趙艷平 黎觀紅 李建喜 瞿明仁

日糧酪氨酸水平對1～12周齡泰和烏骨雞血清酪氨酸酶活性的影響

趙艷平 黎觀紅 李建喜 瞿明仁

試驗(yàn)旨在研究日糧酪氨酸水平對1～12周齡泰和烏骨雞體內(nèi)酪氨酸酶活性的影響。選用1日齡泰和烏骨雞270只，隨機(jī)分成6組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15只雞，飼養(yǎng)至12周齡。在1～4周齡6個(gè)處理組日糧酪氨酸水平分別為0.38%、0.58%、0.78%、0.98%、1.18%、1.38%，在5～8周齡6個(gè)處理組日糧酪氨酸水平分別為0.48%、0.68%、0.88%、1.08%、1.28%、1.48%，在9～12周齡6個(gè)處理組日糧酪氨酸水平分別為0.45%、0.65%、0.85%、1.05%、1.25%和1.45%。試驗(yàn)結(jié)果表明：在整個(gè)試驗(yàn)期血清中酪氨酸酶的活性均隨著日糧酪氨酸水平的提高先提高后降低，且與不添加組（酪氨酸水平為1～4周0.38%、5～8周 0.48%、9～12周 0.45%）差異顯著（P＜0.05或 P＜0.01），在 1～4周齡、5～8周齡和 9～12周齡日糧酪氨酸適宜供給量分別為1.18%、0.88%和1.25%。在一定的酪氨酸水平范圍內(nèi)，提高日糧酪氨酸水平可提高泰和烏骨雞體內(nèi)酪氨酸酶活性。

泰和烏骨雞；酪氨酸；酪氨酸酶；適宜水平

★ 江西省主要學(xué)科學(xué)術(shù)與技術(shù)帶頭人培養(yǎng)計(jì)劃項(xiàng)目（2008DD00800）、江西省自然科學(xué)基金（2007GZN0702）、江西省科技廳農(nóng)業(yè)科技攻關(guān)重點(diǎn)項(xiàng)目（20061B0201500）和江西省教育廳項(xiàng)目（GJJ08181）共同資助

泰和烏骨雞又名中國泰和烏骨雞（Chinese Taihe Chicken）[1]、武山雞，為烏骨雞的一個(gè)品系，原產(chǎn)于江西省泰和縣，具有叢冠、纓頭、綠耳、胡須、白絲毛、毛腳、五爪、烏皮、烏肉、烏骨等十大特征，是我國特有的珍貴家禽。中國泰和烏骨雞在畜牧業(yè)生產(chǎn)中占有重要地位，在制藥和營養(yǎng)滋補(bǔ)食品和營養(yǎng)滋補(bǔ)劑生產(chǎn)等方面，都具有重要的價(jià)值和廣闊的開發(fā)前景。由于泰和烏雞在生長速度、軀體組成、營養(yǎng)生理過程和生物學(xué)特性等方面不同于其它雞種，所以對飼料的利用和營養(yǎng)需要有其固有特點(diǎn)。

許多研究人員就泰和烏骨雞氨基酸需要量的研究做了較多的工作，但主要集中于蛋氨酸、賴氨酸、蘇氨酸需要量的研究[2-7]。目前還很少見泰和烏骨雞酪氨酸需要量的研究報(bào)道。本試驗(yàn)旨在研究日糧不同酪氨酸水平對1～12周齡泰和烏骨雞體內(nèi)酪氨酸酶活性的影響，確定日糧適宜的酪氨酸水平，以期為泰和烏骨雞生長后期飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)的制訂和指導(dǎo)實(shí)際生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法。選用健康、體重均勻的1日齡泰和烏骨雞270只，隨機(jī)分成6個(gè)處理組，每個(gè)處理組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15只雞，飼養(yǎng)至12周齡。各組間初始體重?zé)o顯著差異（P＞0.05）。試驗(yàn)分1～4周齡、5～8周齡、9～12 周齡三個(gè)階段飼養(yǎng)。在 1～4周齡6個(gè)處理組分別飼喂酪氨酸水平為0.38%、0.58%、0.78%、0.98%、1.18%、1.38%;在 5～8周齡 6處理組分別飼喂酪氨酸水平為0.48%、0.68%、0.88%、1.08%、1.28%、1.48%;在9～12周齡6處理組分別飼喂酪氨酸水平為 0.45%、0.65%、0.85%、1.05%、1.25%和1.45%的日糧。

