李 媛，胡正軍

(1浙江省義烏市疾病預防控制中心，浙江 義烏322000；2浙江省中醫(yī)院，浙江 杭州310006)

白血病是嚴重危害人類身心健康的惡性疾病，臨床上長期以來根據(jù)細胞形態(tài)學及組織化學染色對其進行分型診斷，雖然發(fā)揮了巨大作用，但其分型結(jié)果遠遠滿足不了目前臨床對白血病診斷的要求。近年來隨著多參數(shù)、高分辨流式細胞儀的應用，許多不能單憑形態(tài)學來確診的白血病能被準確鑒定[1]，對各類急性白血病(Acute leukemia，AL)的診斷、治療和預后判斷有重要的臨床意義。為進一步提高白血病的診斷水平，并指導治療和判斷預后,我們對201例急性白血病免疫分型結(jié)果進行回顧性總結(jié)和分析，并和形態(tài)學分型進行比較。

1 材料與方法

1.1 一般資料 2002年10月～2008年10月在浙江省中醫(yī)院血液科初診為急性白血病的患者201例，其中男136例，女65例，平均年齡35.5歲。按我國白血病診斷標準分型[2]，其中急性髓細胞白血病(acutemyeloblastic leukemia，AML)132 例，急性淋巴細胞白血病 (acute lymphoblastic leukemia，ALL)54例，形態(tài)學不典型無法準確判斷者15例。

1.2 標本準備 取骨髓或外周血2m l，肝素或EDTA抗凝。根據(jù)骨髓增生程度及外周血白細胞數(shù)，部分樣本用生理鹽水稀釋至細胞數(shù) (1～10)×109/L備用。

1.3 儀器與試劑 流式細胞儀為美國貝克曼庫爾特公司XL-EPICS。所有單克隆抗體及紅細胞裂解液 (FACS Lysing Solution)均購自美國Coulter公司，抗體有淋巴細胞 T 系標志 CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8，B 系 標 記 CD10、CD19、CD20、CD22、CD22； 髓 系 標 記 MPO、CD13、CD33、CD14、CD15、CD11b、CD117；紅系候選單抗為GPA；巨核系候選單抗為 CD41、CD61；非系列特異性抗原 CD34、CD38、HLA-DR及白細胞共同抗原CD45。

1.4 方法 采用全血單抗三色標記法檢測細胞表面抗原或胞漿內(nèi)抗原。首先調(diào)整骨髓細胞濃度至106/m l左右，分別取1ml加至每管，再分別加抗CD45單抗5μl和各類標有不同熒光色素的單抗10μl，混勻，避光室溫下反應 30min左右后，溶血，PBS洗滌后，靜置15～20min后上機檢測。胞漿內(nèi)抗原檢測：加入抗CD45單抗室溫孵育30min后，再按試劑盒所述步驟改變細胞膜滲透性，最后加相應單抗孵育30min后上機檢測。

1.5 結(jié)果判斷 淋系標志≥30%為陽性,髓系標志≥20%為陽性，CD34，HLA-DR≥20%為陽性。My+ALL指形態(tài)學、免疫學符合ALL，免疫分型以淋系為主，至少有1個髓系抗原表達；Ly+AML指形態(tài)學、免疫學符合AML，免疫分型以髓系為主，至少有1個淋系抗原表達；同一白血病細胞同時表達髓系和淋系標記稱為雙表型白血??；存在兩群或以上細胞群，免疫分型分別表達淋系和髓系標記，稱為雙系列型白血病[3]。

2 結(jié)果

2.1 CD34及HLA-DR與FAB分型之間的關(guān)系

2.2 132例AML抗原表達 髓系抗原表達主要是CD33、CD13，陽性率分別是93.2%和77.3%；其次為CD11、CD15、CD14， 陽性率分別為 50%、29.5%和9.1%；56.8%AML患者伴淋巴系抗原表達，淋巴系抗原依次為CD4、 CD7、CD22、CD19，陽性率分別是22.7%、20.5%、18.2%、9.1%。 (見表 2)。

表1 AL各亞型CD34及HLA-DRA表達情況

2.3 54例ALL抗原表達 ALL淋巴系抗原表達陽性率依次為 CD19(88.9%)、CD22(88.9%)、CD10(83.3%)、CD20(55.6%)。 50%ALL 患者伴髓系抗原表達，陽性率依次為 CD33(22.2%)、CD11(22.2%)、CD13(11.1%)(見表 3)。

