徐曉琴,冷 雪,李真光,武 華

(中國農(nóng)業(yè)科學院特產(chǎn)研究所人獸共患病研究室,吉林吉林 132109)

牛傳染性鼻氣管炎(Infectious bovine rhinotracheitis,IBR)是由牛傳染性鼻氣管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)引起的牛的一種急性、熱性、接觸性傳染病。IBRV又稱牛皰疹病毒Ⅰ型、壞死性鼻炎病毒和傳染性膿皰外陰-陰道炎病毒。該病以高熱、呼吸困難、鼻炎、竇炎和上呼吸道炎癥為特征。還可引起生殖系統(tǒng)損害,出現(xiàn)流產(chǎn)和死胎以及發(fā)生腸炎和小牛腦炎等癥狀,有時也發(fā)生眼結膜炎和角膜炎[1]。繼發(fā)性的細菌感染能導致更嚴重的呼吸道疾病。

1955年在美國科羅拉多州首次發(fā)現(xiàn)以傳染性鼻氣管炎癥狀為特征的疾病,隨后出現(xiàn)在洛杉磯和加利福尼亞州等地,并被命名為IBR。Madin等在1956年首次從患牛中分離出病毒,隨后一些研究者相繼從病牛的結膜、外陰、大腦和流產(chǎn)胎兒分離出病毒。Huck于1964年確認牛傳染性鼻氣管炎病毒為皰疹病毒。本病目前在世界范圍內(nèi)流行,對奶牛的產(chǎn)奶量、公牛的繁殖力及役用牛的使役力均有較大的影響,給全球的養(yǎng)牛業(yè)造成了極大的影響。

我國規(guī)定,進出口牛及其肉制品必須檢測IBRV,使該病的診斷方法迅速發(fā)展起來。生產(chǎn)中對該病的診斷首先應結合流行病學和臨床檢查做出初步診斷,然后根據(jù)實驗室方法如血清學方法做出確切的診斷。

1 流行病學

牛是 IBRV自然感染的惟一宿主,試驗證明IBRV可以通過很多途徑感染牛,以肉牛易感,奶牛次之,而其他動物如綿羊、馬、豬、犬、豚鼠和小鼠等不易感。帶毒病畜是主要傳染源。牛感染本病后,在自然條件下可不定期的排出病毒,這與本病的流行傳播有重要的關系。

IBRV可通過空氣、媒介物,以及與病牛直接接觸而傳播,但主要為飛沫、交配和接觸傳播。吸血昆蟲也能傳播本病。本病在秋季和冬季較易流行,特別是舍飼的大群奶牛在過分擁擠、密切接觸的條件下更易迅速傳播。尤以20日齡～60日齡犢牛在寒冷季節(jié)最易感染發(fā)病。另外,應激因素、社會因素、發(fā)情及分娩可能促使本病發(fā)作。

2 臨床癥狀

IBRV致病性最大的特點是組織嗜性寬廣,除經(jīng)常侵害呼吸系統(tǒng)外,還能侵害生殖系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和眼結膜。另外,自然感染時發(fā)病程度的差異很大,最輕的是無臨床癥狀的隱性感染,只表現(xiàn)體溫輕度升高,重癥病牛則侵害整個鼻腔、咽喉和氣管,導致急性上呼吸道炎癥。臨床上可以分成以下5種類型[2]。

2.1 呼吸道型

本病的呼吸道型是最重要的一種類型,人工感染的潛伏期為2 d～3 d,自然感染的潛伏期較長,可達1周。病毒首先侵入上呼吸道黏膜,其次是消化道,引起急性卡他性炎癥,鼻分泌物由漿液性變?yōu)轲ひ盒?最終變?yōu)槟撔?并混有血液。臨床表現(xiàn)為發(fā)熱,病畜體溫達42℃,食欲減退,呼吸困難并伴隨鼻腔通道和氣管有黏膿性分泌液流出,鼻孔開張,鼻甲骨和鼻鏡充血并變紅,又名“紅鼻子病”。隨病情的發(fā)展,常表現(xiàn)出不同程度的呼吸困難癥狀,但咳嗽并不經(jīng)常出現(xiàn)。育肥牛體重減輕,奶牛的泌乳量減少。無繼發(fā)感染時病程持續(xù)7 d～9 d,隨后很快好轉,恢復正常。