1.2 試驗(yàn)日糧

基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)水平見表1，1～4周齡、5～8周齡和9～12周齡基礎(chǔ)日糧酪氨酸水平分別為0.38%、0.48%和0.45%（實(shí)測值）。在基礎(chǔ)日糧中按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法分別添加不同水平的晶體酪氨酸，使試驗(yàn)日糧酪氨酸分別達(dá)到相應(yīng)水平。所有日糧除酪氨酸外，其余養(yǎng)分水平均相同。酪氨酸購于北京嘉康源有限公司，純度為98.5%以上。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)于2008年10月～2009年1月在江西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。各處理組泰和烏骨雞的飼養(yǎng)條件完全相同。試驗(yàn)雞采取隨機(jī)分層立體飼養(yǎng)，分三個(gè)飼養(yǎng)階段，自由飲水（前3 d飲水中加入多維和葡萄糖），自由采食，1～4周齡時(shí)用紅外燈24 h保溫，第一周育雛室室溫控制在34～35℃，以后每周下降2℃，5周后保持22～24℃，濕度保持在55%～65%。1～2周每日光照24 h,以后每周縮短2 h，6周齡以后改為正常日照時(shí)間。定期清理打掃雞舍衛(wèi)生并消毒，每天沖洗飲水器。飼養(yǎng)期內(nèi)僅對試驗(yàn)雞添加抗蟲病的藥物。按照正常免疫程序進(jìn)行免疫。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 測定指標(biāo)與方法

1.4.1 生產(chǎn)性能指標(biāo)

于4、8、12周齡末晨飼前稱飼料剩余量，記錄各重復(fù)的飼料消耗量，計(jì)算酪氨酸平均日采食量。

1.4.2 酪氨酸酶活的測定

1.4.2.1 樣品的采集與處理

于試驗(yàn)第4、8、12周齡時(shí)，從每個(gè)重復(fù)組中選1只共18只健康狀況正常，接近平均體重的烏骨雞，于清晨空腹稱重后，立即宰殺放血，收集5m l血液于EP管中，室溫靜置30 min后，3500 r/min離心3 min，取得血清并分裝，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2.2 測定步驟

參照AlisonJ.WINDER等[8]的方法并稍加改進(jìn)。按表2操作程序進(jìn)行檢測，用722可見分光光度計(jì)測定吸光度，波長505 nm，比色杯光徑1 cm，空白管調(diào)零，讀取0min、5min時(shí)的吸光度，以A505每分鐘增加或減少0.001為一個(gè)酶活力單位。

表2 酪氨酸酶活性測定步驟

1.5 數(shù)據(jù)處理

所有結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因子方差分析和Duncan's多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 日糧酪氨酸水平對泰和烏骨雞酪氨酸日采食量的影響（見表3）

由表3可知，日糧酪氨酸水平極顯著影響4、8和12周齡泰和烏骨雞酪氨酸平均日采食量（P＜0.01），在整個(gè)試驗(yàn)期酪氨酸平均日采食量均隨著日糧酪氨酸水平的提高而增加，且各組之間差異極顯著（P＜0.01）。

2.2 日糧酪氨酸水平對泰和烏骨雞血清中酪氨酸酶活性的影響（見表4）

由表4可知，在整個(gè)試驗(yàn)期血清中酪氨酸酶的活性均隨著日糧酪氨酸水平的提高先提高后降低，且除4周齡0.58%水平組與12周齡0.65%水平組外，各添加組與不添加組（酪氨酸水平為4周0.38%、8周0.48%、12周0.45%）差異顯著或極顯著（P＜0.05或P＜0.01）。在4周齡日糧酪氨酸為1.18%水平組的血清中酪氨酸酶活性達(dá)到最高且與0.38%水平組差異極顯著（P＜0.01）；在8周齡日糧酪氨酸為0.88%水平組的血清中酪氨酸酶活性達(dá)到最高且與0.48%水平組差異極顯著（P＜0.01）；在12周齡日糧酪氨酸為1.25%水平組的血清中酪氨酸酶活性達(dá)到最高且與0.45%水平組差異極顯著（P＜0.01）。從這些結(jié)果可以判斷，基礎(chǔ)日糧的酪氨酸不能滿足泰和烏骨雞維持和生長的需要。

