陳 琳 侯 梅 吳 琦

大腸癌是我國(guó)最常見的腫瘤之一,而化學(xué)治療是目前大腸癌主要的治療方法之一,但部分大腸癌對(duì)化學(xué)治療的敏感性較差,腫瘤細(xì)胞耐藥性是化學(xué)治療失敗的主要原因。切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因(The excision repair cross-complementing-1,ERCC1)是核苷酸切除修復(fù)(nucleotide excision repair,NER)活性的標(biāo)志性基因,也是細(xì)胞存活必須的 DNA修復(fù)基因。有關(guān) ERCC1表達(dá)水平與大腸癌術(shù)后生存期的關(guān)系,目前研究甚少。為此,我們探討了 ERCC1在大腸癌組織內(nèi)表達(dá)特征及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料

收集四川省人民醫(yī)院 2003年 1月 ～2003年 12月手術(shù)切除的結(jié)直腸癌組織石蠟標(biāo)本 59例,患者術(shù)前均未接受放、化療。其中男性 27例,女性 32例,年齡 35～83歲,中位年齡 63歲。病理診斷均為腺癌,其中高中分化 51例,低分化 8例。發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 20例,發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移 3例。按國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)1997年修訂的 TNM分期標(biāo)準(zhǔn)分為Ⅰ ～Ⅱ期 36例,Ⅲ期 ～Ⅳ期23例。術(shù)后進(jìn)行全身化療(有些雖為早期病例,但有高危因素,或患者堅(jiān)決要求化療),采用含 5-Fu/CF方案(4例)或 FOLFOX 4方案(55例)。觀察生存期,隨訪至 2007年 12月,若末次隨訪仍然存活則定為截尾值。

1.2 試劑與方法

用 Lica 2245型輪轉(zhuǎn)式石蠟組織切片機(jī)制作大腸癌石蠟標(biāo)本,切片 4μm厚,每例標(biāo)本分別制片 9張。其中 1張切片作常規(guī) HE染色,另外 8張用于免疫組化標(biāo)記?？?ERCC1單克隆抗體為即用型試劑。采用免疫組化 LDP(labeled dextran polymermethod,LDP)法進(jìn)行切片標(biāo)記。實(shí)驗(yàn)對(duì)照設(shè)置:用已知陽(yáng)性的組織切片作實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性對(duì)照,相同切片以 PBS替代第一抗體作為空白對(duì)照?？?ERCC1單克隆抗體為美國(guó) Neomarker公司產(chǎn)品,購(gòu)于北京中杉金橋生物試劑公司。

1.3 觀察標(biāo)準(zhǔn)

ERCC1表達(dá)定位于細(xì)胞核,癌細(xì)胞胞核內(nèi)出現(xiàn)黃～棕黃色信號(hào)為陽(yáng)性反應(yīng),未出現(xiàn)為陰性。結(jié)合切片內(nèi)癌細(xì)胞陽(yáng)性細(xì)胞百分比與陽(yáng)性細(xì)胞的信號(hào)強(qiáng)度,將結(jié)果分為:無表達(dá)(-):切片中無陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞,未見陽(yáng)性反應(yīng)信號(hào);低度表達(dá)(+):腫瘤陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) ＜25%,陽(yáng)性信號(hào)弱;中度表達(dá)(++):25%＜腫瘤陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) ＜50%,陽(yáng)性信號(hào)較強(qiáng);高度表達(dá)(+++):腫瘤陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) ＞50%,陽(yáng)性信號(hào)顯著。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析方法

采用 SPSS13統(tǒng)計(jì)軟件,率的分析用卡方檢驗(yàn)。生存分析采用 Kaplan-Meier法繪制生存曲線,生存率的比較采用 Log-rank檢驗(yàn)。采用雙側(cè)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 ERCC1在大腸癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系

癌細(xì)胞胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色反應(yīng)信號(hào)即為陽(yáng)性表達(dá)。59例結(jié)直腸癌中,ERCC1陽(yáng)性率為 28.8%(17/59),除 1例為中度陽(yáng)性外,其余均為弱陽(yáng)性表達(dá)。ERCC1表達(dá)與性別、組織病理分化程度、浸潤(rùn)深度、部位、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期無關(guān)(P＞0.05),但≤60歲的 25例中 ERCC1陽(yáng)性率為 44.0%(11/25),＞60歲的陽(yáng)性率為 17.6%(6/34),兩者間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),見表 1。

2.2 ERCC1的表達(dá)與生存分析

隨訪至 2007年 12月,隨訪率為 93.3%,其中死亡32例,存活 23例,失訪 4例,4年總生存率 45.8%。ERCC1陰性病例 4年生存率 54.8%,ERCC1陽(yáng)性病例 4年生存率 23.5%,前者明顯高于后者,但兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.264,P=0.071),見圖 1。

表1 ERCC 1與臨床病理特征的關(guān)系(例)

圖1 ERCC1生存曲線

3 討論

ERCC1是核苷酸切除修復(fù)活性的標(biāo)志性基因,它與 XpF/ERCC4形成異二聚體而發(fā)揮功能 ,參與 DNA鏈的切割和損傷識(shí)別,能修復(fù)紫外線、多種化學(xué)物質(zhì)所造成的損傷,是細(xì)胞存活必須的 DNA修復(fù)基因。ERCC1是標(biāo)志腫瘤患者預(yù)后和鉑類耐藥的重要指標(biāo),在腫瘤治療中具有重要作用。

