河北北方學(xué)院成人教育學(xué)院(張家口 075000) 劉正泉 薄愛(ài)華

研究表明任何腫瘤體積達(dá)到 2～ 3mm3時(shí),要繼續(xù)生長(zhǎng)必須依賴內(nèi)部新的血管形成,這些新血管不光為腫瘤細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng),同時(shí)為癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供通道[1]。因此新生血管的建立,是癌細(xì)胞培殖、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的重要過(guò)程,該過(guò)程受到多種細(xì)胞因子的調(diào)節(jié),其中血管生成素(Angiogenin,Ang)家族和血管生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在血管新生過(guò)程中有重要作用。目前它們已成為抗腫瘤治療的重要靶點(diǎn)[2]。為了探討 Ang和 VEGF在乳腺良、惡性腫瘤內(nèi)表達(dá)狀況、意義以及它們的相關(guān)性,本實(shí)驗(yàn)利用SABC免疫組織化學(xué)方法,檢測(cè)了乳腺癌 76例,乳腺腺瘤 36例,現(xiàn)將結(jié)果分析報(bào)告如下。

材料與方法

1 臨床資料 自 2007年 6月至 2009年 4月收集張家口市河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院、第三附屬醫(yī)院和張家口市第五醫(yī)院外科乳腺癌手術(shù)切除標(biāo)本 76例,腺瘤標(biāo)本 36例,其乳腺癌患者年齡分布為 27～ 72歲,平均 54歲 ,中位年齡為 50.5歲。腺瘤患者年齡分布 25～ 61歲,平均 42歲,中位年齡 42.5歲。

2 標(biāo)本處理及染色 將新鮮標(biāo)本固定于 10%中性甲醛液內(nèi)(24h),常規(guī)石蠟包埋,切片厚度 5 μ m。裱片后 37℃保存、待染。免疫組化染色 鼠抗人 Ang-2和VEGF單克隆抗體、SP免疫組織化學(xué)試劑盒和 DAB顯色劑均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。染色程序嚴(yán)格按照試劑盒規(guī)程要求進(jìn)行。陽(yáng)性對(duì)照為已知 Ang,VEGF陽(yáng)性胃癌切片。陰性對(duì)照以 PBS代替Ⅰ抗。

3 結(jié)果判斷 VEGF,Ang陽(yáng)性者癌細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色,近胞膜處著色更深;凡 10個(gè)高倍視野(×400)陽(yáng)性細(xì)胞＞5%者為陽(yáng)性病例;陽(yáng)性細(xì)胞少于 5%者為陰性病例。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SPSS10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn),以P＜0.05為有顯著性差異,P＜0.01為有極顯著性差異;相關(guān)性分析采用四格聯(lián)列表法,相關(guān)系數(shù) r＞0.5為高度正相關(guān)。

結(jié) 果

1 Ang-2、VEGF在乳腺良惡性腫瘤中的表達(dá)見(jiàn)表 1。乳腺癌組 Ang-2陽(yáng)性率為 67.11%(51/76),顯著高于腺瘤中的陽(yáng)性率[33.33%(12/36),P＜0.05]。VEGF在乳癌中陽(yáng)性率為 60.52%(46/76),顯著高于腺瘤組中的陽(yáng)性率[19.44%(7/36),P＜0.05]。

2 Ang-2和 VEGF表達(dá)與病理類型及臨床分期等生物學(xué)特性的關(guān)系 見(jiàn)表 2。

表1 Ang-2、VEGF在乳腺良、惡性腫瘤表達(dá)與患者年齡的關(guān)系 [n(%)]

表2 Ang-2,V EGF在乳腺癌過(guò)表達(dá)與生物學(xué)特性的關(guān)系[n(%)]