2.3 泰和烏骨雞不同生長階段血清中酪氨酸酶活性與酪氨酸平均日采食量的回歸分析（見表5）

表3 不同日糧酪氨酸水平對泰和烏骨雞平均酪氨酸日采食量的影響[mg/（d·只)]

表4 不同日糧酪氨酸水平對泰和烏骨雞血清中酪氨酸酶活性的影響(U/ml)

表5 泰和烏骨雞不同生長階段血清中酪氨酸酶活性與酪氨酸平均日采食量的回歸方程

由表5可知，4周齡血清中酪氨酸酶活性與日糧酪氨酸平均日采食量的回歸方程差異顯著（P＜0.05）；8周齡血清中酪氨酸酶活性與日糧酪氨酸平均日采食量的回歸方程差異不顯著（P＞0.05）；12周齡血清中酪氨酸酶活性與日糧酪氨酸平均日采食量的回歸方程差異極顯著（P＜0.01）。由此說明，所得的一次回歸模型可以很好地反映酪氨酸平均日采食量在本試驗(yàn)條件下對泰和烏骨雞4周齡和12周齡血液中酪氨酸酶活性的影響規(guī)律（P＜0.05或P＜0.01）。

3 討論

酪氨酸酶是黑色素生成的關(guān)鍵酶和限速酶，其在體內(nèi)的表達(dá)量和活性決定著黑色素合成的速度和產(chǎn)量[9]。Li[10]和瞿明仁[11]研究發(fā)現(xiàn)，泰和烏骨雞對酪氨酸需要量與外來肉雞及其它地方品種雞相比存在很大差異。泰和烏骨雞與生長速度相近的生長期白殼蛋雞相比，其苯丙氨酸+酪氨酸的需要量比生長期白殼蛋雞高18.49%～26.5%，這應(yīng)與泰和烏骨雞獨(dú)特的遺傳特性有關(guān)。在本試驗(yàn)條件下，整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)血清中酪氨酸酶活性隨著日糧酪氨酸水平的提高先提高后降低。在1～4周齡、5～8周齡和9～12周齡酪氨酸適宜供給量分別是1.18%、0.88%和1.25%。而Li和瞿明仁[10-11]等利用析因法研究得出1～4、5～8和9～12周齡泰和烏骨雞酪氨酸需要量分別為0.49%、0.42%和0.35%。造成結(jié)果差異較大的主要原因可能是日糧組成、日糧的可消化性、研究方法等不同。析因法依據(jù)組織氨基酸組成與需要量高度相關(guān)，通過比較屠宰試驗(yàn)和氮平衡試驗(yàn)測定動物對所有必需氨基酸的需要量。這種方法,確定的需要量一般是最低需要量，未考慮飼糧類型、動物飼養(yǎng)環(huán)境、日糧氨基酸利用率等因素的影響。同時(shí)，在后者析因法的研究中，采用的是傳統(tǒng)的玉米-豆粕型日糧且在1～4周齡、5～8周齡和 9～12周齡日糧粗蛋白水平分別為 21.09%、19.07%和17.05%。研究表明，家禽氨基酸的需要量與日糧中其它營養(yǎng)素如能量水平、粗蛋白水平、氨基酸間的互作、維生素水平以及飼料氨基酸消化率等因素密切相關(guān)[12]。而本試驗(yàn)中我們采用的是低蛋白玉米-花生粕型日糧。因此本試驗(yàn)的日糧組成和營養(yǎng)水平以及氨基酸的消化率可能是影響泰和烏骨雞酪氨酸需要量的重要因素。

