延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院 耿春銀 張 敏＊

通化市畜牧局 孫健

吉林省延吉市畜牧防疫站 孫鐵鎮(zhèn)

日糧中添加納豆菌制劑可以促進(jìn)畜禽消化、提高日增重、增強(qiáng)免疫能力等多種功能（張海濤等，2008；繆東等，2005；陳兵等，2003），納豆菌能耐酸、耐堿、耐高溫及耐擠壓，在制粒過程及酸性胃環(huán)境中均能保持穩(wěn)定性，因此納豆菌成為近年來(lái)研究微生態(tài)制劑的一個(gè)熱門菌種。目前對(duì)納豆微生態(tài)制劑在生產(chǎn)中的應(yīng)用研究國(guó)內(nèi)報(bào)道不多，對(duì)其在豬生產(chǎn)中與抗生素的比較研究也比較少。本試驗(yàn)通過向仔豬飼料中添加納豆菌制劑，并與抗生素組進(jìn)行比較，對(duì)仔豬健康、生產(chǎn)性能、飼料利用情況、血液生化指標(biāo)、血液免疫指標(biāo)、腸道主要菌群及經(jīng)濟(jì)效益等指標(biāo)進(jìn)行全面分析，旨在為納豆菌微生態(tài)制劑替代抗生素的應(yīng)用中提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌制劑 納豆芽孢桿菌菌種由昆山市科新環(huán)境生物工程公司提供。納豆菌制劑以黃豆為發(fā)酵底物制于延邊大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系微生物實(shí)驗(yàn)室，平板菌落記數(shù)檢測(cè)納豆芽孢桿菌含量≥ 5×108CFU/g。

1.1.2 日糧 根據(jù)NRC（1998）豬營(yíng)養(yǎng)需要量、中國(guó)瘦肉型豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（1987）以及在日糧中不添加動(dòng)物性原料為原則的條件下，配制試驗(yàn)豬的基礎(chǔ)日糧，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.1.3 供試豬 購(gòu)自汪清縣職業(yè)高中養(yǎng)殖基地，選擇生長(zhǎng)發(fā)育正常的63頭同一胎次、體重較一致的長(zhǎng)×大二元斷乳仔豬。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 將供試豬按體重、性別隨機(jī)分為3組，即對(duì)照組、抗生素組、納豆組，每組21頭仔豬，組內(nèi)設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)7頭仔豬，以組內(nèi)、組間無(wú)顯著差異（P＞0.05）為原則。試驗(yàn)期為30 d，預(yù)試期2 d。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，抗生素組在基礎(chǔ)日糧中添加阿莫西林（40 mg/kg）和金霉素（65 mg/kg），納豆組為在基礎(chǔ)日糧基礎(chǔ)上添加1500 mg/kg納豆菌素制劑。

1.2.2 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)期采取自由飲水、自由采食的方法。日喂2次，計(jì)量不限量，全期計(jì)算總采食量。并隨時(shí)觀察并記錄豬的健康及腹瀉等情況。

1.3 測(cè)定指標(biāo)

1.3.1 斷奶仔豬腹瀉率、腹瀉頻率、腹瀉指數(shù)的測(cè)定

腹瀉率/%=腹瀉頭數(shù)/試驗(yàn)豬仔總頭數(shù)×100；

腹瀉頻率/%=腹瀉頭數(shù)×腹瀉天數(shù)/（試驗(yàn)豬仔總頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)）×l00；

