林存?zhèn)b,溫洪濤#,張 蕾,張?jiān)茲h

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科鄭州 450052 2)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科鄭州 450052 3)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科鄭州 450052

#通訊作者,男,1968年2月生,博士,教授,主任醫(yī)師,研究方向:消化道腫瘤的基礎(chǔ)與臨床,E-mail:wenhongtao68@163.com

胃癌是發(fā)病率較高的一種惡性腫瘤,嚴(yán)重危害人類的生命與健康,早期多發(fā)轉(zhuǎn)移是其一個(gè)重要的生物學(xué)特性[1]。MTA1(metastasisassociated gene 1)是最近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因,盡管其功能尚未完全清楚,但已有的研究[2]表明,其表達(dá)產(chǎn)物MTA1蛋白與多種腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。微血管密度(microvessel density,MVD)反映腫瘤新生血管的增生程度,腫瘤組織中 MVD越高,腫瘤越易浸潤、轉(zhuǎn)移[3]。為了解胃癌組織中 MTA1蛋白的表達(dá)及其與MVD的關(guān)系,作者進(jìn)行了如下研究。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科 2006年 9月至 2008年 9月 63例胃腺癌組織存檔蠟塊,患者術(shù)前均未接受化療、放療及免疫治療等,其中男 34例,女 29例,年齡 35.0～77.0 (57.4±11.0)歲;高、中分化腺癌22例,低分化腺癌41例;侵及淺肌層者 9例,侵及深肌層者 22例,侵及漿膜層者 32例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者 36例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者 27例。另選同期 12例胃潰瘍手術(shù)患者潰瘍旁正常胃黏膜組織作對照,其中男 7歲,女 5例;年齡36.0～75.0(56.1±9.8)。標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)證實(shí)。

1.2 主要試劑 山羊抗人MTA1多抗購自美國Santa Cruz公司,工作濃度為1:200;濃縮型鼠抗人CD105單抗(工作濃度 1:100)和免疫組織化學(xué)通用試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 2種組織中TA 1蛋白及M VD檢測 標(biāo)本均經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為10%甲醛固定,石蠟包埋,4μm厚連續(xù)切片3張,1張行 HE染色以確定病理性質(zhì),另外2張用于免疫組織化學(xué)檢測。切片常規(guī)脫蠟、脫水,抗原經(jīng)高溫高壓修復(fù),嚴(yán)格按免疫組化試劑盒說明書步驟進(jìn)行操作。分別以已知MTA1蛋白陽性的乳癌組織、CD105陽性的扁桃體組織作為陽性對照,用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) MTA1蛋白陽性染色顆粒主要位于胞核內(nèi),部分細(xì)胞胞質(zhì)也呈陽性反應(yīng)。采用Barnes等[4]半定量法進(jìn)行陽性結(jié)果判定,每例選擇10個(gè)高倍視野,計(jì)算MTA1陽性細(xì)胞數(shù)占視野中腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比:無陽性表達(dá)計(jì)0分,＜25%計(jì)1分,25%～計(jì) 2分,50%～計(jì) 3分,≥75%計(jì) 4分。按染色強(qiáng)度計(jì)分:淺黃色計(jì) 1分,棕黃色計(jì)2分,棕褐色計(jì) 3分。將 2項(xiàng)指標(biāo)評分相乘,總分0分為陰性(-),＞1分為陽性(+)。依照Weidner等[5]的判斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行MVD判定:所有染成棕色的單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇均計(jì)數(shù)為 1個(gè)血管,管徑 ＜50 μm、單個(gè)染色細(xì)胞及成群無管腔的染色細(xì)胞均作為微血管計(jì),而管徑 ＞50μm及肌層較厚者均不作為微血管計(jì)。先于低倍鏡下尋找 MVD最高的區(qū)域,然后在高倍鏡下選擇 3個(gè)視野計(jì)數(shù)微血管,取平均值即為MVD。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 10.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,應(yīng)用 χ2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)或單因素方差分析比較不同類型胃組織及不同臨床病理特征的胃癌組織中 MTA1蛋白和MVD的表達(dá)情況,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 2種胃組織中M TA 1蛋白的表達(dá)及MVD比較 MTA1蛋白的表達(dá)見圖1A、1B。CD105標(biāo)記的微血管主要分布于腫瘤組織,特別是腫瘤邊緣區(qū),在正常胃黏膜中表達(dá)較弱或不表達(dá)(圖 1C、1D)。胃癌組織中MTA1蛋白的表達(dá)及MVD高于正常胃黏膜組織,見表 1。