修復(fù)基因的表達(dá)水平和修復(fù)活性密切相關(guān)。研究表明,ERCC1基因表達(dá)低下是發(fā)生頭頸部腫瘤的高危因素[1]。缺失 ERCC1基因的細(xì)胞修復(fù)紫外線引起的嘧啶二聚體能力下降,容易誘發(fā)細(xì)胞的凋亡反應(yīng)[2]。Mona等[3]發(fā)現(xiàn)結(jié)腸腺瘤與結(jié)腸癌組織中 ERCC1表達(dá)高于正常組織,認(rèn)為 ERCC1表達(dá)升高是結(jié)腸癌和腺瘤的早期階段。國(guó)內(nèi)對(duì)于非小細(xì)胞肺癌 ERCC1的表達(dá)研究較多,而關(guān)于大腸癌 ERCC1表達(dá)的報(bào)道較少。肖永營(yíng)等[4]報(bào)道非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者 ERCC1陽(yáng)性率 50.94%。周彩存等[5]報(bào)道肺鱗癌的 ERCC1表達(dá)率為 29%,肺腺癌為 57%,鱗腺混合癌為 60%?！?0歲患者 ERCC1表達(dá)率為 47%,顯著高于 ＞60歲患者的 30%(P＜0.01)。朱娟等[6]最新報(bào)道結(jié)直腸癌組織中 ERCC1陽(yáng)性率為 52.38%;癌旁組織中陽(yáng)性率為 80.00%;正常結(jié)直腸黏膜組織中陽(yáng)性率為90.00%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,癌組織與癌旁組織、正常組織中 ERCC1的陽(yáng)性率有差異,癌組織中 ERCC1低水平表達(dá)。病理分級(jí)與 ERCC1表達(dá)之間有關(guān),病理分級(jí)越高,ERCC1陽(yáng)性率越低,表達(dá)強(qiáng)度越弱。ERCC1表達(dá)與性別、年齡、部位、分期無關(guān)。本研究結(jié)果顯示大腸癌 ERCC1表達(dá)率為 28.8%,其表達(dá)與性別、組織病理分化程度、浸潤(rùn)深度、部位、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期無關(guān)(P＞0.05),但與年齡有關(guān),提示較年輕的患者可能有較高的對(duì)鉑類藥物的耐藥機(jī)制。目前對(duì)于ERCC1在腫瘤中的表達(dá)結(jié)果報(bào)道不一致,有待于進(jìn)一步研究。

另一方面,DNA損傷修復(fù)能力增強(qiáng)又是引起腫瘤細(xì)胞耐藥的 1個(gè)重要因素。有研究表明,ERCC1過表達(dá)可使停滯在 G2/M期的損傷 DNA迅速修復(fù),導(dǎo)致其對(duì)鉑類耐藥,進(jìn)而降低化療療效。提示癌細(xì)胞同樣會(huì)利用 ERCC1的 DNA修復(fù)能力,抵抗抗癌治療。已有試驗(yàn)證實(shí) ERCC1在細(xì)胞水平和臨床上,是 1個(gè)好的順鉑、卡鉑和奧沙利鉑耐藥的標(biāo)志物[3,7,8]。Olaussen等[9]對(duì)以鉑類為基礎(chǔ)的非小細(xì)胞細(xì)胞肺癌輔助化療研究發(fā)現(xiàn):與 ERCC1高表達(dá)者相比,ERCC1缺乏者可從鉑類為基礎(chǔ)的輔助化療中受益,總生存期延長(zhǎng) (P＜0.01),而未接受化療者中,ERCC1陽(yáng)性者生存期顯著長(zhǎng)于 ERCC1陰性者。提示 ERCC1高表達(dá),對(duì)不接受化療者是良好的預(yù)后因素,而對(duì)接受以鉑類為基礎(chǔ)的化療患者則正好相反。國(guó)內(nèi)肖永營(yíng)等[4]研究結(jié)果也證實(shí) ERCC1蛋白表達(dá)與鉑類藥物化療敏感性存在顯著關(guān)系,ERCC1高蛋白表達(dá)將導(dǎo)致 NSCLC標(biāo)準(zhǔn)化療方案中對(duì)鉑類藥物的耐藥。本研究中 ERCC1的表達(dá)與生存分析結(jié)果顯示大腸癌術(shù)后化療的病例 ERCC1表達(dá)陽(yáng)性的病例 4年生存率為 23.5%,低于陰性病例的生存率,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,可能與樣本量較小有關(guān),但也一定程度上提示 ERCC1的高表達(dá)往往引起鉑類制劑耐藥,導(dǎo)致預(yù)后不良。由此推測(cè)對(duì)接受以鉑類為基礎(chǔ)的大腸癌化療者來說加用抑制 ERCC1表達(dá)的藥物來克服耐藥,如吉西他濱能通過下調(diào) ERCCl表達(dá)而增強(qiáng)對(duì)順鉑的敏感性[10],兩藥聯(lián)合可增加療效、逆轉(zhuǎn)耐藥,為耐藥逆轉(zhuǎn)劑的研制和藥物聯(lián)合應(yīng)用提供了新的思路。

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