腹瀉指數(shù)＝糞便評(píng)分之和/試驗(yàn)仔豬總頭數(shù)。

1.3.2 仔豬生產(chǎn)性能指標(biāo)的測(cè)定 在試驗(yàn)正式開始的第 1、5、10、20 d和結(jié)束時(shí)空腹逐頭稱重，記錄每日各組耗料量。并計(jì)算日增重、日采食量、料重比等指標(biāo)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.3.3 飼料消化率的測(cè)定 在飼養(yǎng)試驗(yàn)?zāi)┢趶母髟囼?yàn)組每個(gè)重復(fù)中選擇2頭平均體重相近試驗(yàn)仔豬，采用全收糞法連續(xù)進(jìn)行7 d的消化代謝試驗(yàn)，并測(cè)定干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗纖維、鈣、磷等消化率，并對(duì)結(jié)果行進(jìn)統(tǒng)計(jì)分析。

1.3.4 仔豬血液生理生化指標(biāo)的測(cè)定 試驗(yàn)30 d時(shí)采集仔豬前腔靜脈血液10 mL，經(jīng)抗凝及離心處理后用于血液常規(guī)指標(biāo)及血液免疫學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)。

1.3.5 直腸內(nèi)大腸桿菌、乳酸桿菌的測(cè)定 用棉棒插入仔豬直腸內(nèi)刮去腸道內(nèi)容物，將腸道內(nèi)容物放入已滅菌塑料袋中低溫冷藏，運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室后進(jìn)行菌落培養(yǎng)，并對(duì)大腸桿菌、乳酸桿菌進(jìn)行鑒定計(jì)數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS 11.5軟件作方差分析和多重比較，多重比較采用LSD法，試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 各試驗(yàn)組對(duì)斷奶仔豬死亡率與腹瀉率的影響 見表2。本試驗(yàn)結(jié)果表明，納豆組的腹瀉率較對(duì)照組低18.32個(gè)百分點(diǎn)、較抗生素組低2.53個(gè)百分點(diǎn)，納豆組的腹瀉頻率較對(duì)照組、抗生素組分別低10.02、8.66個(gè)百分點(diǎn)。納豆組的腹瀉指數(shù)較對(duì)照組、抗生素組分別低1.38%、0.25%。

表2 斷奶仔豬死亡率與腹瀉率

2.2 各試驗(yàn)組對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響 見表3。經(jīng)過30 d的飼養(yǎng)試驗(yàn)后，納豆組平均末重與對(duì)照組相比提高7.71%（P＜0.05），平均日增重較對(duì)照組提高13.39%（P＜0.05），平均日采食量較對(duì)照組增加 13.73%（P＜0.05）），納豆組、抗生素組兩組的平均末重、平均日增重、日采食量相近，差異不顯著（P ＞ 0.05）。

表3 斷奶仔豬生長(zhǎng)性能統(tǒng)計(jì)

2.3 各試驗(yàn)組對(duì)飼糧消化率的影響 見表4。經(jīng)消化試驗(yàn)并測(cè)定干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗纖維、鈣、磷等消化率，結(jié)果表明，納豆組、抗生素組對(duì)日糧各營(yíng)養(yǎng)組分的表觀消化率要好于對(duì)照組，但三組之間均無(wú)顯著性差異。

2.4 各試驗(yàn)組對(duì)斷奶仔豬糞中大腸桿菌、乳酸桿菌的影響 見表5。結(jié)果表明，納豆組仔豬大腸桿菌數(shù)量相比對(duì)照組降低50.39%（P＜0.01），相比抗生素組大腸桿菌數(shù)量降低11.27%（P＜0.05）；納豆組仔豬乳酸桿菌數(shù)量相比對(duì)照組增高69.76%（P ＜ 0.01），相比抗生素組高出 52.08%（P＜0.01）。試驗(yàn)結(jié)果表明，納豆菌素抑制大腸桿菌數(shù)量，促進(jìn)乳酸桿菌生長(zhǎng)的效果較為明顯，要優(yōu)于抗生素組。

