孫曉杰，李鐵男，陳晴燕，郭長(zhǎng)占，金春林，陳家惠，孫昂遠(yuǎn)，林庶茹，孫曉東

（1.沈陽(yáng)市第七人民醫(yī)院,沈陽(yáng)110003；2.北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部免疫學(xué)系，北京100191；3.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室,沈陽(yáng)110032）

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus,SLE）是一種常見(jiàn)多因素自身免疫病，病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。狼瘡小鼠模型是研究SLE的良好工具。常用的紅斑狼瘡小鼠模型有NZB/W、BXSB和MRL/lpr小鼠，其癥狀與人類紅斑狼瘡相似，包括顯著的血清自身抗體，免疫復(fù)合物腎小球腎炎，血管炎等[1]，對(duì)探討狼瘡的發(fā)病機(jī)制、病理變化和治療方法具有重要意義。國(guó)內(nèi)已有應(yīng)用NZB/W和BXSB小鼠進(jìn)行的研究報(bào)告[2-5]，應(yīng)用MRL／lpr小鼠的相關(guān)研究還未見(jiàn)報(bào)道。我院經(jīng)長(zhǎng)期臨床實(shí)踐總結(jié)出以健脾補(bǔ)腎為主的中藥扶正湯用于治療以狼瘡腎改變?yōu)橹鞯睦钳彶∪巳〉昧己茂熜?，為探討其作用機(jī)制，我們利用經(jīng)典紅斑狼瘡小鼠模型MRL/1Pr小鼠，分為四組。生理鹽水對(duì)照組，中藥組，中西醫(yī)結(jié)合組，西藥組。治療6周，觀察其對(duì)小鼠精神狀態(tài)、食量、體重、胸腺和脾臟指數(shù)變化的影響。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1動(dòng)物 6～8周齡純種MRL/1Pr雄性小鼠，體重20.5～30.5g,由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)系免疫學(xué)系郭長(zhǎng)占教授提供，飼養(yǎng)在遼寧中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物室，清潔級(jí)隔離飼養(yǎng)間,給予經(jīng)消毒處理的小鼠標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料喂養(yǎng),自由飲用經(jīng)濾過(guò)凈化處理水。

1．1．2藥物組成 黃芪、太子參、菟絲子、仙靈脾、丹參、當(dāng)歸等中藥均選用地道藥材，采用傳統(tǒng)中藥煎煮法在本院煎煮罐中制成水煎劑,相當(dāng)1g/mL生藥。潑尼松片：天津天藥藥業(yè)股份有限公司（批號(hào)：0809051）。

1.2方法

1.2.1動(dòng)物分組與給藥 將MRL/1Pr雄性小鼠隨機(jī)分為四組:A組為生理鹽水對(duì)照組8只；B組為西藥組11只；C組為中藥組12只；D組為中西藥組11只。參照人的劑量，按體表面積換算,A組以0.35mL生理鹽水灌胃，1次/d；B組按潑尼松1mg/kg，配成混懸液，每次灌胃給藥0.35mL/20g；C組中藥劑量為0.35mL/20g煎劑灌胃,1次/d；D組潑尼松5mg加中藥煎劑14mL，每次灌胃給藥0.35mL/20g。共治療6周。

1.2.3方法 小鼠治療前及治療后每日觀察小鼠一般狀態(tài)，每日記錄各組小鼠的食量，每2周測(cè)1次體重共記錄4次，最后1次（6周）稱取重量后，摘眼球取血處死小鼠。取出脾臟和胸腺，用濾紙沾干表面血污分別稱重。脾指數(shù)=脾臟重量×100/小鼠重量；胸腺指數(shù)=胸腺重量×100/小鼠重量。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)用x±s表示，統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 12.0軟件,多組間數(shù)據(jù)的差異顯著性用方差分析和最小顯著法(LSD法)進(jìn)行兩兩比較檢驗(yàn)，P<0.05為差異有顯著意義。

2 結(jié)果

2.1各組小鼠一般狀況變化 第1周B組和D組各有1只小鼠死亡，其余小鼠均至6周實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死。A組小鼠精神萎靡，行動(dòng)遲緩，毛發(fā)無(wú)光澤，食量明顯下降，腹部膨隆，處死時(shí)可見(jiàn)腹腔腹水，胸腺、脾臟及淋巴結(jié)明顯腫大，腎臟腫大、蒼白，血清呈乳糜狀。B組小鼠用藥最初2周食量、活動(dòng)度明顯增加，但后期又有所下降。C組從食量、活動(dòng)度、毛發(fā)光澤度情況均比其它三組好。D組小鼠精神較A組小鼠好，行動(dòng)尚靈活，毛發(fā)有光澤。B、C、D三組小鼠處死時(shí)腹腔可見(jiàn)少量腹水；B組、D組胸腺、脾臟及淋巴結(jié)縮??；C組胸腺、脾臟及淋巴結(jié)輕度腫大，腎臟呈暗紅色，體積無(wú)明顯增大，血清呈淡黃色，清亮。

2.2各組小鼠食量變化 第1周各組小鼠食量無(wú)明顯變化。第2周A組、C組略下降，D組略增加，B組食量明顯增加。第4周后A組、B組食量明顯下降，C組、D組明顯增加。各治療組平均食量變化情況見(jiàn)表1。

表1 四組小鼠周平均食量變化情況（x±s）

2．3治療前后小鼠體重變化 治療前體重比較，組間無(wú)差異即基線相同，表明組間有可比性。A組小鼠體重漸增加；B組小鼠體重增加不明顯，治療后體重較其它三組明顯減輕；C組、D組治療后體重與A組相比無(wú)顯著性變化，較B組有明顯增加。治療前后4次體重變化見(jiàn)表2。