表2 132例AML抗原表達情況

表3 54例ALL抗原表達情況

2.4 15例形態(tài)學無法分型的急性白血病患者經(jīng)免疫學檢查后6例診斷為急性混合細胞型白血病；3例診斷為ALL-L2；3例診斷為B-ALL；3例診斷為AML-M0。

3 討論

目前國內(nèi)許多醫(yī)院診斷白血病主要依靠形態(tài)學及組織細胞化學染色，但是單純的形態(tài)加細胞化學染色已遠不能滿足臨床需要，尤其對于形態(tài)學不典型的復雜類型白血病的鑒定往往依靠形態(tài)分析人員的經(jīng)驗，不同人員分析所得結(jié)論可能不同,甚至相反，因此上述方法存在相當?shù)木窒扌裕谐霈F(xiàn)錯誤判斷的可能性，并影響到下一步的治療。流式細胞免疫分型是應用單克隆抗體熒光標記技術(shù)對各種血細胞內(nèi)外的特異性抗原進行精細的檢測和判定,具有高度的敏感性、特異性和穩(wěn)定性，且能夠在短期內(nèi)對大量細胞定量分析，因而提高了白血病分型的準確率，彌補了形態(tài)學分型的不足。

隨著免疫學單抗技術(shù)的不斷提高和對白細胞分化抗原研究的日趨深入，已認識到有些白血病細胞抗原特異性強，很少發(fā)生交叉表達，如CD3，CD22，CD79，MPO等，有些曾被認為屬于某系列特異性的抗原，實際在其它系列的某一階段或特殊情況下也能出現(xiàn)， 如 CD7，CD5，CD10，CD19，CD13，CD33 等[4]。

為了進一步了解白血病細胞來源和生物學特性，我們分析了201例初診急性白血病患者的數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)AML中除M3病型外，其他病型CD34和(或)HLA-DR相對較高的表達，與國內(nèi)外的報道基本一致，即M3型白血病CD34低表達，HLA-DR多陰性[5，6]。 CD14主要在M4、M5中表達， 表達率分別為100%、33.3%，其他白血病均不表達此抗原。已有研究證實CD14為單核細胞的特異性標記抗原[7]，本實驗結(jié)果也支持這個結(jié)論，提示可以把CD14作為M4、M5較為特異的免疫分型標志。另在AML中M4、M5的CD4陽性率為70%，提示CD4一定程度上也可以作為M4、M5的輔助分型指標。AML部分亞型伴淋巴系抗原表達，Khalidi[8]等報道AML中48.1%伴淋系表達 (CD20、CD7、CD19、CD2、 CD3、CD5、CD10)。本研究結(jié)果顯示：56.8%AML患者伴淋巴系抗原表達，表達率依次為 CD4、CD7、CD22、CD19。ALL B淋巴系抗原表達主要是CD19、CD22、CD10、CD20，T淋巴系抗原表達主要是CD7，本研究中ALL亞型主要是B型ALL；50%ALL患者伴髓系抗原表達，表達率依次為CD33、CD11b、CD13。

免疫分型在AL的診斷中的價值是近年研究的熱點之一，但不一致性甚至相反的結(jié)論使其至今尚無統(tǒng)一的國際分型標準，結(jié)論各異的原因可能與單克隆抗體(McAb)的來源、檢測手段的靈敏性、抗原表達與否的判定標準、不同的病例組成等因素有關(guān)。相信隨著免疫學單抗技術(shù)的不斷提高和對白細胞分化抗原研究的日趨深入，在形態(tài)學基礎(chǔ)上結(jié)合免疫學分析，可更精確地了解待檢測細胞的不同分化階段和類型，提高白血病的分型準確性，具有補充和糾正診斷的臨床意義?？傊?，急性白血病免疫分型是對形態(tài)學分型的重要補充，對于復雜類型白血病的診斷有重要價值。

[1]Naunheim MR,Nahed BV,Walcott BP,et al.Diagnosis of acute lymphoblastic leukemia from intracerebral hemorrhage and blast crisis.A case report and review of the literature[J].clin Neurol Neurosurg,2010,112(7):575-577.

[2]張之南,沈 悌.血液病診斷及療效標準[M].第三版,北京:科學出版社,2007:232-235.

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[8]Khalidi H,Medeiros L,Chang K,et al.The immunophenotype of adult acute leukemia:high frequency of lymphoid antigen expression and comparison of immunophenotype, French-American-British classification,and karotic abnormalities[J].Am JClin Pathol,1998,109(2):211-220.