王麗軍 王會(huì)麗 張 茹 劉麗萍 河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院 (唐山 063000)

柏硝祛毒洗劑是由黃柏、芒硝、地榆、防風(fēng)、甘草等組成的復(fù)方制劑。具有消腫止痛,涼血止血,清熱利濕,臨床用于伴有血便、疼痛、紅腫、瘙癢等癥狀。本實(shí)驗(yàn)對柏硝祛毒洗劑的急性毒性安全性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材 料 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 潔凈級(jí) wister大鼠,雌雄各半(雌性性無孕),體重在 170～ 210g,3～ 4月齡。由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào):SCXK(豫)2005-0001。飼料為本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心自制干糕。大鼠 5只 /籠,自由飲水和攝食。白色豚鼠,雌雄兼有,體重 250-290g,由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào):SCXK(豫)2005-0001。健康白色家兔,雌雄兼有,體重2.00± 0.2kg。

1.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室 溫度為 19± 3℃。濕度 60±5%,采光12h/d,排風(fēng)扇通風(fēng),每天 4次 ,每次至少 30min,環(huán)境安靜無噪音。

1.3 試 劑 硫化鈉(天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠,批號(hào):200061138),2,4二硝基氯代苯 (上海試劑一廠提供,批號(hào):99-07-01,用 70%乙醇將其配成 1%的致敏濃度和 0.1%激發(fā)濃度)。

2 方法與結(jié)果 2.1 急性毒性試驗(yàn) 2.1.1方法:選擇健康 wister大鼠 64只,適應(yīng)環(huán)境 5d后,于實(shí)驗(yàn)前 24h用 8%硫化鈉脫掉大鼠背部脊柱兩側(cè)毛約 8cm×4cm,其中 32只大鼠保持皮膚完整不受損,隨機(jī)分成 4組 ,每組 8只,即對照組(蒸餾水),柏硝祛毒洗劑高劑量組(將柏硝祛毒洗劑用原溶液,按40mL/kg均勻涂抹于脫毛處,每次 10mL/kg,每小時(shí)涂一次,共 4次給完)。柏硝祛毒洗劑中劑量組 (將柏硝祛毒洗劑用開水配制成 1∶3溶液,按 40mL/kg均勻涂抹于脫毛處,每次10mL/kg,每小時(shí)涂 1次,共 4次給完)。柏硝祛毒洗劑低劑量組 (將柏硝祛毒洗劑用開水配制成 1∶ 6溶液,按 40mL/kg均勻涂抹于脫毛處,每次 10mL/kg,每小時(shí)涂一次,共 4次給完)。另 32只大鼠實(shí)驗(yàn)時(shí)用 16號(hào)針頭,在脫毛且消毒的皮膚上劃“#”字,以皮膚滲血為度,其分組與給藥劑量同完整皮膚急性毒性試驗(yàn)。涂抹藥物后每日觀察并記錄大鼠的體重,精神狀態(tài),四肢活動(dòng),皮膚,毛發(fā),眼睛,黏膜,呼吸的變化,有無發(fā)抖,震顫,流涎,腹瀉,嗜睡,昏迷等全身中毒表現(xiàn)和死亡情況。

2.1.2 結(jié)果:涂抹柏硝祛毒洗劑后,大鼠未見異常反應(yīng),飲食,體重,大小便和活動(dòng)均正常;完整皮膚急性毒性試驗(yàn)組大鼠皮膚無紅斑,無水腫,無死亡;破損皮膚急性毒性試驗(yàn)組大鼠皮膚劃痕處可見紅腫,結(jié)痂,劃痕周圍皮膚無紅腫,無死亡,與對照組比較無差別。

2.2 皮膚刺激性試驗(yàn)

2.2.1 方法:選擇健康白色家兔 16只,雌雄兼有,體重 2.00±0.20kg,適應(yīng)環(huán)境 5d,與給藥前 24h在兔背部脊柱兩側(cè)用8%硫化鈉脫毛 (兩側(cè)約 50cm2,無紅斑、水腫及破損)。 16只家兔隨機(jī)分成 4組,每組 4只 ,設(shè)單次涂抹完整皮膚組、單次涂抹破損皮膚組、多次涂抹完整皮膚組和多次涂抹破損皮膚組。均涂抹給藥(破損皮膚組,每只家兔背部脊柱兩側(cè)去毛區(qū)在涂藥前用針頭在涂藥部位皮膚劃“#”字以滲血為度),左側(cè)為受試區(qū),右側(cè)為對照區(qū)。分別于給藥區(qū)涂抹柏硝祛毒洗劑溶液(原液)0.2mL/cm2;對照區(qū)涂以等量的蒸餾水 ,用一層玻璃紙覆蓋保濕,再加紗布覆蓋保護(hù),再用膠布適當(dāng)固定。單次涂抹組:涂抹后 24h,用溫水洗去殘留的受試藥;多次涂抹組:2次 /d,連續(xù)7d,末次涂抹后 24h,用溫水洗去殘留的受試藥。去除受試藥后1h、24h、48h、72h觀察涂抹部位有無紅腫和水腫等情況,以及上述變化的恢復(fù)情況和時(shí)間。

