張勁豐，安宏亮

(廣東省佛山市中醫(yī)院檢驗科，廣東 佛山 528000)

預防和控制宮頸癌的關鍵是早期診斷和治療癌前病變——宮頸上皮內(nèi)瘤樣變(Cervical Intraepithelial,CIN)，阻斷其進展到宮頸癌的潛在危險。高危型HPV病毒的持續(xù)感染已被證明是導致宮頸癌及CIN的首要致病因素[1-3]。本文旨在通過對臨床病例的研究分析，探討高危型HPV病毒DNA含量與宮頸癌前病變關系。

材料與方法

1材料來源 取自2004年6月至2007年6月期間，在我院婦科宮頸病-宮頸癌篩查防治中心就診的同時行HR-HPV DNA、陰道鏡檢查及病理活檢的892例病例，年齡范圍在17～69歲，21～40歲病例占85.6%。

2病例納入標準 同時行HR-HPV DNA檢測、陰道鏡下病理活檢；三月內(nèi)未行抗病毒的物理、藥物治療；既往無因CIN而行宮頸手術(shù)史；排除同一病例因復查而重復納入統(tǒng)計的情況。

3陰道鏡病理活檢 在陰道鏡下取子宮頸異常部位或是多點活體組織做病理檢查。依據(jù)子宮頸病理結(jié)果，將病例分為正常、CIN-Ⅰ、CIN-Ⅱ～Ⅲ三組。

4 HR-HPV DNA檢測 采用美國Digene公司第二代基因雜交捕獲信號放大檢測試驗(Hybrid CaptureⅡ，HC-Ⅱ)，它是目前FDA批準的唯一一種用于SCC篩查的檢測HPV的試驗。其原理是利用核酸分子雜交、酶聯(lián)免疫反應、抗體捕獲、信號放大、化學發(fā)光等技術(shù)，檢測HR-HPV病毒DNA的含量，檢測靈敏度約1pg/ml。本試驗檢測的HR-HPV病毒包括16/18/31/33/35/39/45/51/52/56/58/59/68共13種病毒亞型。以標本的相對的熒光光度單位值(Relative Light Units，RLUs)與陽性標準品的閾值(Cut Off,CO)的比值表示。RLU/CO≥1.0為陽性，＜1.0為陰性。RLU/CO值越高，表示病毒含量越高[4-5]。不同宮頸病變級別的病毒含量原始結(jié)果為RLU/CO值，離散程度較大，將其對數(shù)轉(zhuǎn)換(Log10RLU/CO)以方便統(tǒng)計。驗證對數(shù)轉(zhuǎn)換后定量結(jié)果的頻數(shù)分布規(guī)律。正常病例組陽性結(jié)果范圍在0～3.57，按照百分位數(shù)等分為三組：低度含量組0～1.19；中度含量組1.20～2.39；高度含量組2.40～3.58。

5統(tǒng)計方法 應用卡方 (χ2)檢驗各病例組HRHPV DNA陽性率是否存在差異。應用SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析，以一元線性回歸分析HR-HPV DNA病毒含量與CIN病變程度的關系，單因素方差比較分析三組陽性病例的均值[5]。P＜0.05有統(tǒng)計學意義，P＜0.01有顯著統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

1 892 例病例HR-HPV DNA陽性率及與子宮頸病變的陽性對照結(jié)果見表1。各組HPV陽性率經(jīng)卡方檢驗其差異有顯著統(tǒng)計學意義 (χ2=90.926，P＝0.000，P＜0.01)。

表1 892例病例HR-HPV DNA陽性率及與子宮頸病變的陽性對照

2 各組在低度含量 (0～1.19)、中度含量 (1.20～2.39)、高度含量(2.40～3.58)的分布比例，結(jié)果見表 2。

3各組HPV DNA含量平均值和95%置信區(qū)間，結(jié)果見表3。三組陽性病例結(jié)果均值經(jīng)方差分析，F(xiàn)=1.149，P>0.05，說明各組陽性結(jié)果均值的差異沒有統(tǒng)計學意義。DNA含量與子宮頸病變程度經(jīng)一元線性回歸，F(xiàn)=2.176，P＞0.05，說明DNA含量的高低與CIN病變程度不呈線性相關。

表2 各組HR-HPV DNA病毒含量(Log10RLU/CO)分布

表3 各組HR-HPV DNA病毒含量(Log10RLU/CO)均值和95%CI

4三組陽性病例DNA含量分布的箱體圖，長方塊表示分布的范圍，中間黑色實線為均值，見圖1。

討 論

圖1 三組病例的DNA含量分布

宮頸癌的發(fā)生是多種病因長期綜合作用的結(jié)果，自Hausen提出HPV可能與宮頸癌發(fā)病有關的假設后，國內(nèi)外的學者對此進行了大量的研究[1-3]，結(jié)果顯示HR-HPV感染是宮頸癌及癌前病變的必要致病因素。本次研究也證明了HR-HPV感染與宮頸病變的發(fā)生密切相關，隨CIN病變程度的加重，HR-HPV感染率增高，歸因危險度也增高。

