虎杖配方顆粒是蓼科植物虎杖(PolygonumcuspidatumSieb.etZucc)的干燥根及根莖制成的配方顆粒，為棕黃色至黃褐色顆粒；氣微，味微苦、澀；具有祛風(fēng)利濕，散瘀定痛，止咳化痰的功效，用于關(guān)節(jié)痹痛，濕熱黃疸，經(jīng)閉，癥瘕，水火燙傷，跌撲損傷，癰腫瘡毒，咳嗽痰多等癥。為有效地控制配方顆粒的質(zhì)量，安徽省中藥配方顆粒工程技術(shù)研究中心按照國家食品藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的《中藥配方顆粒管理暫行規(guī)定》通知要求，借鑒中國藥典[1]虎杖項(xiàng)下的鑒別和含量測定方法，參考有關(guān)文獻(xiàn)，采用薄層色譜法對虎杖配方顆粒進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法對虎杖配方顆粒中的大黃素與大黃素甲醚進(jìn)行含量測定。結(jié)果表明，該方法簡便可行，重復(fù)性好，能有效地控制虎杖配方顆粒的質(zhì)量并確保配方顆粒在不具備中藥飲片外形后臨床用藥的安全有效。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Agilent1200色譜系統(tǒng)(G1611A型四元泵，G1329A型自動進(jìn)樣器，G1314B型VWD檢測器，Agilent化學(xué)工作站)；BT25S型電子分析天平(德國賽特利斯)；FA2104SN型電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；UV-8三用紫外儀(無錫科達(dá)儀器廠)；HH型恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市金城國勝試驗(yàn)儀器廠)等。

1.2 試劑

甲醇(色譜純，天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司)；甲醇(分析純，鄭州派尼試劑廠)；純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司)；其余試劑均為分析純。

1.3 對照品及供試品

大黃素對照品(供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所，批號：110756-200110)；大黃素甲醚對照品(供定性鑒別用，中國藥品生物制品檢定所，批號：110758-200610)；虎杖對照藥材(由安徽中醫(yī)學(xué)院生藥教研室俞年軍教授鑒定)；虎杖配方顆粒(安徽濟(jì)人藥業(yè)有限公司、安徽中藥配方顆粒工程技術(shù)研究中心提供)。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

取虎杖配方顆粒粉末0.1 g，加甲醇10 ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.5 mol/L硫酸溶液5 ml，加熱水解30分鐘，自然冷卻，用三氯甲烷萃取兩次，每次5 ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄? ml使溶解，作為供試品溶液。另取虎杖對照藥材1 g，加水60 ml，煮沸30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?0 ml，同法制成對照藥材溶液。再取大黃素、大黃素甲醚對照品，分別加甲醇制成每1 ml各含1 mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各5∶1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)—甲酸乙酯—甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置日光及紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)。虎杖配方顆粒薄層色譜圖見圖1。

2.2 大黃素含量測定

2.2.1 色譜條件 Agilent HC-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：甲醇—0.1%磷酸溶液(80∶20)；檢測波長：254 nm；柱溫：40℃；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：10 μl；理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24小時(shí)的大黃素對照品適量，加甲醇制成每l ml中含60 g的溶液，即得。

a 可見光色譜圖

b 紫外光(365 nm)色譜圖

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品顆粒，研細(xì)，約0.1 g，精密稱定，精密加入三氯甲烷25 ml和2.5 mol/L硫酸溶液20 ml，稱定重量，置80℃水浴中加熱回流2小時(shí)，冷卻至室溫，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻。分取三氯甲烷液，精密量取10 ml，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各5 μl，注入液相色譜儀，測定，即得。結(jié)果見圖2虎杖配方顆粒液相色譜圖。

2.2.5 線性關(guān)系與范圍的考察 精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10 μl進(jìn)行色譜測定，按上述2.2.1色譜條件測定峰面積，以大黃素含量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為Y=14.753X+0.0108,相關(guān)系數(shù)R=1.0000，結(jié)果表明大黃素在24.0～120.0 μg/ml范圍內(nèi)大黃素濃度與峰面積積分值有良好的線性關(guān)系。

a 大黃素

b 虎杖配方顆粒

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一大黃素對照品溶液與供試品溶液，分別測定4次，每次間隔1小時(shí)，結(jié)果表明大黃素對照品與供試品溶液在3小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好，峰面積RSD值分別為0.39%和0.48%。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 取對照品溶液，連續(xù)5次重復(fù)進(jìn)樣，得到峰面積積分值并計(jì)算其RSD為0.08%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一供試品5份，按供試品制備與測定方法進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)樣品溶液的制備并測定，得到供試品的大黃素含量為17.93 mg/g，RSD為1.90%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.9 回收率試驗(yàn) 分別稱取已知含量的樣品共5份，分別精密加入大黃素對照品溶液各0.5 ml，按供試品制備與測定方法進(jìn)行回收率試驗(yàn)樣品溶液的制備并測定，結(jié)果見表1。得到的大黃素回收率在97%～103%之間，平均回收率98.9%，RSD為1.91%，說明樣品制備方法和檢測方法均可行。

2.2.10 樣品含量測定 精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，測定，外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果見表2。

3 討論

虎杖配方顆粒為單味虎杖藥材制成的濃縮顆粒，主含蒽醌類、二苯乙烯類、黃酮類、萘醌、多糖、氨基酸及微量元素，其中游離蒽醌類主要有大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素甲醚等[1]，本實(shí)驗(yàn)選用大黃素與大黃素甲醚作為其指標(biāo)成分，對其用薄層色譜法進(jìn)行鑒別，選用大黃素為指標(biāo)成分對其進(jìn)行HPLC定量研究[2]，能有效地控制虎杖配方顆粒的質(zhì)量。

表2 10批樣品中大黃素含量測定結(jié)果

本試驗(yàn)中薄層鑒別方法在藥典方法[2]的基礎(chǔ)上，加用虎杖對照藥材，因顆粒為水煎劑，故將藥材先進(jìn)行水提取后同步操作進(jìn)行對照，得到色譜斑點(diǎn)效果良好；同時(shí)在用氨蒸氣熏后斑點(diǎn)會變成紅色，但因其較易退去，本法并未將其列入標(biāo)準(zhǔn)中，而以直接檢視日光下的橙黃色斑點(diǎn)進(jìn)行代替，簡化了實(shí)驗(yàn)操作。

根據(jù)對虎杖原材料的測定結(jié)果和多批樣品的含量測定結(jié)果，成品含量限度為不得少于12.0 mg/袋，其中每袋裝量為1.3 g顆粒，相當(dāng)于15 g虎杖飲片。

[1] 鄭虎占，董澤宏，佘靖. 中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用[M]. 北京：學(xué)苑出版社，1997: 2801.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2005：145-146.