陳宜恒

(附屬菏澤市立醫(yī)院風(fēng)濕科,山東 菏澤 274030)

抗環(huán)瓜氨酸肽等四種抗體聯(lián)合檢測(cè)在早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷中的研究

陳宜恒

(附屬菏澤市立醫(yī)院風(fēng)濕科,山東 菏澤 274030)

目的探討抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體、抗角蛋白杭體(AKA)、抗核周因子(APF)和抗Sa抗體在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)早期診斷的臨床價(jià)值,并分析其臨床相關(guān)因素。方法對(duì)542例RA患者隨訪1年,采用間接法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)抗CCP抗體、AKA抗體,間接免疫熒光法(IIF)檢測(cè)APF與Sa,魏氏法測(cè)定紅細(xì)胞沉降率(ESR),記錄患者的晨僵時(shí)間、關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、不同關(guān)節(jié)受累及DAS28評(píng)分。結(jié)果4種抗體均陽(yáng)性的早期RA為99%;任2種及2種以上抗體陽(yáng)性的早期RA敏感性為83.0%,特異性為65.9%;Sa抗體/抗CCP抗體陽(yáng)性的患者診斷為早期RA的敏感性77.8%,特異性80.5%;抗體均陽(yáng)性和任1.2.3種抗體陽(yáng)性及4種抗體全陽(yáng)性患者的多關(guān)節(jié)腫脹及多個(gè)小關(guān)節(jié)受累的比率分別為48%、57%、59%、70%、70%和71%、71%、72%、76%、82%,抗體均陽(yáng)性的患者中肘關(guān)節(jié)受累比例最大,占72%;關(guān)節(jié)腫脹及多個(gè)小關(guān)節(jié)受累在早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中占比例最大。結(jié)論4種抗體聯(lián)合檢測(cè)可提高RA早期診斷的特異性。

關(guān)節(jié)炎,類風(fēng)濕;抗體;診斷

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種以多關(guān)節(jié)炎癥為特征的系統(tǒng)性自身免疫病。盡管對(duì)RA已有幾十年的研究及一系列診斷標(biāo)準(zhǔn),但由于疾病早期與其它類型關(guān)節(jié)炎較難區(qū)別,導(dǎo)致對(duì)RA的早期診斷非常困難。有資料表明在疾病早期給予系統(tǒng)治療會(huì)明顯改善患者預(yù)后,所以尋找一種能準(zhǔn)確診斷早期RA的方法是當(dāng)務(wù)之急。本研究旨在通過(guò)患者血清抗核周因子(APF)、抗角蛋白抗體(AKA)、抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體及Sa抗體陽(yáng)性情況來(lái)評(píng)估早期RA診斷的臨床價(jià)值,同時(shí)結(jié)合紅細(xì)胞沉降率(ESR)、晨僵時(shí)間、關(guān)節(jié)腫脹數(shù),關(guān)節(jié)壓痛數(shù),不同關(guān)節(jié)受累及DAS28評(píng)分,進(jìn)行臨床相關(guān)因素分析,以期為早期RA的診斷提供依據(jù)。

1 臨床資料

1.1 一般資料 研究對(duì)象是我院2001年8月～2009年8月在風(fēng)濕科門診及住院的542例RA患者,女性390例,男性152例,年齡16～78歲,平均(47±12)歲 ?；颊呔哂嘘P(guān)節(jié)炎臨床表現(xiàn),尚不滿足美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)1987年RA的診斷標(biāo)準(zhǔn),且排除其它風(fēng)濕性疾病。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 1)抗CCP抗體采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)中所采用的抗原是人工合成的CCP,由荷蘭學(xué)者2000年根據(jù)聚角蛋白微絲蛋白的CDNA序例合成由21個(gè)氨基酸組成的環(huán)瓜氨酸肽,樣本的OD值是陰性對(duì)照的正(負(fù))三倍為陽(yáng)性。2)AKA檢測(cè)是間接法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。已知AKA濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將AKA和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色,顏色的深淺和樣品中AKA的濃度呈比例關(guān)系。3)APF檢測(cè)。采用間接免疫熒光法做定性分析,試劑由德國(guó)歐蒙公司提供,血清作1:20稀釋觀察5個(gè)視野,核周均質(zhì)周形橢圓形熒光顆料為陽(yáng)性細(xì)胞,＞5個(gè)細(xì)胞為APF陽(yáng)性,＜2個(gè)為陰性,2～5個(gè)為可疑,于德國(guó)LEICA熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。4)Sa抗體,新鮮人胎盤行勻漿后離心,取上清,加入DE52陰離子交換劑,攪拌,用不同洗脫液洗脫再行透析冷凍干燥,-20℃保存,用20mg胎盤提取物(Sa抗原)溶于180/ulDSD-PAGE樣品緩沖液中,沸水中煮3 min,加樣。在10%的Tris甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝膠中電泳,將分離的蛋白轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜上,所有待測(cè)血清均用緩沖液1:40稀釋,與硝酸纖維膜孵育1 h。洗滌后,加入1:1000稀釋的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)準(zhǔn)記的鼠抗人IgG結(jié)合物,洗滌后加入底物溶液(OPD-H2O2),反應(yīng)10 min,加入終止液,觀察結(jié)果,出現(xiàn)分子量為50.000與55000的2條印跡帶者被判為陽(yáng)性,標(biāo)準(zhǔn)Sa抗原和標(biāo)準(zhǔn)Sa抗體陽(yáng)性血清均由加拿大Menard HA教授提供。5)ESR用魏氏法測(cè)定、