2.2 生殖道型

本病的生殖道型俗稱交合疹、交媾疹。傳染性膿皰性外陰-陰道炎的潛伏期較短,一般為24 h～72 h,隨后是持續(xù)數(shù)天的輕度波浪式體溫反應。外陰部發(fā)生輕度腫脹,黏膜發(fā)炎,表面散在多量白色小膿皰,嚴重的外陰表面的膿皰融合成淡黃色斑塊和痂皮,結痂脫落后形成圓形裸露的表面。臨床康復需10 d～14 d,陰道分泌物可持續(xù)數(shù)周,孕牛一般不發(fā)生流產(chǎn),病程約2周。公牛感染,潛伏期2 d～3 d,在生殖道黏膜充血的同時表現(xiàn)一過性體溫升高,數(shù)天后痊愈。較重病例呈現(xiàn)同母牛一樣的體溫升高和膿皰形成兩種癥狀,后者主要見于包皮皺褶和陰莖頭,數(shù)天后膿皰破潰,徹底痊愈需2周左右。

2.3 腦炎型

本病的腦炎型多發(fā)于犢牛,主要表現(xiàn)為腦膜炎,病牛共濟失調(diào),先沉郁后興奮或沉郁興奮交替發(fā)生,吐沫,驚厥,最后臥倒,角弓反張。發(fā)病率低,但病死率高。成田實報道,將分離于自然發(fā)病牛的中樞神經(jīng)組織、鼻液和流產(chǎn)胎兒的IBRV株接種到犢牛的鼻腔、眼結膜和口腔后,可見發(fā)熱和水樣鼻液,但無神經(jīng)癥狀。但接種任何病毒株的牛在病理組織學上均能見到神經(jīng)膠質(zhì)細胞增生和細胞管套狀浸潤形成的三叉神經(jīng)炎及以延髓感覺神經(jīng)通路為主要部位的非化膿性腦炎。據(jù)此認為,非化膿性感覺神經(jīng)節(jié)炎和腦脊髓炎與黏膜炎癥一樣都是IBR主要的特征性病變。

2.4 結膜炎型

本病的結膜炎型多為角膜、結膜炎,常表現(xiàn)角膜下水腫,其上形成灰色壞死膜,呈顆粒狀,眼、鼻流出漿性或膿性分泌物。有時可與呼吸道型同時發(fā)生。

2.5 流產(chǎn)型

本病的流產(chǎn)型見于初產(chǎn)青年母牛懷孕期的任何階段,有時也見于經(jīng)產(chǎn)牛。常見于懷孕5月～8月流產(chǎn),多無前驅癥狀,胎衣不滯留。主要表現(xiàn)為突然發(fā)病,厭食,體溫升高達39.5℃～42℃,結膜發(fā)炎,流鼻液,有的大量流涎,咳嗽,呼吸加速,病程約5 d。

3 病原學診斷

3.1 包涵體檢查

因本病毒可在牛胚腎、睪丸、肺和皮膚的培養(yǎng)細胞中生長,并形成核內(nèi)包涵體,故可用感染的單層細胞涂片,用 Lendrum染色法染色,鏡檢細胞核內(nèi)包涵體,細胞核染成藍色,包涵體染成紅色,膠原為黃色。也可采取病牛病變部的上皮組織(上呼吸道、眼結膜、角膜等組織)制作切片后染色、鏡檢[1]。

3.2 病毒分離鑒定

根據(jù)臨床癥狀不同,采集不同的樣品:鼻氣管炎以棉拭子采取處于發(fā)熱期的鼻液和眼分泌物;外陰-陰道炎時采取外陰部黏膜和陰道分泌物,公牛則采集精液和包皮的生理鹽水沖洗物;有流產(chǎn)胎兒時采取胎兒胸水、心包液、心血及肺等實質(zhì)臟器;腦炎時采取腦組織。所有樣品均應懸浮于運輸培養(yǎng)基(含抗生素和20 mL/L犢牛血清的組織培養(yǎng)液)儲存于4℃,并迅速送到實驗室。樣品送到實驗室后,將拭子在運輸培養(yǎng)基中充分攪動以便洗脫病毒,室溫放置30 min再取出拭子,將運輸液1 500 r/min離心10 min,取上清液作病毒分離的樣品。進行病毒分離的精液需經(jīng)特殊處理,因為精液中含有對細胞有毒或對病毒增殖有抑制作用的酶和其他因子[3]。

