蘇 悅,韓素萍

(南京醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院婦產(chǎn)科,江蘇南京,210009)

卵巢惡性腫瘤死亡率目前居婦科生殖道惡性腫瘤死亡率的首位[1],其原因除難以早期診斷及易產(chǎn)生耐藥性外,對其發(fā)生發(fā)展的過程尚缺乏了解,且目前仍無完善的卵巢癌早期診斷方法[2]。近來研究發(fā)現(xiàn),黏附分子(MUC)是由多種分泌上皮細(xì)胞分泌的高分子量、高度糖基化蛋白,當(dāng)發(fā)生癌變時,其表達的量和質(zhì)將出現(xiàn)異常。由于卵巢上皮性癌來源于卵巢表面的生發(fā)上皮,黏附分子在卵巢癌的診斷方面將可能是一有意義的分子標(biāo)志物[3]。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是已知最強的促血管生成因子,在腫瘤組織中,VEGF的表達直接影響著腫瘤血管的生長和原發(fā)瘤的生長和浸潤[4]。本研究將采用免疫組化的方法,聯(lián)合觀察MUC4和VEGF在卵巢癌組織的表達,并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 研究對象

收集篩選江蘇省揚州大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院病理科和揚州大學(xué)病理教研室2005年1月～2009年12月存檔的卵巢腫瘤蠟塊共90例,其中,卵巢良性上皮性腫瘤20例,卵巢交界性上皮性腫瘤10例,卵巢惡性上皮性腫瘤60例。患者平均年齡55歲(33～71歲)。所有患者手術(shù)均為確診后的第1次手術(shù),術(shù)前均未進行任何放、化療處理。對60例卵巢惡性上皮性腫瘤進行分類:病理分化程度:Ⅰ級18例,Ⅱ、Ⅲ級42例;手術(shù)病理分期按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)標(biāo)準(zhǔn)(1986年):早期(Ⅰ、Ⅱ期)22例,晚期(Ⅲ、Ⅳ期)38例;CA125正常24例,升高36例。

1.2 檢測方法

上述標(biāo)本均為10%福爾馬林固定,常規(guī)石蠟包埋,鼠抗人MUC4單克隆抗體IgG1,購自美國Zymend公司,濃縮型,工作濃度 1∶100;兔抗人VEGF單克隆抗體選自北京中杉生物公司,濃縮型,工作濃度 1∶100。

1.3 結(jié)果判定

免疫組化染色陽性表達為境界清晰,突出于背景的棕黃色或棕褐色顆粒,細(xì)胞質(zhì)、胞膜或胞核內(nèi)有棕黃色顆粒則者為陽性細(xì)胞。MUC4陽性信號主要定位于胞質(zhì)或胞膜,VEGF陽性信號主要定位于胞漿、胞膜。每張切片隨機選5個200倍視野觀察,陽性細(xì)胞百分率>10%為陽性表達,陽性細(xì)胞<10%為陰性表達[5]。

2 結(jié) 果

在20例良性腫瘤組織中,MUC4的表達均為陰性,在交界性卵巢腫瘤標(biāo)本中表達率為50%(5/10),惡性卵巢組織中表達率為81.7%(49/60),2者相比差異有顯著性(P<0.05);VEGF在良性卵巢組織中表達為10%(2/20),在交界性卵巢腫瘤標(biāo)本中表達率為20%(2/10),惡性卵巢組織中表達率為60%(36/60),良性卵巢組織與惡性卵巢組織中的表達相比差異有顯著性(P<0.01);在交界性卵巢腫瘤與卵巢癌中表達差異有顯著性(P<0.05)。

在60例上皮性卵巢癌中,根據(jù)組織分化程度的不同,分為高分化組和中低分化組,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析,MUC4與VEGF的表達在高分化組和中低分化組中差異有顯著性(P<0.01)。

將卵巢癌根據(jù)臨床分期的不同,分為早期(Ⅰ、Ⅱ期)和晚期(Ⅲ、Ⅳ期),經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析,VEGF在早期和晚期卵巢癌中表達差異有顯著性(P<0.05);而MUC4在早期與晚期卵巢癌組織中的表達差異無顯著性(P>0.05)。