1.3 臨床參數(shù) 1)晨僵時(shí)間。2)關(guān)節(jié)腫脹數(shù)和關(guān)節(jié)壓痛數(shù),關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)28個(gè)包括雙側(cè)近端,指間關(guān)節(jié)掌指導(dǎo)關(guān)節(jié),雙腕、雙肘、雙肩和雙膝關(guān)節(jié)。3)DAS28評(píng)分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 不同抗體陽(yáng)性對(duì)早期RA診斷的意義 從聯(lián)合檢測(cè)抗體的個(gè)數(shù)來(lái)看,4種抗體均陽(yáng)性的患者RA的陽(yáng)性率最高,說(shuō)明4種抗體聯(lián)合監(jiān)測(cè)可以提高早期RA診斷的特異性。

陽(yáng)性抗體與早期 RA診斷分布:抗CCP抗體陽(yáng)性者24例,其中早期RA 18例,占75.00%;AKA 陽(yáng)性者0;APF陽(yáng)性者4例,其中早期RA 2例,占50.00%;Sa抗體陽(yáng)性者46例,其中早期RA 38例,占83.00%;Sa/APF陽(yáng)性者12例,其中早期RA 8例,占67.00%;Sa/AKA陽(yáng)性者6例,其中早期 RA 4例,占67.00%;APF/AKA陽(yáng)性者0;APF/抗CCP抗體陽(yáng)性者6例,其中早期 RA 4例,占67.00%;AKA/抗CCP抗體陽(yáng)性者0Sa/APF/AKA陽(yáng)性者8例,其中早期RA 6例,占 75.00%;Sa/APF/抗 CCP抗體陽(yáng)性者106例,其中早期RA 104例,占98.00%;Sa/AKA/抗CCP抗體陽(yáng)性者14例,其中早期RA 12例,占86.00%;APF/AKA/抗CCP抗體陽(yáng)性者4例,其中早期 RA 2例,占50.00%;Sa/APF/AKA/抗CCP抗體陽(yáng)性者142例,其中早期RA 140例,占99.00%;

4種抗體聯(lián)合監(jiān)測(cè)診為RA分布:抗體陰性者58例,其中早期 RA 20例,占34.00%;任意1種抗體陽(yáng)性者74例,其中早期RA 58例,占 78.00%;任意2種抗體陽(yáng)性者136例,其中早期RA 118例,占87.00%;任意 3種抗體陽(yáng)性者132例,其中早期 RA 124例,占94.00%;4種抗體陽(yáng)性者142例,其中早期 RA 140例,占 99.00%。

2.2 早期RA臨床相關(guān)因素分析 見(jiàn)表3。分析比較ESR、晨僵時(shí)間、關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù),不同關(guān)節(jié)受累及ADS28評(píng)分,關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、小關(guān)節(jié)受累數(shù)均與抗體陽(yáng)性個(gè)數(shù)相關(guān)。在抗體陽(yáng)性的患者中,抗體個(gè)數(shù)越多,壓痛關(guān)節(jié)數(shù)達(dá)3個(gè)以上所占比例越多;3種以下抗體陽(yáng)性的關(guān)節(jié)炎患者有70%關(guān)節(jié)受累呈對(duì)稱性,3種抗體陽(yáng)性的患者中有80%呈對(duì)稱性,在不同抗體個(gè)數(shù)中,4個(gè)抗體均陽(yáng)性的患者的掌指關(guān)節(jié)、近端指間關(guān)節(jié)、肩關(guān)節(jié)、膝關(guān)節(jié)受累的比例最高;從DAS28評(píng)分中可以看出4種抗體全陽(yáng)性,病情緩解的比例是最低,活動(dòng)障礙的比例最高。

表3 多個(gè)臨床相關(guān)因素與抗體陽(yáng)性個(gè)數(shù)百分率關(guān)系

3 討論

RA不可逆性關(guān)節(jié)損害往往發(fā)生在病變的前2年,循證醫(yī)學(xué)證實(shí),前 3～4個(gè)月是治療的窗口期,早期診斷,早期治療起著非常重要的作用,而目前早期診斷仍是世界性難題。

在我國(guó)的RA的發(fā)病率約為0.33%～0.38%,2年內(nèi)即可出現(xiàn)不可逆的關(guān)節(jié)破壞,2年致殘率為50.0%,因此早期診斷、早期治療可大大減少致殘率的發(fā)生。目前常采用的仍是美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1987年修訂的RA分類標(biāo)準(zhǔn),該標(biāo)準(zhǔn)主要依靠臨床表現(xiàn)、X線片以及RF檢測(cè),而符合該診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者已基本進(jìn)入RA中的晚期,因而影響了治療效果。近年在RA的遺傳標(biāo)志、自身抗體方面的研究取得了較大進(jìn)展,相繼發(fā)現(xiàn)了一些對(duì)RA較為特異的自身抗體。我們也進(jìn)行了相關(guān)抗體研究,優(yōu)選了CCP抗體ADF、AKA及Sa抗體,通過(guò)較大規(guī)模的臨床研究取得了一定成效。通過(guò)這四種抗體的聯(lián)合檢測(cè),在提高診斷的敏感性同時(shí)保證一定的特異性,為早期RA的診斷提供特異性指標(biāo),必要時(shí)早期給予積極治療。

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R446.62;R593.22

A

1008-4118(2010)01-0005-03

10.3969/j.issn.1008-4118.2010.01.05

2010-03-01