最常用于IBRV病毒分離的是牛胎腎或睪丸的單層細胞培養(yǎng)物,原代和次代均可。其次是豬胎腎細胞、牛腎繼代細胞和牛氣管繼代細胞。當使用24孔培養(yǎng)板分離時,每孔需接種細胞培養(yǎng)物上清液100 μ L ～ 200 μ L,吸附 1 h 后傾去液 體,加 入維持液。每天觀察細胞病變情況,一般于接種后3 d出現(xiàn)細胞病變(cytopathic effect,CPE)。細胞的典型變化是圓縮、聚集成葡萄樣群落,在單層細胞上形成空洞,有時會發(fā)現(xiàn)有數(shù)個細胞核的巨大細胞。若7 d還不出現(xiàn)CPE,應再盲傳1次,將培養(yǎng)物經(jīng)反復凍融后離心,取其上清液用于接種新的單層細胞做進一步病毒分離。為鑒定致細胞病變的病毒是否為IBRV,細胞培養(yǎng)的上清液必須與特異IBRV抗血清或單克隆抗體(monoclonal antibody,MAb)進行中和試驗[3]。

李琳琳等[4]利用MDBK細胞從進口種用奶牛鼻咽分泌物中分離出一株牛傳染性鼻氣管炎病毒,該病毒在MDBK細胞上產(chǎn)生明顯的CPE,用抗IBRV特異性抗血清能中和分離株,并且用PCR擴增出特異性條帶。王延濤[5]從黑龍江某養(yǎng)牛場發(fā)病牛陰道分泌物中分離出一株病毒,可被IBRV陽性血清所中和,用特異性引物能擴增出目的片段,通過理化特性分析和核酸序列分析證明是IBRV。

3.3 病毒核酸檢測

病毒核酸的檢測具有快速、特異、敏感、價廉等優(yōu)點,解決了血清學診斷方法的許多缺陷,如各種方法診斷結果不一致、潛伏感染的動物檢測抗原困難等,因此,近年來病毒核酸檢測在臨床診斷中得到了廣泛的應用。

3.3.1 聚合酶鏈反應(PCR)檢測技術 1993年Van der Engelenburg、Vilcek和Wiedman等建立了IBRV的聚合酶鏈反應(PCR)診斷方法,盡管不能完全替代單克隆抗體和免疫熒光法,但由于其靈敏度高和特異性強而應用于牛血清中微量IBRV的檢測等方面。Rocha M A等建立了高度敏感的IBRV套式PCR檢測方法,能夠檢測 10-3TCID50/50 μ L的細胞上清液。Frederick以 IBRV TK基因為模板,對4株野毒株擴增出183 kb的特異片段;Kibenge和Yason也是在 TK基因區(qū)分別設計了一對引物,建立了IBRV的PCR檢測方法。Santurde G等[6]用Chelex100樹脂吸附方法快速提取臨床樣品中的核酸增加了檢測的靈敏度,這種PCR測定方法成本較低,可以作為血清庫IBRV監(jiān)測的有效工具。Takiuchi等[7]建立了一種IBRV套式PCR檢測方法,從巴西某牛場死產(chǎn)胎兒中檢測到IBRV,該方法可以有效而快速的對牛場的IBRV感染進行診斷。

在國內(nèi),張桂紅等[8]建立了IBRV PCR診斷方法,該方法特異而敏感,可以應用于臨床上病原的快速檢測。

徐淑菲等[9]根據(jù)IBRV gB基因序列設計一對引物,進行PCR檢測,并對反應條件及反應體系進行優(yōu)化。結果得到與預期大小(362 bp)一致的特異性片段。用這對引物擴增IBRV、豬瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、豬偽狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV),只有IBRV擴增出特異性條帶。該PCR方法的檢測靈敏度為2.4 ng/100μ L,較其他方法敏感。

楊少華等[10]采用采用SDS-蛋白酶K法提取病毒核酸。根據(jù)IBRV gB基因序列設計了1對特異引物,在其上下游引物的內(nèi)側又分別設計了1對引物,以這4條引物對IBRV模板進行擴增。結果成功擴增出預期目的片段,建立了套式PCR檢測方法。敏感性、特異性試驗結果表明該方法能特異檢測IBRV。本方法具有快速、靈敏、特異的優(yōu)點,適用于在牛及其遺傳物質(zhì)的進出口檢疫中進行IBRV快速檢測。楊娟[11]根據(jù)已發(fā)表的IBRV gB基因序列,合成了2條引物,優(yōu)化了反應條件,分別對IBRV的Bartha Nu/67株,IBRV-BK125株DNA模板進行擴增,結果對2株IBRV DNA均可擴增出362 bp的特異性片段;對豬偽狂犬病毒(PRV)、火雞皰疹病毒(Herpesvirus of turkeys,HVT)及牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)進行擴增均未見特異性條帶。靈敏性檢測表明,該法對IBRV的檢出限量為711TCID50。將該PCR方法進行初步應用,與病毒分離所得結果基本一致。

