黃愛(ài)軍

恩施自治州中心醫(yī)院(湖北 恩施 445000)

算盤(pán)子(Glochidionpuberum)是大戟科(Euphorbiaceae)算盤(pán)子屬(Glochidion)植物，俗名野南瓜、柿子椒、小孩拳等。全草可入藥，味苦、澀，性涼；有清熱利濕、祛風(fēng)活絡(luò)的功能；用于治療痢疾、腸炎等疾病[1]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，從該屬植物中分離得到的化學(xué)成分有生物堿類(lèi)、三萜類(lèi)、黃酮類(lèi)、甾體類(lèi)、環(huán)丁烯內(nèi)脂類(lèi)、木脂素類(lèi)、酚酸類(lèi)等。藥理研究該屬植物具有抗菌消炎、抗氧化、抗腫瘤、抗病毒等作用[2]。本實(shí)驗(yàn)采用角叉菜膠引起的大鼠足跖致炎實(shí)驗(yàn)，觀察算盤(pán)子提取物的抗炎作用，并檢測(cè)炎癥局部組織中組胺含量，以進(jìn)一步了解算盤(pán)子抗炎機(jī)制；通過(guò)熱刺激小鼠疼痛實(shí)驗(yàn)觀察算盤(pán)子提取物的鎮(zhèn)痛作用，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 算盤(pán)子提取物 取干燥算盤(pán)子根適量，粉碎后用80%的乙醇加熱回流提取三次，合并三次濾液并濃縮至2 g/ml備用。

1.1.2 試劑與儀器 阿司匹林片，批號(hào)：060807，舒泰神(北京)藥業(yè)有限公司；角叉菜膠，批號(hào)：110H3367，Sigma公司生產(chǎn)，臨用前以生理鹽水配成1%的濃度；磷酸組胺，臨用前以生理鹽水配制成0.2 μg/ml組胺標(biāo)準(zhǔn)液備；過(guò)氯酸，青島正業(yè)試劑儀器有限公司；GJ一8402型熱板測(cè)痛儀，深圳瑞沃德生命科技公司。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取清潔級(jí)SD大鼠，雄性，體重160～180 g；清潔級(jí)昆明種小鼠，雌性，體重18～22 g，均由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹實(shí)驗(yàn) 按文獻(xiàn)[3]將大鼠隨機(jī)分為6組，即對(duì)照組，算盤(pán)子提取物大、中、小劑量組，模型組和阿司匹林組，每組10只。算盤(pán)子提取物大、中、小劑量組分別灌服4.8、2.4、1.2 g/kg濃度 (按體表面積計(jì)，分別相當(dāng)于人用等效劑量的4倍、2倍和1倍)的算盤(pán)子提取物，阿司匹林組灌服阿司匹林0.2 g/kg，對(duì)照組和模型組灌胃等量生理鹽水，每天1次，連續(xù)灌胃8 d。于末次灌胃前，先測(cè)量各組大鼠足跖周長(zhǎng)，灌胃后1 h于大鼠右后足跖皮下注入1%角叉菜膠0.1 ml/只致炎，致炎后的2、4、6 h分別測(cè)定大鼠右足跖周長(zhǎng)，計(jì)算腫脹度值(腫脹度值=致炎后足跖周長(zhǎng)-致炎前足跖周長(zhǎng))。

1.2.2 炎癥組織中組胺含量的測(cè)定 待測(cè)完大鼠足跖周長(zhǎng)6 h后，將大鼠斷頸椎處死，于踝關(guān)節(jié)上方0.5 cm處將致炎腫脹足剪下，蒸餾水洗凈泥沙，拭盡水液待測(cè)。對(duì)照組大鼠取相同側(cè)關(guān)節(jié)按同樣方法取標(biāo)本測(cè)定。將炎足剪碎稱(chēng)重，按重量體積加入9倍體積容量的0.4 mol/L的過(guò)氯酸中，用高倍勻漿機(jī)勻漿，放置1 h后，離心。按文獻(xiàn)[4]方法測(cè)定足組織浸泡液中OD值并計(jì)算組胺含量。組胺含量(μg/ml)=(T樣本-T樣本空白)/(T標(biāo)準(zhǔn)-T標(biāo)準(zhǔn)空白)×0.2×1/組織重量(g)。

1.2.3 熱刺激小鼠疼痛實(shí)驗(yàn) 篩選合格小鼠：熱板溫度恒定在(55+0.5)℃10 min后，取小鼠進(jìn)行篩選，凡舔后足時(shí)間小于5 s或大于30 s或跳躍者棄之不用。選合格小鼠50只，隨機(jī)分為算盤(pán)子提取物大、中、小劑量組，對(duì)照組和阿司匹林組。每組10只，測(cè)其正常痛閾值，作為該鼠給藥前痛閾值。算盤(pán)子提取物大、中、小劑量組分別灌服4.8、2.4、1.2 g/kg濃度的算盤(pán)子提取物，按小鼠體重1 ml/100 g計(jì)算灌胃藥液量，阿司匹林組灌服阿司匹林0.2 g/kg，對(duì)照組灌胃等量生理鹽水，每天1次，連續(xù)灌胃8 d。末次給藥后30、60、90 min分別測(cè)定小鼠痛閾值。