在22例早期卵巢癌標(biāo)本中,MUC4的表達高于VEGF,差異有顯著性(P<0.01)。

在60例上皮性卵巢癌病例,在CA125正常組與CA125升高組中,VEGF的表達差異有顯著性(P<0.05),MUC4表達差異無顯著性(P>0.05)。見表1,圖1-4。

表1 MUC4、VEGF在上皮性卵巢癌中的表達

圖1 MUC4在卵巢漿液性囊腺癌中陽性表達SP法,200倍

圖2 MUC4在卵巢粘液性囊腺癌中陽性表達SP法,200倍

圖3 VEGF在卵巢漿液性囊腺癌中陽性表達SP法,200倍

圖4 VEGF在卵巢粘液性囊腺癌中陽性表達SP法,200倍

3 討 論

卵巢癌是嚴(yán)重威脅女性健康的惡性腫瘤,尋找敏感性高,特異性強的腫瘤指標(biāo),提高卵巢癌的早期診斷率,同時尋找與腫瘤患者預(yù)后密切相關(guān)的指標(biāo)是目前急需要解決的問題。

黏附分子(MUC)是由多種分泌上皮細(xì)胞分泌的高分子量、高度糖基化蛋白,目前已發(fā)現(xiàn)13種[6],可分為3個類型:分泌型包括膠體蛋白MUC2、MUC5AC 、MUC5B 、MUC6 和非膠體蛋白MUC7;膜結(jié)合型 MUC1、MUC3、MUC4[7]、MUC12;未分類 MUC13[8]、MUC16。在正常情況下能促進上皮細(xì)胞的更新和分化,對上皮組織有潤滑和保護作用,但一旦瘤變或者癌變,其表達的量和質(zhì)將出現(xiàn)異常。國外研究發(fā)現(xiàn),上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)變過程多伴有MUC異常糖基化,MUC在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及生物學(xué)特性中具有重要作用[9-10],而國內(nèi)對MUC4與卵巢癌相關(guān)性方面的研究較少。本研究發(fā)現(xiàn),MUC4在正常卵巢組織均無陽性表達,在卵巢癌與卵巢交界性瘤中陽性表達率差異顯著,MUC4的表達與臨床分期以及CA125值無關(guān),中低分化卵巢癌患者陽性表達率明顯高于高分化者,在早期、晚期卵巢癌MUC4表達無明顯差異,可見MUC4黏蛋白的過度表達與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),尤其在早期卵巢癌可能成為優(yōu)于CA125早期診斷指標(biāo)[11]。

腫瘤的生成、浸潤、轉(zhuǎn)移與血管的生成密切相關(guān)。VEGF是最為關(guān)鍵的血管形成促進分子之一,在多種腫瘤組織均過度表達,且其表達水平與患者的預(yù)后相關(guān)[12]。其表達強度直接影響著腫瘤血管的生長和原發(fā)瘤的生長與浸潤,能夠強烈刺激血管內(nèi)皮增生,誘導(dǎo)血管生成,并可增加血管通透性。本研究中,VEGF在卵巢惡性腫瘤中的表達顯著高于良性腫瘤,在中低分化組織中的表達顯著高于高分化組,且VEGF過表達與卵巢癌臨床分期有關(guān)[13],說明VEGF的表達量與腫瘤的良惡性有關(guān),腫瘤惡性程度越高,其產(chǎn)生促血管生成因子的能力越強。VEGF對判斷卵巢癌的惡性程度及預(yù)后有參考意義,可作為評判卵巢癌患者預(yù)后的重要參考指標(biāo)[14],對于CA125正常的卵巢癌患者,VEGF可能成為隨訪的優(yōu)良候選指標(biāo)之一。

本研究表明,MUC4在卵巢癌組織中的表達與VEGF有一致性,但在早期卵巢癌中的表達差異有顯著性,且MUC4的高表達與CA125值以及腫瘤的分期無關(guān),在CA125正常組以及卵巢癌早期和晚期組均有強表達,提示其可作為卵巢上皮性腫瘤早期診斷的優(yōu)秀標(biāo)志物。而VEGF的異常表達與患者的腫瘤分期和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切,提示VEGF能更好的用于預(yù)后的判斷,二者有各自不同的敏感區(qū)域。總之,隨著研究不斷深入,MUC4及VEGF兩種腫瘤標(biāo)志物在腫瘤的診斷及預(yù)后判斷方面將擁有廣闊的前景。

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