3.3.2 核酸探針檢測技術 近幾年來,核酸探針已被廣泛應用于病毒感染的檢測,由于此法檢測的陽性結果可以直接確定為IBRV的攜帶者,為流行病學調(diào)查和臨床確診提供了直接依據(jù),要比傳統(tǒng)的血清學方法更為敏感、特異。吳時友等從純化的IBRV中提取全基因組DNA,用32P標記作為探針進行雜交,結果表明,該探針可檢出10 pg的IBRV DNA,能明顯區(qū)分IBRV感染細胞和未感染的正常細胞,具有相當高的靈敏度和特異性。隨后用生物素代替32P制備的探針也取得了相同的結果,能檢測牛精液中 IBRV DNA。由于此探針可在-20℃保存1年以上,有利于推廣使用,又可彌補放射性同位素探針半衰期短及對人體健康有害的弊端。Pandita和Xia等報道了用斑點雜交法檢測IBRV。

唐泰山等[12]根據(jù)IBRV的保守基因gB和gE序列,分別設計了2對引物及其相應的TaqMan探針,建立并優(yōu)化反應體系后,利用10倍稀釋的病毒進行擴增以檢測其靈敏度,同時對偽狂犬病病毒(PRV)、馬立克病病毒(MDV)、鴨瘟病毒(DPV)進行特異性檢測。結果顯示,建立的擴增gB和gE基因的熒光PCR可用于檢測IBRV,其靈敏度為0.02 TCID50,而與PRV等其他病毒無交叉反應,具有快速、靈敏、準確、低污染等優(yōu)點,可用于IBRV的檢測。

4 血清學診斷

為控制IBRV的傳播,消除該病的有效方法是對所有采集的血清進行監(jiān)測。通常將血清中和試驗(SN)、免疫熒光(FA)、瓊脂擴散試驗、間接血凝試驗(IHA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)等方法用于診斷IBRV急性感染和潛伏感染的動物。下面具體介紹一下常用的血清學方法。

4.1 中和試驗

中和試驗是本病最常用的血清學診斷方法。用IBRV種毒接種牛腎單層細胞,在細胞病變最明顯時收獲培養(yǎng)物,凍融2次,離心去除細胞碎片,收集上清。測定細胞半數(shù)感染量后等量分裝,置-70℃保存?zhèn)溆谩１粰z血清經(jīng)56℃滅30 min。實驗時將被檢血清與等量的含100 TCID50病毒量的新鮮抗原混合,37℃孵育1 h后接種4管細胞培養(yǎng)物,室溫吸附1 h,再加入 pH 7.2～7.4細胞維持液,置37℃培養(yǎng),72 h后判定。當未稀釋血清能抑制50%或50%以上細胞管出現(xiàn)CPE者判為陽性。實驗時必須做病毒抗原、標準陽性血清及陰性血清的對照,病毒抗原對照和陰性血清加抗原對照應出現(xiàn)細胞病變;陽性血清加抗原對照應無細胞病變;被檢血清對細胞應無毒性,對照細胞正常生長。

4.2 瓊脂擴散試驗

用已知的IBRV抗原檢查被檢血清中的沉淀抗體,也可用IBR陽性血清檢測病料標本或細胞培養(yǎng)物的相應抗原。Suresh曾用免疫擴散法和對流免疫擴散法檢測IBRV。

4.3 間接血凝試驗

鞣酸處理法間接血凝試驗(IHA)是簡單易行的血清抗體檢測法?？捎贸Ｒ?guī)的試管凝集法或微量凝集法進行。Dai曾用間接血凝試驗檢測 IBRV抗體,陳天祥等在1987年就報道,IHA是一種簡單、快速、準確的血清學診斷方法。

