孫淑靜,顏 松,胡開輝,劉建忠

(福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,福建福州 350002)

0 前言

斑玉蕈Hypsizigusmarmoreus(Peck)Bigelow H E又名玉蕈,日本稱真姬菇,隸屬擔(dān)子菌亞門、層菌綱,傘菌目,白蘑科,玉蕈屬。真姬菇傳統(tǒng)的固體菌種栽培模式生產(chǎn)周期很長(zhǎng)(約 120150 d),生產(chǎn)成本高,勞動(dòng)強(qiáng)度大,菌種易老化,商業(yè)品質(zhì)易受溫度等外界環(huán)境條件影響,使真姬菇的出菇品質(zhì)參差不齊,質(zhì)量、產(chǎn)量不容易控制,效益低,影響其工廠化生產(chǎn)[1]。隨著國內(nèi)食用菌產(chǎn)業(yè)的迅猛發(fā)展,傳統(tǒng)的食用菌制種方式已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能適應(yīng)食用菌產(chǎn)業(yè)日益發(fā)展的需要。采用深層培養(yǎng)工藝制備食用菌液體菌種用于生產(chǎn)已成為研發(fā)熱點(diǎn),國內(nèi)外紛紛開展了這一技術(shù)的研究和應(yīng)用探討[2-4]。涌現(xiàn)出了許多液體發(fā)酵設(shè)備生產(chǎn)廠家及諸多在香菇、黑木耳、金針菇、平菇生產(chǎn)中采用液體菌種的報(bào)道[5],然而,對(duì)于真姬菇液體菌種工藝及應(yīng)用方面的報(bào)道卻很少。液體深層發(fā)酵技術(shù)能在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量的菌絲體(菌種)并積累某些生理活性物質(zhì)。液體菌種接入固體培養(yǎng)料時(shí),具有流動(dòng)快、易分散、萌發(fā)快、發(fā)菌點(diǎn)多等特點(diǎn),較好地解決了袋栽食用菌在接種過程中的易污染問題。同時(shí)減少了接種的勞動(dòng)強(qiáng)度,生產(chǎn)周期短,菌齡整齊[6]。本研究針對(duì)傳統(tǒng)的固體菌種栽培真姬菇存在的農(nóng)藝性狀參差不齊、周期長(zhǎng)、效率低的問題,進(jìn)行了真姬菇液體菌種和固體菌種應(yīng)用的對(duì)比實(shí)驗(yàn),分析其相關(guān)效益,以期為真姬菇的高效栽培提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株與培養(yǎng)基

真姬菇(Hypsizigusmarmoreus)真9603菌株的二級(jí)搖瓶菌種,本實(shí)驗(yàn)室保存。

真姬菇真 9603菌株深層發(fā)酵最適的培養(yǎng)基配方為:馬鈴薯 20%、葡萄糖 3%、酵母粉 0.2%、KH2PO40.1%、MgSO47H2O 0.1%。培養(yǎng)溫度20℃,發(fā)酵終點(diǎn)確定為培養(yǎng)后第7 d。

固體原種及栽培種培養(yǎng)基配方:棉籽殼35%;木屑35%;麩皮25%;玉米粉5%;含水量55%。

1.2 方法

(1)真姬菇液體菌種不同接種量對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響。

真姬菇液體菌種接種,采用無菌接種槍每次吸取 10、15、20mL生長(zhǎng)良好的液體菌種,按照中間穿刺接種的方式接種于制好的固體栽培袋中,每個(gè)處理重復(fù) 5次,然后置于 25℃恒溫箱中培養(yǎng),每天定時(shí)用直尺測(cè)定菌絲的增長(zhǎng)長(zhǎng)度。

(2)真姬菇液體菌種和固體菌種栽培對(duì)比實(shí)驗(yàn)。

①栽培種制作。液體菌種的制作方法按二級(jí)液體搖瓶培養(yǎng)基配方接種制作;固體菌種原種、栽培種的制作,按常規(guī)方法進(jìn)行制作,作為液體菌種栽培的對(duì)照。

②栽培袋的制袋方法。栽培袋的規(guī)格為33 cm×17 cm×0.045 cm,每袋裝干料 350 g,常壓滅菌溫度達(dá) 100℃后保持 1214 h,冷卻后于接種箱內(nèi)無菌操作接種,每袋裝入的培養(yǎng)料量和菌種接入量一致。

