李巧敏 趙宏儒 趙翠英 李保軍 苗香芬 路新利 胡園園 邢輝

HIV具有高度變異的生物學特性，使得其在傳播過程中產(chǎn)生了許多相對獨立的基因序列特征的組和亞型［1］，同時形成了特定地區(qū)或特定人群的不同亞型分布。為及時掌握河北省艾滋病病毒1型(HIV-1)的主要亞型類別和分布特點，監(jiān)測不同人群中亞型毒株的分布和基因變異規(guī)律，對2008年新發(fā)現(xiàn)的HIV-1感染者開展HIV-1流行毒株亞型分布和變異情況研究，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 在2008年新報告的HIV感染者中隨機抽樣64份，其中性傳播途徑44例(異性傳播14例，同性傳播30例)，血液傳播4例，吸毒傳播5例，不詳9例。

1.2 樣品采集與處理 在對2008年新發(fā)現(xiàn)的HIV感染者進行流行病學調(diào)查時，用真空抗凝采血管采取靜脈血，分離血漿和淋巴細胞富集液于－80℃?zhèn)溆?。使用Qiagen公司QIAamp Viral RNA Mini Kit或Roche公司MagNA Pure LCsystem核酸自動提取儀按照說明書提取血漿樣本的病毒RNA。

1.3 HIV基因擴增和純化 擴增gag基因和env基因2個片段確定病毒基因型別。第一輪采用TaKaRa One Step RT-PCR試劑，第二輪PCR擴增基于Tiangen PCR Master Mix，按照試劑說明書操作。所用引物見表1。第二輪PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳，用QIANGEN公司的QIAquick gel extraction kit，按照說明提純擴增的HIV-1 DNA片段。

內(nèi)部控制環(huán)境是企業(yè)內(nèi)部控制要素中的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)，是保證內(nèi)部控制順利實施的基本前提。企業(yè)要想營造完善的內(nèi)部控制環(huán)境必須從內(nèi)部控制制度框架的構(gòu)建著手，以此為基礎(chǔ)，充分發(fā)揮內(nèi)部控制環(huán)境的作用。例如：企業(yè)應將內(nèi)部控制的理念灌輸?shù)矫恳幻麊T工的心中，將內(nèi)部控制融入到企業(yè)的所有日常經(jīng)營管理環(huán)節(jié)中，從而為內(nèi)部控制的順利實施營造良好的環(huán)境，為內(nèi)部控制的順利實施提供制度保障。再例如：作為企業(yè)的高層管理者必須結(jié)合自身的實際情況，高度關(guān)注并重新認識內(nèi)部控制制度的重要性，并在企業(yè)內(nèi)部成立合規(guī)的監(jiān)察部門，實現(xiàn)對企業(yè)各個業(yè)務處理流程的動態(tài)化合規(guī)監(jiān)察。另外，企業(yè)還必須站在全局發(fā)展的角度對內(nèi)部控制的實施做一個整體規(guī)劃。

1.4 核苷酸序列測定 以提純的PCR產(chǎn)物為模板，測序引物用e7和GUX/GDX，用ABI公司3730型DNA全自動序列進行序列測定。

1.5 HIV-1亞型確定和系統(tǒng)進化樹分析 獲得的gag基因區(qū)和env基因區(qū)序列與HIV-1國際參考株比對后進行系統(tǒng)進化樹分析，分別確定不同基因的亞型，對于發(fā)現(xiàn)的新重組模式的序列進行重組斷點分析，結(jié)合2個基因片段的結(jié)果確定樣本亞型。用Los Alamos HIV database網(wǎng)站下載分型參考株序列。綜合分析獲得的gag基因區(qū)和env基因區(qū)的序列，與HIV-1國際參考株比對。用MEGA4.0軟件進行系統(tǒng)進化樹分析。分別確定不同基因的亞型，對于B/C重組亞型主要以gag基因判別。

表1 擴增的HIV-1基因片段和引物

2 結(jié)果

2.2 河北省HIV-1毒株系統(tǒng)進化樹分析 根據(jù)其gag和env基因片段，與HIV-1各個亞型國際參考株進行比對后構(gòu)建系統(tǒng)進化樹，結(jié)果見圖1、2。

2.3 在本次流行病學調(diào)查中，采集血樣64份，獲得序列58份，共存在5種亞型。其中，B亞型為河北省HIV傳播的主要流行毒株，占43.1%(25/64)，主要分布于血液傳播途徑、性傳播途徑人群中;其次是CRF01-AE和CRF07-BC亞型毒株，各占25.9%(15/64)。CRF01-AE亞型毒株主要分布在同性傳播人群中，CRF07-BC亞型毒株的分布人群比較復雜，包括性傳播途徑、吸毒以及不詳?shù)热巳骸＞唧w亞型的分布情況見表2。