經(jīng)四格聯(lián)列表法統(tǒng)計(jì) Ang-2與 VEGF相關(guān)系數(shù)為 0.63(r=0.63),說(shuō)明兩者在乳腺癌中表呈顯顯著正相關(guān),說(shuō)明它們?cè)诖龠M(jìn)血管新生和腫瘤轉(zhuǎn)移方面有協(xié)同作用。

討 論

1 Ang家族及其在新生血管中的作用 Ang是血管生成因子中具有核糖核酸酶(RNase)活性的因子,是一種分泌型單鏈堿性蛋白。分布于血漿和腫瘤組織中[3]。 Ang有 4個(gè)亞型 (Ang1,2,3,4)它們有共同的受體即酪氨酸激酶受體(Tie),目前對(duì) Ang1,2研究較多,該實(shí)驗(yàn)觀察的為 Ang-2在乳腺癌和腺瘤中的表達(dá)狀況。

Ang-2基因定位在 8號(hào)染色體(8p21),分子量為75kD,在腫瘤細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)。 Ang參與血管形成的全過(guò)程,在初始階段它們促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞由原血管向新生血管處遷移;在第二階段 Ang與受體結(jié)合激活內(nèi)皮細(xì)胞中絲裂原蛋白酶,導(dǎo)致細(xì)胞中骨架結(jié)構(gòu)重建,增強(qiáng)細(xì)胞遷移力。同時(shí)內(nèi)皮細(xì)胞中的 Ang伙同受體形成的復(fù)合物,在多種蛋白的協(xié)助下進(jìn)入細(xì)胞核(稱為核轉(zhuǎn)移過(guò)程),發(fā)揮核糖核酸酶(RNase)活性作用,參與 RNA調(diào)控作用,促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖。Sfilgoi等[4～6]發(fā)現(xiàn)高水平 Ang-2表達(dá)的乳腺癌患者易發(fā)生腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,對(duì)預(yù)后判斷有重要意義。

本實(shí)驗(yàn)表明乳腺癌中 Ang-2陽(yáng)性率明顯高于乳腺瘤;在乳腺癌臨床分期Ⅲ、Ⅳ期組和淋巴轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性率顯著高于分期Ⅰ、Ⅱ期組和無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移組。因此,提示 Ang-2陽(yáng)性表達(dá)是乳腺癌早期診斷和提示后不良的重要指標(biāo)。

2 VEGF性質(zhì)及其在乳腺癌高表達(dá)的意義VEGF是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞分裂素,它以同源二聚體的方式存在,是一種糖蛋白,具有很強(qiáng)的血管通透劑作用[7]。其家族包括 5個(gè)成員,分別命名為 VEGFA、B、C、D和 piGF,分子量不同,其范圍為 34～45kD[A]。VEGF通過(guò)與血管內(nèi)皮細(xì)胞上三種酪氨酸激酶 受體 VEGFR-1(FLT-1)、VEGFR-2(FLT-2)和VEGFR-3(FLT-3)結(jié)合,從而引起一系列信號(hào)傳導(dǎo),促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖與遷移,最終引起血管和淋巴管形成,并且使血管通透性增高[8,9]。為腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移提供了條件。亦有報(bào)告[10],VEGF能上調(diào)腫瘤細(xì)胞中 BCL-2基因,抑制細(xì)胞凋亡,從而促進(jìn)腫瘤增長(zhǎng)。

本實(shí)驗(yàn)表明乳腺癌中 VEGF陽(yáng)性率達(dá) 60.52%,明顯高于腺瘤。臨床分期高(Ⅲ、Ⅳ期)組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性率高于分期(Ⅰ、Ⅱ期)組和無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移組。提示VEGF高表達(dá)是提示患者預(yù)后不良的重要指標(biāo)。