③接種方法。液體菌種的接種用無菌接種槍吸取液體真姬菇液體菌種直接注入料袋內(nèi),采用液體表面接種和液體中間穿刺接種兩種接種方式,液體表面接種將菌液分布在栽培袋內(nèi)培養(yǎng)基表面,液體中間穿刺接種在菌袋培養(yǎng)基正中央打孔到菌袋中間位置,用無菌接種槍吸取菌液直接注入料袋內(nèi)培養(yǎng)基中間部位,每袋接種 15m L,在一般的培養(yǎng)房?jī)?nèi)進(jìn)行;以培養(yǎng)好的真姬菇液體菌種作為原種擴(kuò)繁固體生產(chǎn)種,木屑固體菌種的接種是按照常規(guī)方法進(jìn)行。每種處理接 70個(gè)栽培袋,然后置于 25℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),觀察并記錄全過程的發(fā)菌情況。觀察真姬菇液體種和固體種在菌絲生長(zhǎng)速率、出菇情況、生物學(xué)效率、農(nóng)藝性狀差別、總的生產(chǎn)周期等方面的不同。

④催蕾方式。菌絲達(dá)到生理成熟期后,開袋上架,在袋口蓋上潮濕的細(xì)紗布,同時(shí)降溫至 13℃15℃,增加通風(fēng)量,促使菇蕾形成。一般經(jīng) 1020 d,料面上可以看見針頭狀的菇蕾。

2 結(jié)果與分析

2.1 真姬菇液體菌種不同接種量對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

表1 不同接種量菌絲長(zhǎng)滿袋天數(shù)

由表1可見,當(dāng)每個(gè)菌袋接種10 mL液體菌種時(shí),菌絲萌發(fā)時(shí)間較長(zhǎng),生長(zhǎng)較慢,長(zhǎng)勢(shì)也不太好,其菌絲滿袋時(shí)間分別比每袋接種l5 mL和20m L液體菌種延長(zhǎng)了9 d和11 d;而每袋接種15、20 mL接種量時(shí),真姬菇的菌絲生長(zhǎng)旺盛,生長(zhǎng)速度快,長(zhǎng)勢(shì)良好,菌絲潔白,菌香濃郁,滿袋時(shí)間也短。15 mL與20mL的接種量,菌絲生長(zhǎng)速度差別并不明顯,兩者菌絲發(fā)滿袋時(shí)間僅僅相差2 d,在實(shí)際的生產(chǎn)當(dāng)中,考慮到增大接種量會(huì)增加生產(chǎn)成本,同時(shí),隨著接種量的增加,菌袋含水量相對(duì)增大,會(huì)導(dǎo)致其污染的機(jī)率增加[7],這對(duì)后期出菇管理及產(chǎn)量都有一定的影響。所以 15mL是最佳接種量。此結(jié)果表明:真姬菇液體菌種接到固體栽培袋中,接種量直接影響到菌絲的生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)質(zhì)量,隨著接種量的加大,液體菌種在栽培袋中表現(xiàn)出一定的群體生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì),菌絲萌發(fā)快,同時(shí)直接增加菌絲體前端營養(yǎng)供應(yīng),因而提高抵抗雜菌的能力。由于液體菌種具有良好的分散性,可隨液體滲透到固體栽培袋中,所以發(fā)菌點(diǎn)多,從而大大節(jié)省了菌種的用量。

2.2 真姬菇固體菌種和液體菌種栽培模式的對(duì)比試驗(yàn)

(1)真姬菇液體菌種和固體菌種栽培菌絲的長(zhǎng)速比較。

表2 液體菌種和固體菌種栽培真姬菇菌絲的長(zhǎng)速

由表2可見,液體菌種栽培模式下,采取穿刺接種方式接的真姬菇菌絲日均走速最快,達(dá)到了2.21mm,采取表面接種方式接的真姬菇菌絲日均走速為1.71mm,兩種液體菌種栽培模式均高于固體菌種栽培模式下的菌絲生長(zhǎng)速度。從菌絲形態(tài)上看,采用液體菌種栽培的菌絲粗壯潔白有力,固體菌種栽培菌絲細(xì)長(zhǎng)微黃;固體菌種栽培的滿袋時(shí)間比液體菌種穿刺接種方式栽培的晚 36 d。由此可見,真姬菇液體菌種表現(xiàn)出菌絲萌發(fā)快、生長(zhǎng)旺盛,菌種培育時(shí)間短、活力強(qiáng)、分散性好等特點(diǎn)。