圖1 正常胃黏膜及胃癌組織中M TA 1蛋白及微血管檢測結(jié)果(SP,×400)A,B:分別為正常胃黏膜和胃癌組織中MTA1蛋白的表達(dá);C,D:分別為正常胃黏膜和胃癌組織中MVD的表達(dá)。

表1 2種胃組織中M TA 1蛋白的表達(dá)及MVD比較

*χ2=9.380,P=0.002;#t=9.974,P＜0.001。

2.2 胃癌組織中M TA1蛋白表達(dá)及M VD與臨床病理特征的關(guān)系 見表2。

表2 胃癌組織中MTA 1蛋白表達(dá)及M VD與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 胃癌組織中M TA1蛋白的表達(dá)與MVD的關(guān)系 MTA1蛋白表達(dá)者M(jìn)VD值(47.49±7.69)高于MTA1蛋白未表達(dá)者(36.77±5.71)(t=5.265,P＜0.001)。

3 討論

自從Toh等[6]利用Southern印跡雜交法分離出鼠乳癌相關(guān)基因 MTA1及其對應(yīng)的人類同源物MTA1之后,MTA1及其表達(dá)產(chǎn)物與腫瘤的關(guān)系就成了研究的熱點(diǎn)。MTA1蛋白在腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移中的作用目前還不清楚,研究[7]證明 MTA1蛋白是核小體重塑和組蛋白去乙?；笍?fù)合物的一個(gè)組成部分,可通過與組蛋白去乙酰化酶(HDACs)結(jié)合,趨化HDACs到達(dá)目標(biāo)基因的啟動(dòng)子區(qū)域,通過去除其組蛋白的乙?；鶑亩厮苋旧|(zhì)結(jié)構(gòu),促進(jìn)基因組DNA與組蛋白結(jié)合,使某些染色質(zhì)區(qū)域的結(jié)構(gòu)由松散變得更加緊密,從而導(dǎo)致某些抑制腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移的基因的轉(zhuǎn)錄受到抑制,降低其表達(dá)水平。

作者的研究結(jié)果顯示:胃癌組織中MTA1蛋白的表達(dá)水平高于正常胃黏膜組織;胃癌組織中侵及漿膜者M(jìn)TA1蛋白表達(dá)水平高于未侵及漿膜者,低分化者高于高中分化者,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。說明MTA1蛋白的表達(dá)與胃癌的發(fā)生及浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān),MTA1蛋白的過表達(dá)可能是胃癌發(fā)生發(fā)展的促進(jìn)因素。

有研究[8]報(bào)道,MTA 1可能是通過增強(qiáng)低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)的穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)錄活性間接使血管內(nèi)皮生長因子的轉(zhuǎn)錄活性和表達(dá)增強(qiáng),最終導(dǎo)致新生血管的形成,但具體機(jī)制尚不清楚。作者的研究結(jié)果表明,MTA1蛋白陽性表達(dá)的胃癌組織中MVD的表達(dá)高于MTA1蛋白陰性表達(dá)者,提示胃癌組織中MTA 1蛋白的過表達(dá)可能與微血管的生成密切相關(guān),具體機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述,MTA1蛋白在胃癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用,可能與其促進(jìn)胃癌組織的微血管生成有一定關(guān)系。深入研究 MTA1蛋白及其編碼基因,進(jìn)而研究它們與腫瘤的關(guān)系對于進(jìn)一步揭示腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移機(jī)制和探尋更為有效的治療手段具有重要意義。

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