2.1 擴增結(jié)果 gag基因片段擴增陽性54份，占84.4%;env基因片段擴增陽性58份，占90.6%。其中，測序后獲得gag基因序列52條，env基因序列54條。

圖1 2008年河北省HIV env基因系統(tǒng)進化樹分析

圖2 2008年河北HIV gag基因系統(tǒng)進化樹分析

時值明治維新(1868年)，33歲的加藤由新政府重新任命為開成所教授職并。1869(明治2)年，34歲時就任大學大丞一職。1871(明治4)年成為文部大丞。其后數(shù)年間，數(shù)次被明治政府任官授職，但皆辭職。至1877(明治10)年，42歲時由文部大輔、田中不二麻呂被任為東京大學法學部、理學部、文學部的3學部綜理(起初，醫(yī)學部綜理是池田謙齋)。1881(明治14)年有所改正，加藤成為4學部的初代總理(從此年設置學部長一職，外山正一就任文學部長)。

卡夫卡父子關(guān)系的痛苦之處在于：卡夫卡無法成為父親，無法找到屬于自己的坐標，更不可能用父親的標準來衡量自己那個完全迥異的世界，而卡夫卡顯然一生都受困于此；父親的蠻橫無理擊潰了卡夫卡，以至于他認為一切困難都可以擊倒他；而父親粗暴的愛也并沒有教會卡夫卡責任和承擔，教會他勇敢地選擇并為之付出代價?？ǚ蚩o法在內(nèi)心樹立起一個屬于自己的強大形象，并達到最終真正的成長。

表2 2008年河北省樣本亞型分布情況

3 討論

2008年河北省發(fā)現(xiàn)了5種HIV-1亞型毒株。其HIV-1流行毒株主要為B亞型毒株，占43.1%(25/64);其次是CRF01-AE和CRF07-BC亞型毒株，各占25.9%(15/64)。B亞型毒株主要分布于血液途徑傳播、性傳播途徑人群中;CRF01-AE亞型毒株主要分布在同性傳播人群中。性傳播人群中亞型種類比較復雜，除以 B亞型為主外，還發(fā)現(xiàn) CRF01-AE、CRF07-BC、CRF08-BC和C四種亞型。2007年進行的HIV-1分子流行病學調(diào)查時，也是發(fā)現(xiàn)了此5種HIV-1亞型毒株，但是不同的是，5種HIV-1亞型毒株的比例發(fā)生了明顯的變化。2008年的HIV-1分子流行病學調(diào)查發(fā)現(xiàn)，B亞型毒株依然是主要的流行株，但是比例有所下降，CRF01-AE亞型毒株所占比例由29.4%降至25.9%。CRF-BC亞型毒株所占比例明顯上升，尤其是CRF07-BC亞型毒株，在2007年的全國HIV-1分子流行病學調(diào)查中僅有1例［2］，2008年上升至15例，所占比例由2.9%上升至25.9%?？梢钥闯?，CRF07-BC亞型毒株在我省近幾年開始普遍流行。可見，隨著HIV-1流行時間的推移和傳播途徑的多樣化，HIV-1流行的亞型比例在發(fā)生變化，人群分布也進一步復雜化。

我省血液途徑傳播的人群中主要流行B亞型，這與我國供受血感染者中以B亞型為主相一致。但是除在供受血感染者中存在外，性傳播途徑人群中也發(fā)現(xiàn)了B亞型毒株［3］。我國的CRF01-AE亞型從東南沿海省市向周邊迅速擴散，我省的CRF01-AE亞型在同性戀人群中蔓延迅速，比例增長明顯，應引起高度重視。同時CRF07-BC亞型比例的增加，說明HIV-1的感染途徑愈來愈多樣化［4］。由于HIV-1感染的血液傳播途徑基本已被控制，經(jīng)性傳播途徑和母嬰傳播途徑感染的比例開始迅速上升。據(jù)此，我們今后的工作重點應適當轉(zhuǎn)移，大力宣傳，加強對高危人群干預和監(jiān)測，采取綜合多樣措施，切實有效地預防艾滋病的傳播，控制經(jīng)性傳播蔓延的趨勢。

1 Robertson D，Bradac J，F(xiàn)oley B，et al.HIV-1 nomenclature proposal.Science，2000，288:55-56.

2 趙翠英，邢輝，趙宏儒，等.河北省2007年HIV-1流行毒株基因序列測定及亞型分析.中華流行病學，2009，30:871-872.

3 潘曉紅，姚亞萍，夏時暢，等.浙江省2003-2005年HIV-1感染者分子流行病學研究.中國艾滋病性病，2007，13:308-310.

4 劉麗花，卜憲嶺，李衛(wèi)紅，等.男性性行為人群HTV-I基因序列測定和亞型分析.河北醫(yī)藥，2010，32:287-288.