從HR-HPV感染開始，由低度瘤樣變(CIN-Ⅰ級)進展到高度瘤樣變(CIN-Ⅱ～Ⅲ級)，最終發(fā)生宮頸癌是一個漸進的過程。CIN病變程度分級與感染的HR-HPV病毒DNA含量的關系，國內(nèi)外文獻報道有兩種相反的觀點[6-8]。國內(nèi)部分研究者采用此法研究顯示DNA含量與宮頸病變程度成正相關，這和DNA病毒含量的“高、中、低”的劃分標準明顯相關。我們認為依據(jù)無CIN組數(shù)據(jù)的頻數(shù)分布規(guī)律，按照百分位數(shù)等分為“高、中、低”比單純的以絕對RLU/CO值來劃分更合統(tǒng)計學的要求。本次研究顯示各級CIN病變的HR-HPV DNA含量沒有統(tǒng)計學意義的差別，DNA含量的高低與CIN病變分級并不完全一致，不能代表宮頸病變程度的高低。有研究發(fā)現(xiàn)不是所有的HR-HPV的感染和CIN-I級病變都會發(fā)展到宮頸癌，這和感染HPV病毒后，病毒的生物狀態(tài)密切相關。HPV-DNA與宿主基因整合后，會導致病毒的持續(xù)感染和宮頸病變的進一步發(fā)生發(fā)展。5～10%的CINⅡ～Ⅲ病變發(fā)生DNA的整合，在CIN-Ⅰ的病變中則很少發(fā)生，這可能是HR-HPV DNA含量不與CIN病變程度成正相關的一個原因。因此，如何鑒別HPV病毒的持續(xù)感染和一過性感染也是很有意義的研究。

從各級CIN病變在低、中、高三個濃度病例分布規(guī)律的研究顯示，CIN分級與HR-HPV DNA含量顯著相關。從病毒感染到出現(xiàn)形態(tài)學改變，HRHPV持續(xù)在較高的水平，逐漸由量變發(fā)生了質(zhì)變，提示病毒含量與體內(nèi)免疫的一個抗衡過程，病毒感染自然消退的過程以及少部分呈現(xiàn)出持續(xù)感染的過程，病毒含量越高，發(fā)生高級別CIN的可能性越大[6]。因此，HR-HPV定量檢測的結(jié)果，適用于篩查子宮頸病變的高危人群，可作為宮頸癌及癌前病變早期篩查和監(jiān)控其發(fā)生發(fā)展、監(jiān)測療效的有效方法 [4，8]。

近年來，宮頸癌發(fā)生率的下降，與通過HRHPV檢測來篩查宮頸癌及癌前病變的廣泛應用分不開[6]，HR-HPV的檢測使宮頸癌的防治發(fā)生了理念性的改變。如能進一步研究透澈HPV病毒各亞型的宮頸病變的致病性，病毒持續(xù)含量與子宮頸病變發(fā)生程度的關系，則能更快速、簡便、準確地篩查出宮頸癌及癌前病變及高危人群，可極大的節(jié)約醫(yī)療成本，提高社會效益。

[1]趙芳輝,李 楠,馬俊飛,等.山西省襄垣縣婦女人乳狀瘤病毒感染與宮頸癌關系的研究[J].中華流行病學雜志，2001,10.22(5):375-378.

[2]Bohmer G,van den Brule AJ,Brummer O,et al.No confirmed case of human papillomavirus DNA negative cervical intraepithelial neoplasia grade 3 or invasive primary cancer of the uterine cervix among 511 patients[J].Am JObstetGynecol,2003,189(1):118-120.

[3]Clifford GM,Smith JS,Plummer M,et al.Human papillomavirus types in invasive cervical cancer worldwide:ameta analysis[J].Br J Cancer,2003,88(1):63-73.

[4]楊 毅,王友芳,郎景和,等.高危型人乳頭瘤病毒雜交捕獲法Ⅱ評估宮頸上皮內(nèi)瘤變的臨床價值[J].中國醫(yī)學科學院學報,2006,28(3):395-398.

[5]趙方輝,馬俊飛,喬友林,等.人乳狀瘤病毒DNA含量與子宮頸病變的關系[J].中華流行病學雜志,2004,25(11):921-924.

[6]張小燕,陳慶云,卞美璐.人乳頭狀瘤病毒感染生物狀態(tài)與宮頸病變研究進展[J].中國婦產(chǎn)科臨床雜志,2006,3.7(2):147-150.

[7]李淑敏,章文華,吳令英,等.人乳頭狀瘤病毒負荷量與子宮頸癌及其癌前病變關系的初步研究[J].中華婦產(chǎn)科雜志,2004,39(6):400–402.

[8]喬友林,章文華,李 凌,等.子宮頸癌篩查方法的橫斷面比較研究[J].中國科學院院報,2002,24(1):50-53.