4.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗

曲新勇等用牦牛 IBRV85-Y株按 Cho等方法制備的抗原,經(jīng)ELISA測定,表明其抗原性好,特異性強,操作簡單、快速,使用于一般實驗室,并比中和試驗敏感。Florent應用 IBRV IgM 抗體捕獲ELISA法進行IBRV的早期感染檢測。以針對牛IgM的第一單抗作為捕獲抗體,而第二單抗用來測定特異性抗病毒抗體。經(jīng)試驗感染和自然感染動物的血清檢品檢測,表明在臨床癥狀出現(xiàn)后5 d～10 d的血清樣品即可診斷出IBRV感染。Achilles于1990年建立了雙抗夾心ELISA法,Kramps于1994年報道了ELISA是敏感、特異的檢測方法。ELISA方法快速、準確、方便,已成為了目前檢測IBRV的主要方法之一。

朱遠茂等[13]成功的建立了檢測牛血清IBRV抗體的間接ELISA方法,特異性和重復性試驗結果表明,該方法特異性高、重復性好。與法國進口ELISA抗體診斷試劑盒比較,其符合率為96.3%,與中和試驗比較,符合率為95.8%,且敏感性更高。

李兆利等[14]在國內(nèi)首次利用重組gB蛋白建立了牛傳染性鼻氣管炎間接ELISA診斷方法,該方法具有操作簡便、快速、無需進行組織培養(yǎng)、易于推廣、檢測樣本量大等優(yōu)點。通過交叉試驗、比較試驗等表明其靈敏度高、特異性好,從整體來看該方法優(yōu)于傳統(tǒng)的血清學方法,在IBR的普查檢測、流行病學調(diào)查以及臨床診斷中具有良好的應用前景。

王海燕[15]以純化的IBRV Bartha Nu/67株建立了檢測牛血清IBRV抗體的間接酶聯(lián)免疫吸附試驗。該診斷方法特異性高、重復性好,可用于流行病學調(diào)查。同時利用純化的重組蛋白 pET32gEE建立了檢測牛血清特異性gE抗體的間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(gE-ELISA)。gE-ELISA診斷方法具有較高的特異性、重復性和敏感性,可用于區(qū)別gE缺失疫苗株及非缺失株誘導所產(chǎn)生的抗體。

楊娟[11]以 IBR山羊腎細胞病毒液作為包被抗原,建立了檢測IBRV血清抗體的間接ELISA方法,并優(yōu)化了反應條件和系統(tǒng),利用該方法檢測138份臨床血清樣品,與中和試驗相比較,特異性為93.5%,敏感性為 93.5%,符合率為93.5%;與IDEXX試劑盒相比,符合率為 97.6%。利用該方法檢測本實驗室保存的230份牛血清,168份為陽性,與IDEXX試劑盒相比,符合率為87.8%;檢測35份IBR感染的牦牛血清,21份為陽性,與中和試驗相比,符合率為85.7%。

祖立闖等[16]用大腸埃希菌表達的IBRV重組gD蛋白純化后作為包被抗原,建立了檢測牛傳染性鼻氣管炎病毒抗體的間接ELISA方法。與中和試驗相比較,符合率、敏感性和特異性分別為84.1%、85.0%、83.4%。該方法具有良好的敏感性和特異性,為國內(nèi)IBR流行病學調(diào)查提供了一種快速、簡便的血清學診斷方法。

4.5 變態(tài)反應診斷

本法的檢出率約為中和試驗的2/3,但在缺乏實驗室條件的地區(qū)是一種較為實用的診斷方法。應用一種滅活抗原(經(jīng)膜超濾濃縮,再56℃加熱 1 h和β-丙內(nèi)酯處理的感染細胞培養(yǎng)液)進行接種。接種后20 min～30 min、6 h及72 h連續(xù)觀察接種部位的皮膚,并檢測紅斑性腫脹的直徑厚度,72 h作出最后判定,反應區(qū)直徑在 1 cm以上者為陽性,0.5 cm～1 cm之間為可疑,0.5 cm以下判為陰性。

5 鑒別診斷

5.1 單克隆抗體技術

單克隆抗體技術的應用,使人類對IBRV的鑒別診斷提高到了一個新的水平,它的最大特點是通過單克隆抗體可以將疫苗免疫動物與自然感染動物有效地分開。一些發(fā)達國家規(guī)定,標記疫苗的使用必須有配套的鑒別診斷方法。因此根據(jù)疫苗株和缺失株所缺失的糖蛋白,各國學者已建立了抗gE、gC和gB的單抗,其中以 gE占主導地位。Van Oirschot制備了gE和gB兩株單抗用來診斷 gE缺失株與野毒株感染[17]。Kit S等[18]用抗gC糖蛋白的單抗(McAb gC)鑒別診斷g缺失株、野毒感染株和TK基因缺失株。

