余杰匡遼紅林凡勝戴俊東孫毅坤
(1北京源生素源生物科技有限公司,北京 102212;2北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院,100102)
HPLC 測定復(fù)方雙花口服液中綠原酸的含量
余杰1匡遼紅1林凡勝1戴俊東2孫毅坤2
(1北京源生素源生物科技有限公司,北京 102212;2北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院,100102)
【摘要】目的:建立復(fù)方雙花口服液中綠原酸的含量測定方法。方法:采用高效液相色譜法,色譜柱為迪瑪C18(250×4.6 mm,5 μm);流動相:0.4%磷酸-乙腈溶液(90∶10);流速:1 mL/min,檢測波長:327 nm;進(jìn)樣量:10 μL。結(jié)果:綠原酸在濃度 150.72~753.60 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(R2=0.999 6),平均回收率為98.87%(RSD=0.76%)。結(jié)論:本方法操作簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好,精密度高,可作為復(fù)方雙花口服液的質(zhì)量控制方法。
【關(guān)鍵詞】復(fù)方雙花口服液;綠原酸;高效液相色譜法
島津LC-10ATVP高效液相色譜儀;SPD-10A檢測器;chromato solutionlight色譜工作站。綠原酸對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供,供含量測定用,批號:110753-200212);復(fù)方雙花口服液(自制,批號為:070408、070409、070410)。甲醇、乙腈為色譜純;磷酸為優(yōu)級純;實(shí)驗(yàn)用水為超純水。
2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)
色譜柱:迪瑪C18(250×4.6 mm,5 μm);流動相:0.4%磷酸-乙腈溶液(90∶10);流速:1 mL/min,檢測波長:327 nm;進(jìn)樣量:10 μL。理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000[2-3]。
2.2 對照品溶液的制備
精密稱取綠原酸對照品適量,置棕色容量瓶中,加50%甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成每1 mL含150 μg的溶液(對照品儲備液在10℃以下保存)。
2.3 供試品溶液的制備
精密量取復(fù)方雙花口服液樣品1 mL,置10 mL具塞離心管中,加甲醇3 mL,搖勻,冰箱中放置過夜,過夜后的藥液置2 000轉(zhuǎn)/分條件下離心15分鐘,上清液轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中。沉淀用2 mL甲醇洗滌,洗滌液置2 000轉(zhuǎn)/分條件下離心5分鐘。將兩次離心得到的上清液收集至同一容量瓶中,甲醇定容,搖勻,微孔濾膜(0.45 μm)濾過。濾液作為供試品溶液。
61例患者中最短DFI為0個月,最長為268個月,中位DFI為36個月。其中DFI≥36個月的31例,DFI<36個月的30例。肺部轉(zhuǎn)移瘤中,乳腺癌的平均DFI最長為93個月,其次為軟組織肉瘤92個月,腎癌平均DFI為57個月,結(jié)直腸平均DFI為30個月。1年、3年、5年的生存率分別為88.4%、35.8%、15.9%,平均生存時間為28.79個月,中位生存時間為25個月。死亡患者中有32例是因?yàn)槌霈F(xiàn)多發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,另有9例因其他疾病導(dǎo)致死亡。
2.4 陰性對照溶液的制備
按處方藥中各藥味比例,自配不含金銀花的群藥,按其工藝制成空白制劑,再按供試品溶液的制備方法制備空白溶液。
2.5 含量測定方法
精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μL,按上述色譜條件分別進(jìn)行測定,依外標(biāo)法計(jì)算供試品溶液含量。對三批樣品綠原酸的含量測定,每批樣品取雙份進(jìn)行平行試驗(yàn),取平均值,結(jié)果見表1。
表1 三批樣品中綠原酸的含量測定結(jié)果
2.6 專屬性試驗(yàn)
吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μL,依照含量測定方法進(jìn)行測定,結(jié)果供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上有相同保留時間的色譜峰,而陰性對照液在此保留時間無色譜峰出現(xiàn),即可視為無干擾。(色譜圖見圖1)。
2.7 線性關(guān)系的考察
