、IL-6和TNF-α含量明顯高于穩(wěn)定期RA患者(P＜0.01)和健康對照組(P＜0.01)；穩(wěn)定期RA患者的血清中IL-17和IL-18含量高于健康對照組(P＜0.05)，而IL-6和TNF-α含量與對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，結果見表1。

2.2 四項指標間的相關分析 RA活動期患者四項指標間(除IL-17/IL-18，r=0.122，P＞0.05)均呈正相關，結果見表2。

2.3 血清IL-17、IL-18、IL-6、TNF-α與RA病情活動性的關系 血清IL-17、IL-18、IL-6、TNF-α與RA病情活動性有顯著差異(P＜0.01)，結果見表3。

3 討論

類風濕關節(jié)炎(RA)，是一種病因尚未闡明的慢性炎癥性疾病，主要累及關節(jié)滑膜，屬于自身免疫性疾病。在RA的發(fā)生、發(fā)展過程中，伴隨著多種免疫細胞的活化和細胞因子、炎癥介質的參與。IL-17是T細胞源性促炎因子，主要由T細胞，特別是記憶型T細胞，如CD4+，CD45RO+產生。在RA病人滑膜上清液中，發(fā)現(xiàn)有生物活性的IL-17，并在其滑膜中發(fā)現(xiàn)高水平的IL-17。Chabaud等[2]發(fā)現(xiàn)，IL-17通過滑膜細胞使MMP-1的表達水平增加5倍，在抗IL-17的抗體存在的條件下，RA滑膜細胞MMP-1的表達水平和膠原酶的活性降低50%，I型膠原的C端的碎片釋放于表層的量也降低50%，這些表明IL-17在RA中直接起到了損傷作用。

IL-17可通過誘導其他細胞因子、蛋白酶和黏附分子的產生發(fā)揮其在RA中的作用。IL-17可通過PI3K/AKT和NF-κB途徑來增強自身的表達量，促進成纖維細胞、內皮細胞等分泌IL-6、IL-8，并導致T細胞的增殖。IL-17與TNF-α關系密切，IL-17可增加TNF-α刺激基因6(tum or necrosis factor alpha-simulated gene-6,TSG-6)的表達,這一作用存在時間和劑量的依賴性，且依賴于促有絲分裂活化蛋白激酶p38的存在。IL-17與IL-1、TNF-α合用可增強成骨細胞樣細胞中激活蛋白-1(AP-1)家族成員、NF-κB的表達,且可上調TNF-α刺激基因6(TSG-6)、IL-6、IL-8的表達水平[3-4]。IL-17的相關融合蛋白和抗體可明顯降低CIA鼠的關節(jié)炎癥，減輕骨組織的破壞，并下調IL-6等炎癥介質的表達。表明IL-17可作為治療RA的臨床療效和預后判斷的重要指標。

表1 RA患者活動期、穩(wěn)定期四項指標檢測結果(±s)

表1 RA患者活動期、穩(wěn)定期四項指標檢測結果(±s)

注：與穩(wěn)定期RA患者血清相比，a P＜0.01；與對照組RA患者血清相比，b P＜0.01；與對照組RA患者血清相比，c P＜0.05。

?

表2 40例活動期IL-17、IL-18、IL-6、TNF-α間相關分析

表3 血清IL-17、IL-18、IL-6、TNF-α與RA病情活動性的關系

IL-18由巨噬細胞產生，可協(xié)同IL-12誘導TNF-α的表達，促進關節(jié)炎的發(fā)生和滑膜組織的增生。IL-18刺激關節(jié)軟骨細胞iNOS、COX-2、IL-6等基因的表達,誘導產生大量NO、PGE2,參與關節(jié)的炎癥、損傷、退行性變等[5]。IL-18可誘導軟骨細胞生產MMP-1、MMP-3、MMP-13等而促進軟骨組織的降解。此外研究證實，IL-18經NF-κB和PI3K途徑上調TNF受體、VCAM-1、ICAM-1的表達，從而促進單核/巨噬細胞生產TNF-α[6]。

IL-18可直接刺激RA患者的滑膜細胞產生TNF-α和IL-6，此效用成劑量依賴性，在體外TNF-α可增加滑液IL-18m RNA的表達。有文獻報道，RA患者不僅血清中IL-18增高，而且關節(jié)液中的IL-18顯著高于血清。IL-18單克隆抗體、IL-18結合蛋白等可明顯改善RA患者的病情，控制炎癥的進一步發(fā)展，表明IL-18可作為治療RA的臨床療效和預后判斷的重要指標。