表2 四組小鼠每?jī)芍荏w重變化情況（±s）

表2 四組小鼠每?jī)芍荏w重變化情況（±s）

注：組內(nèi)比較 *P＜0.01，與對(duì)照組比較△P＜0.01。

組別對(duì)照組（A組）西藥組（B組）中藥組（C組）中西藥組（D組）第1天21.37±2.69 21.72±2.46 21.46±1.63 23.09±2.79第14天26.44±3.52 23.85±1.43 25.29±2.32 28.60±2.47第28天28.94±3.51 24.45±1.26 26.96±3.35 28.70±2.28第42天28.56±2.89*24.10±1.19△27.96±2.07*28.40±2.47*

2．4治療后各組胸腺和脾指數(shù)的變化 治療后胸腺和脾指數(shù)B組和D組較A組明顯下降；C組較A組無(wú)明顯差異，較B組和D組增加。見(jiàn)表3。

表2 各組小鼠治療后胸腺指數(shù)（TI±S）和脾指數(shù)（I±S）

表2 各組小鼠治療后胸腺指數(shù)（TI±S）和脾指數(shù)（I±S）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.01；與中藥組比較△P＜0.01。

組別對(duì)照組（A組）西藥組（B組）中藥組（C組)中西藥組（D組）SI±S 2.88±0.49 1.90±0.24△*3.23±0.43 2.23±0.29△*TI±S 0.27±0.056 0.14±0.059△*0.27±0.070 0.17±0.043△*

3 討論

系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病原因不清，為遺傳、免疫、感染、精神創(chuàng)傷等多種因素參與的自身免疫性疾病，體內(nèi)有多種自身抗體的產(chǎn)生，引起多種細(xì)胞因子變化，導(dǎo)致多種臟器功能損害。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為紅斑狼瘡多由先天稟賦不足，肝腎虧損而成。內(nèi)可因后天失于濡養(yǎng)，七情內(nèi)傷，致使陰陽(yáng)氣血失去平衡，陰陽(yáng)不調(diào)，氣血失和；外可因日光曝曬，外熱入侵，兩熱相搏，瘀阻脈絡(luò)，內(nèi)傷臟腑，外阻肌膚引起急性發(fā)作。病久多陰損及陽(yáng)，累及脾陽(yáng)，導(dǎo)致脾腎陽(yáng)虛?！疤摗笔潜静≈綶6]。中醫(yī)藥治療可通過(guò)調(diào)節(jié)人體氣血陰陽(yáng)，扶正固本，恢復(fù)人體本身的免疫平衡，抑制自身免疫，達(dá)到既消除病變又使病情穩(wěn)定，并能夠調(diào)節(jié)長(zhǎng)期免疫制劑所引起的元?dú)鈧麚p[7]。扶正湯以健脾補(bǔ)腎為主，在我院臨床應(yīng)用十余年，取得了良好的臨床療效。為探討其作用機(jī)理和中西醫(yī)結(jié)合治療狼瘡的優(yōu)勢(shì)，我們進(jìn)行了一些實(shí)驗(yàn)研究。

我們的研究表明，經(jīng)治療后中藥對(duì)MRL／lpr小鼠精神狀態(tài)有很好的改善，食量體重增加，胸腺和脾臟指數(shù)與對(duì)照組無(wú)下降，不出現(xiàn)胸腺和脾臟的萎縮。單用糖皮質(zhì)激素早期可使小鼠精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)，體重增加，食量增加，但后期食量和體重均又下降，胸脾指數(shù)較對(duì)照組明顯下降，胸腺和脾臟萎縮明顯。中西醫(yī)結(jié)合組一般狀態(tài)、食量、體重均明顯改善，但胸腺、脾指數(shù)雖較糖皮質(zhì)激素組有所增加，仍較對(duì)照組和中藥組明顯下降。大體解剖顯示三組治療組腹水、腎臟體積和缺血情況均較對(duì)照組有改善。說(shuō)明中藥能改善MRL／lpr紅斑狼瘡小鼠的病情。能通過(guò)使食量、活動(dòng)度、體重增加改善生存質(zhì)量，并不引起胸腺和脾臟免疫器官的萎縮，說(shuō)明中藥可能通過(guò)與激素不同的機(jī)制發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，并對(duì)免疫器官有一定的保護(hù)作用。

方中黃芪、太子參、白術(shù)、茯苓健脾益氣；熟地黃、女貞子、枸杞子滋腎益精；仙靈脾、菟絲子補(bǔ)腎陽(yáng)利水；丹參、雞血藤、秦艽活血通絡(luò)；重樓、白花蛇草清熱解毒；生地、當(dāng)歸益氣養(yǎng)血?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃芪、白花蛇舌草等具有明確的免疫調(diào)節(jié)作用，而仙靈脾、女貞子、當(dāng)歸等具有刺激免疫的作用。所謂正氣內(nèi)存則邪不可干，在系統(tǒng)性紅斑狼瘡的治療中更應(yīng)強(qiáng)調(diào)扶正，扶正方能驅(qū)邪，本方以扶正為主，通過(guò)對(duì)免疫機(jī)制的調(diào)節(jié)，提高了自身的抗病能力，恢復(fù)肌體的免疫平衡，因而在臨床上即能提高西醫(yī)的治療效果，又能減少糖皮質(zhì)激素的用量、副作用、縮短病程。對(duì)其如何發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)的機(jī)制還有待于進(jìn)一步的研究。

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