王海燕[15]獲得了3株分泌抗 IBRV單克隆抗體(McAb)的雜交瘤細胞;2株分泌抗gEE單克隆抗體的雜交瘤細胞和2株分泌抗 gEB單克隆抗體的雜交瘤細胞。這些單克隆抗體用雙抗體夾心ELISA試驗可區(qū)別IBRV陽性血清與陰性血清;同時gEE單抗和gEB單抗可初步區(qū)別 gE缺失株和gE非缺失株,為區(qū)別gE缺失標記疫苗株和自然感染株的鑒別診斷方法奠定了基礎。

陳锃[19]利用純化的病毒 IBRV Bartha Nu/67株作為免疫原,建立了一株穩(wěn)定分泌抗IBRV gG蛋白McAb的雜交瘤細胞株E12,為建立能區(qū)分缺失病毒與野生病毒的分子鑒別診斷方法提供了材料。

王延濤[20]通過IBRV DQ01株全病毒蛋白免疫小鼠,細胞融合后篩選獲得3株穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株。把雜交瘤細胞注入小鼠腹腔,生產(chǎn)了高效價的腹水(1∶16 000～1∶256 000),為IBRV的診斷提供了一定的基礎材料。

5.2 PCR鑒別診斷技術

以IBRV的保守基因為模板,利用引物可對IBRV的潛伏感染進行確診,此法特異性強、費時少,可用于活體檢查,具有較大的使用價值。

陳茹等[21]采用LUX新型熒光PCR技術原理,以牛皰疹病毒I型(Bovine herpesvirus 1,BHV-1)的gC、gE基因為靶基因,建立了快速檢測牛皰疹病毒I型以及鑒別野毒感染和基因缺失疫苗免疫動物的二重實時熒光PCR方法。采用該方法從臨床牛血樣、鼻拭子樣品中檢出BHV-1陽性樣品,檢測全程僅需約2 h。該方法可應用于臨床快速診斷BHV-1病毒感染,鑒別BHV-1病毒感染與對應的基因缺失疫苗免疫動物。張桂紅等[22]參照已發(fā)表的IBRV gB和TK基因序列,設計了兩對引物,分別對已構建TK基因缺失(TK-)IBRV以及Bartha Nu/67株、美精株、洛精株、LA 株、B7株及云南株的IBRV進行擴增,均得到339 bp和457 bp的特異性片段,而T K-IBRV只出現(xiàn)110 bp的片段,擴增其它病毒未出現(xiàn)特異性條帶,證明此法特異性強、建立的方法可以鑒別牛傳染性鼻氣管炎病毒野毒與TK基因缺失疫苗毒的感染。Fuchs M等[23]建立了一種敏感的PCR檢測方法,可以鑒別診斷IBRV野毒和gE缺失疫苗毒的感染,有效的從自然感染IBRV的牛群外周血中檢測到IBRV。

鄧碧華等[24]根據(jù)野毒株和gE基因缺失疫苗株共有的IBRV gB基因序列設計了一套引物,又根據(jù)IBRV gE基因序列設計了另一套引物,建立了檢測IBRV的套式PCR方法,該方法敏感性高、特異性強、操作方便,能夠檢測IBRV及有效區(qū)分IBRV野毒株和gE基因缺失疫苗株,可為IBRV診斷、監(jiān)測和研究提供有效手段。

6 結語

隨著我國規(guī)?；B(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,牛傳染性鼻氣管炎的威脅也與日俱增。隨著科學技術的進步,對該病的診斷方法在不斷的完善,快速、有效、敏感的診斷方法在臨床上得到了廣泛的應用。而對于獸醫(yī)工作者來說,加強預防與控制,根除該病是最終目的。疫苗的研究在許多國家得到了開展[25],但由于IBRV的潛伏感染的特性,除了通過禁止接種、撲殺血清陽性牛還沒有更好的方法來根除本病。因此,國內(nèi)外的研究者應引起足夠的重視。研究高效能的疫苗,消滅該病是今后獸醫(yī)工作的一項艱巨任務,相信隨著多基因缺失苗和病毒活載體重組苗的成功研制,根除IBR的計劃將會在世界各地相繼展開。

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