2.2.2 結(jié)果判定及評(píng)價(jià):每只動(dòng)物皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分按下表進(jìn)行刺激反應(yīng)評(píng)分,計(jì)算出平均分值。皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)按無刺激性(＜0.5),輕度刺激性 (＜2.0),中度刺激性(＜6.0),強(qiáng)刺激性(＞6.0)進(jìn)行刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)。

表1 皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表2 皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

2.2.3 結(jié)果:一次給藥或多次給藥結(jié)束后,對照區(qū)與受試區(qū)比較觀察,皮膚刺激反應(yīng)強(qiáng)度均 ＜0.5分,多次給藥期間也未觀察到皮膚有紅斑、水腫等刺激反應(yīng),涂藥部位無色素沉著,無出血點(diǎn),無皮膚粗糙及皮膚菲薄等現(xiàn)象。結(jié)果表明:柏硝祛毒洗劑一次給藥或多次給藥對兔完整皮膚和破損皮膚均無刺激性。

2.3 皮膚過敏試驗(yàn) 2.3.1方法:取健康白色豚鼠,與試驗(yàn)前 24h,采用 8%硫化鈉脫毛劑,將全部受試豚鼠背部脊柱兩側(cè)去毛(每側(cè)約 4cm×4 cm,無紅斑、水腫及破損)。24只豚鼠按體重隨機(jī)分成 3組 ,每組 8只,分別是受試藥組(柏硝祛毒洗劑)、空白對照組(蒸餾水)、陽性對照組(2,4二硝基氯代苯)。將柏硝祛毒洗劑(原液)0.5mL涂在左側(cè)脫毛區(qū),6h后用溫水擦去殘留受試藥,第 7d和 14d以同樣方法重復(fù)?？瞻讓φ战M涂蒸餾水 0.5mL,陽性對照組涂以 1%的 2,4二硝基氯代苯 0.5mL。于末次涂藥 14d時(shí)在動(dòng)物右側(cè)脫毛區(qū)涂藥 0.5mL,6h后去除受試物,立即觀察,并于 24h,48h和 72h重復(fù)觀察豚鼠脫毛區(qū)皮膚涂抹部位有無紅斑和水腫等過敏反應(yīng)情況?？瞻讓φ战M與陽性對照組給藥方法均同受試藥物組。

2.3.2 結(jié)果判定及評(píng)價(jià):實(shí)驗(yàn)結(jié)果按衛(wèi)生部藥政管理局發(fā)布的《中藥新藥研究指南》皮膚過敏反應(yīng)程度的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分,并計(jì)算平均分值。每只動(dòng)物皮膚過敏反應(yīng)程度的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):無紅斑為 0分;勉強(qiáng)可見為 1分;中度紅斑為 2分;嚴(yán)重紅斑為 3分;紫紅色紅斑為 4分。無水腫為 0分;勉強(qiáng)可見為 1分;可見為 2分;皮膚隆起約 1mm,輪廓清楚為 3分;水腫隆起 1mm以上并范圍擴(kuò)大為 4分。進(jìn)行過敏反應(yīng)評(píng)分,計(jì)算出平均分值。致敏率分類按弱致敏性 (0～ 10%),輕度致敏性(20%～ 30%),中度致敏性(40%～60%),高度致敏性(70%～ 80%),極度致敏性(90%～100%)進(jìn)行。根據(jù)致敏率類別進(jìn)行評(píng)價(jià)。

2.3.3 結(jié)果:受試組和空白組各 8只豚鼠皮膚未出現(xiàn)紅斑和水腫,均為 0分;陽性對照組 8只豚鼠中 3只出現(xiàn)重度紅斑 3×3分,2只出現(xiàn)中度紅斑 2×2分,1只可見輕度紅斑為 1× 1分,2只豚鼠出現(xiàn)水腫并紅斑為 4×2分,陽性藥反應(yīng)總積分 22分,平均為 2.75分。陽性致敏物 2,4二硝基氯代苯動(dòng)物皮膚受試區(qū)自激發(fā)給藥 1h后出現(xiàn)紅斑,6h最明顯,24h逐漸消退,72h后紅斑仍可勉強(qiáng)看見,致敏達(dá) 100%。受試藥物柏硝祛毒洗劑組豚鼠皮膚受試區(qū)自激發(fā)給藥后 72h后未出現(xiàn)紅斑及水腫形成,與空白對照組比較無差別。

3 結(jié) 論 試驗(yàn)結(jié)果表明:柏硝祛毒洗劑對大鼠完整、破損皮膚均無急性毒性反應(yīng)。對白兔完整、破損皮膚無刺激性。對豚鼠皮膚不產(chǎn)生致敏反應(yīng),說明柏硝祛毒洗劑是安全的局部外用藥。

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