表4 各試驗(yàn)組對(duì)飼糧消化率的影響 %

表5 各試驗(yàn)組對(duì)大腸桿菌、乳酸桿菌的影響

2.5 各試驗(yàn)組對(duì)仔豬血液生化指標(biāo)的影響 見表6。結(jié)果表明，納豆組的葡萄糖、谷草轉(zhuǎn)氨酶、高密度脂蛋白、總膽固醇、堿性磷酸酶均高于對(duì)照組且差異顯著（P＜0.05）；納豆組與抗生素組相比較總蛋白、白蛋白、球蛋白、尿素氮、高密度脂蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表6 各試驗(yàn)組對(duì)仔豬血液生化指標(biāo)的影響

2.6 各試驗(yàn)組對(duì)仔豬血液免疫指標(biāo)的影響

2.6.1 血清中免疫球蛋白含量 見表7。結(jié)果表明，納豆組血清 IgM 的水平（1.84±0.03）g/L與對(duì)照組 （1.75±0.02）g/L相比較提高了 5.14%（P ＜0.05），納豆組與抗生素組各指標(biāo)均無(wú)顯著差異。

2.6.2 ANAE+T淋巴細(xì)胞陽(yáng)性率、T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率 由表8可知，納豆組ANAE+T淋巴細(xì)胞陽(yáng)性率為51.10%，較對(duì)照組提高2.0%（P＜0.05），與抗生素組相比差異不顯著，T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率納豆組相比極顯著高于對(duì)照組。

總體來(lái)看，目前河南省旅游經(jīng)濟(jì)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)仍不均衡，多核心的旅游經(jīng)濟(jì)網(wǎng)絡(luò)布局雖逐漸形成，但存在較嚴(yán)重的核心-邊緣結(jié)構(gòu)，空間網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)有待進(jìn)一步優(yōu)化。為此本文提出以下建議：

表7 各試驗(yàn)組仔豬血清中免疫球蛋白含量

表8 仔豬ANAE+T淋巴細(xì)胞陽(yáng)性率、T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率 %

2.7 經(jīng)濟(jì)效益分析 見表9。由表9可知，對(duì)照組飼糧的成本較抗生素組和納豆組低0.04元/kg和0.03元/kg；但在飼喂30 d后的毛利潤(rùn)，抗生素組、納豆組分別較對(duì)照組提高14.07%、12.96%，抗生素組、納豆組之間的毛利潤(rùn)差異不顯著（P＞0.05）。

表9 各試驗(yàn)組對(duì)仔豬增重的經(jīng)濟(jì)效益分析

3 討論

3.1 納豆菌素對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能及日糧消化率的影響 本試驗(yàn)在無(wú)動(dòng)物蛋白日糧中添加0.15%納豆菌素飼喂斷乳仔豬，納豆組仔豬平均末重、平均日增重較對(duì)照組均顯著提高，與抗生素組無(wú)顯著差異。納豆菌制劑對(duì)仔豬生產(chǎn)性能及日糧消化率的影響，不僅與納豆芽孢桿菌具有分解蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂肪等大分子物質(zhì)的性能及使發(fā)酵產(chǎn)品中富含氨基酸、有機(jī)酸、寡聚糖等多種易被機(jī)體吸收的成分有關(guān)，還與納豆中存在的一些生理活性物質(zhì)有關(guān) （Sumi，1997、1999）。 此外，Samanya 和 Yamauchi（2002）的研究表明，納豆菌能夠提高小腸絨毛的高度。這些因素都是納豆素可提高仔豬生產(chǎn)性能的重要原因。

3.2 納豆菌素對(duì)斷奶仔豬腹瀉的影響 本試驗(yàn)結(jié)果表明，納豆組、抗生素組在腹瀉率、腹瀉頻率及腹瀉指數(shù)上均顯著低于對(duì)照組。納豆組在腹瀉率、腹瀉頻率及腹瀉指數(shù)上顯著低于抗生素組。說明飼用納豆菌素具有拮抗腸道病原細(xì)菌，維護(hù)和調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡的作用，這與納豆菌產(chǎn)生的抗菌素，如多粘菌素和2，6-吡啶二羧酸，對(duì)痢疾桿菌、原發(fā)性大腸桿菌 0157、0111、0144、傷寒菌、沙門氏菌等都有強(qiáng)烈的抑制作用有關(guān) （紀(jì)寧等，2006）。