2 結(jié)果

2.1對(duì)角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的影響算盤(pán)子提取物大、中兩個(gè)劑量組能明顯抑制角叉菜膠引起的大鼠足跖致炎后的2、4、6 h腫脹，小劑量組能明顯抑制角叉菜膠引起的大鼠足跖致炎后的4、6 h腫脹，其腫脹率明顯低于模型組；與阿司匹林組比較，算盤(pán)子提取物各個(gè)劑量組均無(wú)差異性(P>0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 算盤(pán)子提取物對(duì)角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹的影響

2.2對(duì)大鼠炎癥組織液中組胺含量的影響算盤(pán)子提取物大、中、小三個(gè)劑量組均能明顯降低大鼠炎癥組織液中組胺含量，與模型組比較差異顯著(P<0.05或P<0.01)；與阿司匹林組比較，算盤(pán)子提取物各劑量組均無(wú)顯著性差異。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3對(duì)熱刺激小鼠疼痛反應(yīng)的影響算盤(pán)子提取物大、中兩個(gè)劑量組能明顯提高熱刺激小鼠給藥后30、60、90 min的痛閾值，小劑量組能明顯提高熱刺激小鼠給藥后60、90 min的痛閾值，與阿司匹林組比較，算盤(pán)子提取物各劑量均無(wú)明顯差異。結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 算盤(pán)子提取物對(duì)大鼠炎癥組織液中組胺含量的影響

3 討論

炎癥是指具有血管系統(tǒng)的活體組織對(duì)損傷因子所發(fā)生的防御反應(yīng)，臨床表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛[6]。炎癥是機(jī)體常見(jiàn)而又重要的基本病理過(guò)程，在炎癥早期，血管受到刺激，血管內(nèi)皮間隙擴(kuò)大，血管壁通透性增強(qiáng)，白細(xì)胞和蛋白質(zhì)等滲出到組織間隙，造成組織腫脹。因此，腫脹是炎癥早期的重要指標(biāo)。在炎癥晚期和慢性炎癥期，由于內(nèi)皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞和實(shí)質(zhì)細(xì)胞等增生，形成肉芽組織增生。本文采用炎癥腫脹模型觀察了算盤(pán)子提取物對(duì)角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的影響，在本實(shí)驗(yàn)劑量下，算盤(pán)子提取物能對(duì)炎癥早期的組織腫脹有顯著的抑制作用。

表3 算盤(pán)子提取物對(duì)熱刺激小鼠疼痛反應(yīng)的影響

組胺是自體活性物質(zhì)之一， 在體內(nèi)由組氨酸脫羧基而成，以皮膚、支氣管黏膜、腸黏膜和神經(jīng)系統(tǒng)中含量較多[5]。當(dāng)機(jī)體受到理化刺激或發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)時(shí)，可導(dǎo)致組胺釋放，與組胺受體結(jié)合而產(chǎn)生生物效應(yīng)，成為機(jī)體在炎癥狀態(tài)下的致炎和致痛炎癥介質(zhì)，并能導(dǎo)致疼痛的產(chǎn)生，加重炎癥反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)在檢測(cè)大鼠炎癥組織液中組胺含量時(shí)，發(fā)現(xiàn)算盤(pán)子提取物大、中、小三個(gè)劑量組均能明顯降低大鼠炎癥組織液中組胺水平，提示算盤(pán)子提取物的消炎作用可能與降低炎癥部位組胺含量有關(guān)。

疼痛是由于痛覺(jué)感受器受到刺激而產(chǎn)生興奮，沖動(dòng)經(jīng)傳入神經(jīng)纖維到達(dá)大腦某些神經(jīng)細(xì)胞， 或中樞通路的某一水平受損時(shí)所產(chǎn)生的一種不舒適的感覺(jué)。引起疼痛的原因眾多，本文采用熱刺激致痛法觀察到， 算盤(pán)子提取物對(duì)熱刺激引起的疼痛可明顯地延長(zhǎng)反應(yīng)潛伏期。

本研究采用抗炎和鎮(zhèn)痛模型證實(shí)了算盤(pán)子提取物有很好的抗炎鎮(zhèn)痛作用，并且發(fā)揮藥效時(shí)間短，作用持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，存在一定的劑量效應(yīng)。 本實(shí)驗(yàn)對(duì)算盤(pán)子提取物僅采用80%的乙醇加熱回流三次的傳統(tǒng)方法，故在以后的工作中擬對(duì)算盤(pán)子提取物、有效部位和化學(xué)成分進(jìn)行進(jìn)一步分離、純化和鑒定，確定算盤(pán)子抗炎、 鎮(zhèn)痛的有效成分， 進(jìn)一步探討其抗炎、 鎮(zhèn)痛機(jī)制及其在體內(nèi)的代謝規(guī)律，為算盤(pán)子的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用提供更多的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 賈敏如，李星煒.中國(guó)民族藥志要[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2005：301.

[2] Puapairoj P，Naengchomong W，Kijjoa A，et al.Cytotoxic Activity of lupine-type triterpenes from Glachidion sphaerogynum and Glachidion ericocarpum[J].Planta Med，2004，70：1 234-1 236.

[3] 李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].上海：上?？茖W(xué)出版社，1999:370.

[4] 竇淑云,符云峰.血及組織中組織胺的熒光測(cè)定法[M].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1981，4(2)：10.

[5] 周興明，李勁松，楊勝號(hào)，等.活血接骨膏驗(yàn)方抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[M].湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2010，27(3)：9-11.

[6] 溫炬,陳寶田,蘭海梅,等.消風(fēng)散抗炎活性的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[J].廣東醫(yī)學(xué),2009,30(12):1 772-1 774.