3 VEGF和 Ang-2的相關(guān)性 有研究表明 Ang-2對(duì)血管生成的作用和 VEGF是否存在有重要關(guān)系。當(dāng) VEGF不存在時(shí) Ang-2無(wú)明顯促血管生成作用;只有當(dāng) VEGF存在時(shí) Ang-2誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞分裂,移位和新的血管形成[11]。本實(shí)驗(yàn)證明乳腺癌中 EGFR和Ang-2表達(dá)是顯著正相關(guān),提示 EGFR和 Ang-2在乳腺癌內(nèi)血管新生過(guò)程中有協(xié)同效應(yīng)。因此臨床采用VEGF和 Ang-2抑制劑是效果良好的靶向治療。據(jù)Oliner等[12]研究用 Ang-2抗體治療小鼠腫瘤,發(fā)現(xiàn)腫瘤內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生受到抑制,腫瘤體積縮小。目前從臨床試驗(yàn)獲得的數(shù)據(jù)表明,針對(duì) V EGF的抗腫瘤藥物達(dá)到了如下效果[13,14]:①破壞腫瘤血管;②使腫瘤血管及血管微環(huán)境正?；?③減少血液循環(huán)中的內(nèi)皮細(xì)胞及其祖細(xì)胞?？傊?采用抗腫瘤血管形成的治療策略已在抗癌治療中初見(jiàn)端倪,今后仍應(yīng)在機(jī)制研究方面深入一步,為推廣“饑餓”療法提供科學(xué)依據(jù)。

[1] 林丹霞,林英城 .血管生成素在腫瘤中的研究 [J].醫(yī)學(xué)綜述,2008,14(3):535-536.

[2] 何 艷,曹以誠(chéng) .V EGF與血管生成及其在抗腫瘤藥物開(kāi)發(fā)中的作用 [J].生命科學(xué),2008,20(2):222-223.

[3] 張雷香,胥全彬 .血管生成素的結(jié)構(gòu)與功能研究進(jìn)展[J].生物技術(shù)通訊,2006,17(2):248-251.

[4] Sfiligoi C,De-Luca A,Cascone I,et al.Angiopoietin-2 expression in breast cancer correlates with lymph node invasion and short survival[J].In J Cancer,2003,103:466-474.

[5] 黃 欣,王金鳳,徐東剛.血管生成素研究進(jìn)展 [J].軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊,2008,32(2):189-191.

[6] 雷 杰 ,夏登云,費(fèi)建東,等.Ang-2和 ER在乳腺癌良惡性腫瘤的表達(dá)及生物學(xué)意義 [J].河北醫(yī)藥,2009,31(2):137-138.

[7] Gridley T.Vascularbiology:vesselguidance[J].Nature,2007,445(7129):722-723.

[8] Rakesh K J,Dan GD,Jeffrey WC.Lessons from phaseⅢclinical trialsonanti-V EGF therapyforcancer[J].Nature,2006,3(1):24-40.

[9] Aghi M,Kenneth SC,Rachael J,et al.Tumor stromalderived factor-1recruits vascular progenitors to mitotic neovasculature,where microenvironmentin fluencestheir differentiatedphenotypes[J].Cancer Res,2006,66(18):9054-9064.

[10] 薄愛(ài)華,蘆廣平,閆愛(ài)春,等.EGFR和 V EGF在乳腺癌中表達(dá)的臨床意義 [J].中國(guó)腫瘤臨床,2007,34(23):1324-1326.

[11] 何立麗,張偉京,蘇 航,等.Ang-2與 V EGF的協(xié)同作用及其抗腫瘤血管新生治療中應(yīng)用 [J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,2007,15(2):445-448.

[12] Oliner J,Min H,LealJ,et al.Suppression of angiogenesis and tumor growth by selective inhibition of angiopoietin-2[J].Cancer Cell,2004,6:507-510.

[13] 胡 兵,魏于全.表皮生長(zhǎng)因子受體靶向腫瘤生物治療[J].癌癥 ,2004,23(4):471-475.

[14] 湯紅平,張雅潔,顧瑩瑩,等.VEGF-c和 V EGF-D在乳腺癌中表達(dá)及作用 [J].腫瘤,2006,26(6):551-554.