TNF-α和IL-6均由單核/巨噬細胞在外來刺激(如病毒感染或內毒素等)作用下產生的炎癥性細胞因子，在RA發(fā)病過程中發(fā)揮重要的作用。TNF-α為具有廣泛生物活性的多肽調節(jié)因子，在RA中不僅參與滑膜炎癥反應，同時也破壞軟骨，誘發(fā)關節(jié)結構的破壞，對滑膜凋亡也有重要影響[7]。

IL-6是一種促炎癥細胞因子，刺激B細胞產生多種炎癥介質，參與免疫調節(jié)。在RA的致病作用中，IL-6與IL-1β和TNF-α不同,它不直接刺激滑膜纖維母細胞和軟骨細胞產生PGE2和膠原酶,而是增加IL-1β和TNF-α的某些生物效應的放大因子,并能誘導肝臟合成急性期蛋白和類風濕因子[8]?；顒悠赗A患者血清中IL-6明顯升高,在緩解期又迅速下降至基本正常水平。

本研究結果顯示，患者活動期四項指標含量水平顯著高于穩(wěn)定期患者和正常對照組(P＜0.01)；穩(wěn)定期患者的IL-17的含量高于健康對照組(P＜0.05)，與張曲濤等報道一致[9]。穩(wěn)定期患者的IL-18的含量高于健康對照組(P＜0.05)，與張玲英等報道一致[10]。穩(wěn)定期患者的IL-6和TNF-α與健康對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。以上結果提示四項指標參與RA的病理損傷過程，促進病情的發(fā)展。在患者四項指標的檢測結果中，除IL-17與IL-18之間無相關性外，其余各檢測結果之間均呈正相關，表明在RA的病情發(fā)生、發(fā)展過程中，四項指標的含量與RA患者的病情密切相關，有助于RA患者的臨床療效的觀察。在RA病人中具有較高水平的IL-17、IL-18、IL-6和TNF-α其活動期人數(shù)較穩(wěn)定期人數(shù)顯著增多(P＜0.01)，結果提示血清中IL-17、IL-18、IL-6和TNF-α水平的測定對RA患者病情活動性的判斷有一定的價值。

[1]蔣明,朱立平,林孝義.風濕病學[M].北京:科學出版社,1995:881-883.

[2]Chabaud M,Garnero P,Dayer JM,et al.Cont ribution of interleukin-17 to synovium mat rix dest ruction in rheumatoid arthritis[J].Cytokine,2000,12(7):1092-1099.

[3]Granet C,Miossec P.Combination of the proinflammatory cytokines IL-1,TNF-alpha and IL-17 leads to enhanced expression and additional recruitment of AP-1 family members,Egr-1 and NF-kappaB in osteoblast-like cells[J].Cytokine,2004,26(4):169-177.

[4]Bush KA,Farmer KM,Walker JS,et al.Reduction of joint inflammation and bone erosion in rat adjuvant arthritis by treatment with interleukin-17 receptor IgG1 Fc fusion protein[J].Arthritis Rheum,2002,46(3):802-805.

[5]Dai SM,Shan ZZ,Nishioka K,et al.Implication of interleukin-18 in production of matrix metalloproteinases in articular chondrocytes in arthritis:direct effect on chondrocytes may not be pivotal[J].Ann Rheum Dis,2005,64(5):735-742.

[6]Joosten LA,Radstake TR,Lubberts E,et al.Association of interleukin-18 expression withenhanced levels of both interleukin-1 beta and tumor necrosis factor alpha in knee synovial tissue of patients with rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rheum,2003,48(2):339-347.

[7]高俊,丁真奇.細胞因子在類風濕性關節(jié)炎中作用的研究現(xiàn)狀[J].醫(yī)學綜述,2006,12(5):289-291.

[8]Rajan M,Anne C,John W,et al.The significance of determination of tumor necrosis factor in patients with chronic infection[J].Ann Rheum Dis,1993,52:232.

[9]張曲濤,廖穗波,廖滿林,等.細胞因子IL-1α、IL-1β、IL-17在類風濕性關節(jié)炎時的水平分析[J].廣州醫(yī)藥,2007,38(1):56-57.

[10]張玲英,洪華,葉長寧,等.類風濕關節(jié)炎患者血清sFas、sFasL和IL-18水平及意義[J].檢驗醫(yī)學,2004,19(2):104-105.