精密稱取綠原酸對照品18.84 mg,置25 mL容量瓶中,甲醇溶液定容。精密量取對照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL,分別置于10 mL的容量瓶中,甲醇定容,搖勻,即得。精密吸取上述溶液各10 μL,注入高效液相色譜儀,記錄色譜峰面積,以樣品濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程:Y=13 969X-59 417,R2=0.999 6,綠原酸對照品濃度在150.72~753.60 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。
圖1 高效液相色譜圖
2.8 精密度試驗(yàn)
精密吸取供試品溶液10 μL,注入液相色譜儀,連續(xù)進(jìn)樣5次,依峰面積計(jì)算RSD為1.43%,表明儀器的精密度良好。
2.9 重復(fù)性試驗(yàn)
取同一批樣品(批號070408)6份,按含量測定的方法進(jìn)行測定,測得平均含量為1.104 0 mg/mL,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.46%。
2.10 穩(wěn)定性試驗(yàn)
取樣品(批號070408)適量,按供試液制備方法制備供試液,分別于配制后0,2,4,6,8,12 h進(jìn)樣一次,每次10 μL,按上述色譜條件測定,記錄峰面積。結(jié)果測得RSD= 1.85%。表明樣品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。2.11 加樣回收率
采用加樣回收法,精密量取已知含量(1.076 3 mg/mL)同批樣品1 mL,按低、中、高3個量級(0.753 4 mg/mL,1.054 9 mg/mL,1.205 8 mg/mL)精密加入綠原酸對照品甲醇溶液各1mL,同一量級平行操作3份,按含量測定中供試品溶液的制備方法制備及上述色譜條件測定,計(jì)算回收率,結(jié)果見表2。
根據(jù)以上結(jié)果,表明本法具有良好的回收率。
該制劑原含量控制方法采用的是薄層掃描法,實(shí)驗(yàn)中對兩種方法的測定結(jié)果進(jìn)行了比較,發(fā)現(xiàn)用HPLC方法測定的結(jié)果普遍優(yōu)于薄層掃描的結(jié)果。陰性對照溶液在與對照品溶液、供試品溶液色譜相應(yīng)的位置上無相同保留時間的色譜峰,表明對該方法無干擾;供試品色譜峰分離好,能夠準(zhǔn)確測定綠原酸的含量;精密度RSD為1.43%,重復(fù)性好,HPLC方法操作簡便,可作為復(fù)方雙花口服液的質(zhì)量控制方法。
參考文獻(xiàn):
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[3]鄒小娟,劉志輝,錢芳.清熱養(yǎng)心顆粒的鑒別及其綠原酸含量測定[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)刊,2008(59):908-910.
表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果
孫毅坤,男,副教授。研究方向:中藥分析與新藥研究。通訊作者 E-mail:sunyik@163.com
作者簡介:余杰,男,執(zhí)業(yè)藥師,主管藥師。研究方向:中藥制劑及質(zhì)量管理。
Determination of Chlorogenic Acid in Fufang Shuanghua Oral Liquid by HPLC
YuJie1,Kuang Liaohong1,Lin Fansheng1,Dai Jundong2,Sun Yikun2(1 Beijing Yuansheng Suyuan Biolechnology Co.Ltd,Beijing 102212, China;2 Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100102,China)
ABSTRACTObjective:To establish a method for determining the content of Chlorogenic Acid in Fufang Shuanghua Oral Liquid.Methods:HPLC with Dikma C18(250×4.6 mm,5 μm)column was used. 0.4%H3PO4-Acetonitrile(90∶10)as the mobile phase,flow rate was 1.0 mL/min and detection wavelength at 327 nm.Results:There was a good linear relationship at a range of 150.72-753.60 μg/mL for Chlorogenic Acid (R2=0.999 6).The average recovery rate was 98.87%with RSD of 0.76%.Conclusion:The method is simple,fast and accurate.It can be used for quality control of Fufang Shuanghua O-ral Liquid.
KEY WORDSFufang Shuanghua Oral Liquid;Chlorogenic Acid; HPLC