此外，Solminski等[13]利用倉鼠黑素細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，酪氨酸不僅是黑色素的前體，提高培養(yǎng)液中酪氨酸的濃度還可上調(diào)酪氨酸酶的活性，并進(jìn)而提高黑色素的合成；酪氨酸對黑素細(xì)胞酪氨酸酶活性的促進(jìn)作用存在劑量依賴性，在一定濃度范圍內(nèi)，酪氨酸酶活性隨酪氨酸濃度的提高而提高，但當(dāng)酪氨酸超過一定范圍時(shí)，對酪氨酸酶活性起抑制作用。本試驗(yàn)亦發(fā)現(xiàn)，日糧酪氨酸水平在0.38%～1.45%范圍內(nèi)，血清中酪氨酸酶活性隨著日糧酪氨酸水平的提高先提高后降低。在0～4周齡、5～8周齡和9～12周齡取得最大酪氨酸酶活性時(shí)酪氨酸適宜供給量分別是1.18%、0.88%和1.25%。通過回歸分析可知，在4和12周齡，當(dāng)日糧酪氨酸水平分別在0.38%～1.18%、0.45%～1.25%時(shí)，血清酪氨酸酶活性與酪氨酸的平均日采食量之間存在顯著的正相關(guān)關(guān)系。隨著日糧酪氨酸水平進(jìn)一步增加，血清酪氨酸酶活性下降，與日糧酪氨酸采食量呈顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系。

4 小結(jié)

在本試驗(yàn)條件下，日糧酪氨酸水平（1～4周齡0.38%～1.38%、5～8 周齡 0.48%～1.48%、9～12 周齡0.45%～1.45%）顯著影響 1～4周齡、5～8周齡和 9～12周齡泰和烏骨雞的酪氨酸酶活性。綜合考慮，泰和烏骨雞在1～4周齡、5～8周齡和9～12周齡日糧適宜酪氨酸水平分別為1.18%、0.88%和1.25%。

[1]李玉祥,陳彤,編著.中國泰和雞資源與開發(fā)利用 [M].北京：科學(xué)出版社,1994.

[2]黎觀紅,瞿明仁.泰和雞營養(yǎng)需要的研究現(xiàn)狀[J].畜禽業(yè),2000(11)：37.

[3]張桂芝,石天虹,黃保華,等.烏骨雞日糧蛋氨酸、賴氨酸、蘇氨酸需要量的研究[J].山東畜牧獸醫(yī),2007,30（3）：1-4.

[4]瞿明仁,盧德勛.日糧蛋氨酸水平對泰和烏骨雞生長性能的影響研究[J].飼料工業(yè),2004(12)：28-30.

[5]瞿明仁,游金明,熊玲玲,等.泰和絲毛烏骨雞早期 (0～12周齡)蛋氨酸需要量研究[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2004,35(5)：590-593.

[6]劉雪蘭,石天虹,黃保華,等.烏骨雞育雛日糧適宜氨基酸水平的研究[J].山東家禽,2002(11)：19-20.

[7]石天虹，黃保華，劉輝，等.烏骨雞飼料氨基酸消化率及日糧蛋氨酸、賴氨酸營養(yǎng)需要的研究[J].飼料研究，2005(12)：3-7.

[8]Alison J W, et al. New assays for the tyrosine hydroxylase and dopa oxidase activities of tyrosinase[J] .Eur. J. Biochcm, 1991(2)：317-326.

[9]朱慶,周海龍.烏骨雞黑色素生成的分子機(jī)理[J].中國家禽學(xué)報(bào),2003,7(1)：115-117.

[10]Li G H, Qu M R, Zhu N H, et al. Determination of the amino acid requirements and optimum dietary amino acid pattern for growing Chinese Taihe silky fowls in early stage [J]. Asian-Australasian J. Anim. Sci., 2003, 16(12)： 1782-1788.

[11]瞿明仁.泰和烏骨雞必需氨基酸需要量、模式及消化率研究[D].內(nèi)蒙古：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué),2005：120-122.

[12]黎觀紅,瞿明仁,宴向華.家禽氨基酸需要量的研究進(jìn)展 [J].飼料工業(yè),2001,22(2)：7-9.

[13]Solminski A, Moellmann G, Kuklinska E, et al. Positive regulation of melanin pigmentation by two key substrates of the melanogenic pathway, L-tyrosine and L-dopa[J]. J. Cell Sci., 1988, 89(3)： 287-296.

（編輯：劉敏躍，lm-y@tom.com）

S831.5

A

1001-991X（2010）13-0014-03

趙艷平，江西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，330045，江西南昌。

黎觀紅、瞿明仁（通訊作者），單位及通訊地址同第一作者。

李建喜，江西省家畜血吸蟲防治站。

2010-03-17