(2)真姬菇液體菌種和固體菌種栽培生產(chǎn)周期的比較。

表3 液體菌種和固體菌種栽培模式下的生產(chǎn)周期

(3)真姬菇液體菌種和固體菌種栽培產(chǎn)量對(duì)比。

表4 液體菌種和固體菌種栽培真姬菇產(chǎn)量

由表4可見,真姬菇液體菌種以穿刺接種方式和表面接種方式進(jìn)行栽培的生物學(xué)效率分別為64.8%和63.4%,而以固體菌種方式進(jìn)行栽培的生物學(xué)效率僅為51.0%;液體菌種栽培總產(chǎn)量明顯高于固體菌種栽培,且液體菌種以穿刺接種方式進(jìn)行栽培的真姬菇產(chǎn)量最高,平均袋產(chǎn)量達(dá)到 324 g。表明在栽培環(huán)境和培養(yǎng)材料相同的條件下,液體菌種栽培真姬菇不僅具有可行性而且出菇產(chǎn)量明顯高于常規(guī)的固體菌種栽培。

2.3 真姬菇液體菌種和固體菌種栽培的經(jīng)濟(jì)性狀比較

由表5可見,在兩種栽培模式下,3種不同接種方式真姬菇菇蓋直徑、厚度、菇柄長(zhǎng)度、菇柄直徑的差異不明顯,說明同一個(gè)真姬菇菌株在相同栽培環(huán)境和栽培材料的條件下,菌株本身的性質(zhì)并沒有發(fā)生根本變化,所以菌種的形態(tài)不同對(duì)真姬菇經(jīng)濟(jì)性狀的影響不大。在液體栽培模式下的真姬菇菌柄長(zhǎng)度比在固體栽培模式下顯得長(zhǎng)一些,而且液體菌種栽培的真姬菇菌蓋開傘時(shí)間比較慢,這也有利于減緩菌株的老化過程,對(duì)實(shí)際生產(chǎn)來說是有利的。此外液體菌種栽培的真姬菇出菇的性狀比較一致,菌齡整齊;而固體栽培模式下的真姬菇出蕾不均勻,菌齡差異較大,有一部分菇的菌蓋開傘太快,出菇品質(zhì)參差不齊。說明了真姬菇液體菌種在工廠化栽培過程當(dāng)中表現(xiàn)出一定的優(yōu)越性。以上結(jié)果表明:液體菌種栽培真姬菇簡(jiǎn)化了接種的復(fù)雜性,減少了雜菌感染,縮短了生產(chǎn)周期,降低了生產(chǎn)成本,提高了生物學(xué)效率,從而有效地提高了經(jīng)濟(jì)效應(yīng)和社會(huì)效益,與很多相關(guān)報(bào)道的液體菌種的優(yōu)勢(shì)一致[8-10]。

3 結(jié)論

表5 液體菌種和固體菌種栽培真姬菇經(jīng)濟(jì)性狀

液體菌種接種量的多少直接影響生產(chǎn)成本和菌絲培養(yǎng)時(shí)間,同時(shí)對(duì)后期出菇也會(huì)產(chǎn)生影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):每袋按15 mL的接種量,菌絲生長(zhǎng)旺盛,生長(zhǎng)速度快,長(zhǎng)勢(shì)良好,菌絲潔白,菌香濃郁。另外,在對(duì)液體菌種栽培和固體菌種栽培菌絲生長(zhǎng)速度進(jìn)行比較時(shí),以中間穿刺方式接種的液體菌種栽培模式下真姬菇菌絲日均走速為2.21mm,明顯地高于固體菌種栽培。通過對(duì)接種量研究,說明液體菌種具有菌絲萌發(fā)快、生長(zhǎng)旺盛培育時(shí)間短、活力強(qiáng)、分散性好,菌齡一致等優(yōu)點(diǎn)。在栽培環(huán)境和培養(yǎng)材料相同的條件下,菌絲吃料速度明顯高于常規(guī)固體菌種栽培,液體菌種穿刺接種的生物學(xué)效率可以達(dá)到 64.8%,液體菌種表面接種的生物學(xué)效率可以達(dá)到63.4%,固體菌種菌絲的生物學(xué)效率僅為 51.0%。真姬菇在液體菌種栽培模式下出菇比固體栽培模式下更整齊,而其他的性狀差異并不明顯。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:真姬菇液體菌種可以較好解決以往固體菌種培養(yǎng)中存在的生長(zhǎng)周期長(zhǎng)、出菇品質(zhì)參差不齊等缺點(diǎn),并為其推廣應(yīng)用提供了一定的理論依據(jù)和參考價(jià)值。但在使用液體菌種時(shí),在培養(yǎng)料裝袋時(shí)應(yīng)注意適當(dāng)緊些,避免菌袋過松而造成菌袋邊緣出現(xiàn)較多菇蕾的現(xiàn)象,影響真姬菇產(chǎn)量和質(zhì)量。同時(shí)在生產(chǎn)中應(yīng)檢查液體菌種的質(zhì)量,特別是無菌的判別,這些因素是影響真姬菇液體菌種的應(yīng)用進(jìn)程。

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