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        探討ELISA檢測HBsAg中延時不同時間比色對結(jié)果的影響

        2010-05-30 07:04:26830017新疆烏魯木齊溫泉療養(yǎng)院李書群劉艷李曉勤
        中國療養(yǎng)醫(yī)學(xué) 2010年1期
        關(guān)鍵詞:酶標(biāo)儀弱陽性比色

        830017 新疆烏魯木齊溫泉療養(yǎng)院 李書群 劉艷 李曉勤

        1 材料和方法

        1.1 標(biāo)本來源 從428名來我院進(jìn)行體檢的體檢者中檢出的13例HBsAg陽性血清標(biāo)本。

        1.2 儀器與試劑

        1.2.1 儀器 KHB ST-360酶標(biāo)儀,KHB ST-36W洗板機(jī)。

        1.2.2 試劑 濰坊三維生物工程集團(tuán)有限公司提供的乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)。

        1.3 方法

        1)對13例血清標(biāo)本進(jìn)行隨機(jī)編號,依次為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13號,用ELISA法檢測13例血清標(biāo)本HBsAg,按照試劑盒中的說明書操作。

        2)在加入終止液混勻后立即在酶標(biāo)儀上比色,記為0 min的OD值。然后依次在加入終止液后的10 min、20 min、30 min、40 min在酶標(biāo)儀上比色,分別記為10 min、20 min、30 min、40 min的OD值。

        3)結(jié)果判斷。本試驗(yàn)的C.O.為0.105,以0 min的OD值/C.O.≥1者判為HBsAg陽性,13例血清全部陽性。

        4)將0 min的OD值分別與10 min、20 min、30 min、40 min的OD值配成對子,共4對。用配對t檢驗(yàn),分別比較0 min的OD值與10 min、20 min、30 min、40 min的OD值,結(jié)果(表1)。

        表1 終止反應(yīng)后延時不同時間的OD值比較

        2 結(jié)果

        從表1中可以看出,終止反應(yīng)后延時10 min、20 min的OD值與0 min的OD值比較,P>0.05,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。終止反應(yīng)后延時30 min、40 min的OD值與0 min的OD值比較,P<0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

        3 討論

        實(shí)驗(yàn)室在應(yīng)用試劑盒檢測標(biāo)本時,一般都是按照試劑盒中的說明書進(jìn)行操作。本試驗(yàn)試劑盒中的說明書上表明的比色時間應(yīng)在終止反應(yīng)的30 min內(nèi)完成。而作者所做的試驗(yàn)結(jié)果卻是:在終止反應(yīng)的20~30 min這段時間內(nèi),樣本的OD值便與0 min的OD值有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。這種差異對OD值較高的強(qiáng)陽性標(biāo)本影響不大,但對于OD值較低的弱陽性標(biāo)本,容易造成假陰性結(jié)果。從表1中可以看到,第9號標(biāo)本在延時第10分鐘比色時,已經(jīng)由弱陽性轉(zhuǎn)為陰性。對于有自動化免疫分析儀的實(shí)驗(yàn)室,不存在延時比色的問題。但對于沒有自動化免疫分析儀的實(shí)驗(yàn)室來說,這個問題就應(yīng)引起重視。作者建議用ELISA進(jìn)行HBsAg測定的操作過程中,加終止液終止反應(yīng)后應(yīng)立即比色。我國是乙型肝炎的高發(fā)地區(qū),HBsAg攜帶者約為1.2億,攜帶率為10%[1]。為了避免給臨床造成漏診、誤診,我們在實(shí)際工作中,應(yīng)以嚴(yán)謹(jǐn)負(fù)責(zé)的工作態(tài)度,認(rèn)真實(shí)踐,嚴(yán)格控制導(dǎo)致HBsAg假陰性結(jié)果的因素,減少誤差,提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

        [1]王振英,張紀(jì)云,高玉芳,主編.放射免疫分析與臨床[M].北京:中國科學(xué)技術(shù)出版社,1994:239.

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