3.3 納豆菌素對(duì)斷奶仔豬腸道菌群的影響 本試驗(yàn)結(jié)果表明，納豆菌素對(duì)大腸桿菌的抑制作用及促進(jìn)乳酸桿菌生長(zhǎng)效果更為明顯。這可能與細(xì)菌在消化道定殖的順序有關(guān)。試驗(yàn)結(jié)果表明，納豆菌復(fù)活后在腸道中迅速繁殖，消耗了腸道中的大量氧氣，降低了腸內(nèi)氧濃度，改善了乳酸桿菌等厭氧菌的生長(zhǎng)環(huán)境，而同時(shí)也使腸道中原本存在的需氧菌腸桿菌和腸球菌等的生長(zhǎng)因缺氧受到抑制。這與陳兵等（2008）相關(guān)報(bào)道相一致。Osawa等（1994）研究結(jié)果也表明，納豆芽孢桿菌具有抑制沙門氏菌、傷寒菌、痢疾菌及O157∶H7大腸桿菌等致病菌的作用，納豆芽孢桿菌還可滅活葡萄球菌腸毒素。

3.4 納豆菌素對(duì)斷奶仔豬血液生化指標(biāo)的影響納豆組的血液生化指標(biāo)中葡萄糖、谷草轉(zhuǎn)氨酶、高密度脂蛋白、總膽固醇均高于對(duì)照組且差異顯著；與抗生素組相比較總蛋白、白蛋白、球蛋白、葡萄糖、尿素氮、高密度脂蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶均差異不顯著。結(jié)果表明，添加納豆菌素可改善營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收及代謝，血液指標(biāo)測(cè)定值在正常生理范圍內(nèi)，表明納豆菌素對(duì)仔豬肝臟、心臟等生理器官無(wú)不良影響。

3.5 納豆菌素對(duì)斷奶仔豬免疫機(jī)能的影響 Inooka和Kimura（1983）研究發(fā)現(xiàn)，納豆芽孢桿菌飼喂雛雞后，能夠增強(qiáng)雛雞體液免疫，并認(rèn)為飼喂納豆芽孢桿菌在雛雞免疫反應(yīng)上起一個(gè)很重要的作用，該菌能顯著提高仔雞脾臟的T、B淋巴細(xì)胞比例，對(duì)雞的細(xì)胞免疫有一定的影響。Duc等（2004）的研究結(jié)果表明，給鼠口服芽孢桿菌，刺激了鼠全身性的IgG反應(yīng)。本試驗(yàn)中納豆組與對(duì)照組相比較血清IgM水平分別提高5.14%（P＜0.05），而IgG、IgA的水平變化差異不顯著，表明納豆組對(duì)仔豬體液免疫影響不是很明顯。

3.6 各試驗(yàn)組經(jīng)濟(jì)效益分析 在相同的飼養(yǎng)條件下，抗生素組、納豆組均可提高仔豬健康狀況，促進(jìn)采食量的提高，取得明顯的經(jīng)濟(jì)效益。

4 小結(jié)

本試驗(yàn)結(jié)果表明，納豆微生態(tài)制劑組、抗生素組與對(duì)照組相比，各個(gè)指標(biāo)均優(yōu)于對(duì)照組；在促進(jìn)飼料消化、促生長(zhǎng)、提高仔豬免疫力方面納豆組與抗生素組無(wú)顯著差異，且在抗大腸桿菌方面，納豆微生態(tài)制劑組要優(yōu)于抗生素組。從整個(gè)試驗(yàn)期成本看，納豆組與抗生素組無(wú)差異，因此，納豆微生態(tài)制劑可替代抗生素用于斷奶仔豬前期斷奶料中。

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