張延新,劉喜民,陳奎生,杜華貞,張?jiān)茲h

1)漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校病理學(xué)教研室漯河 462002 2)漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校組織胚胎學(xué)教研室漯河 462002 3)鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室;河南省腫瘤病理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室鄭州 450052

#通訊作者,男,1964年8月生,博士,教授,研究方向:腫瘤病理,E-mail:chenksh2002@yahoo.com.cn

胃癌是消化道最常見的惡性腫瘤,病死率高。研究[1]表明,胃癌的生物學(xué)行為與某些分子指標(biāo)有關(guān)。作者運(yùn)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)了胃癌組織中腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KISS-1與基質(zhì)金屬蛋白酶-9 (MMP-9)蛋白的表達(dá),探討2者在胃癌發(fā)生發(fā)展及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中的作用。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 45例胃癌組織標(biāo)本來(lái)自漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校附屬醫(yī)院及鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2005年9月至 2007年 9月的存檔蠟塊,均經(jīng)病理學(xué)復(fù)查確診。45例中男 34例,女 11例,年齡 36～78歲。胃癌診斷和分級(jí)參照全國(guó)胃癌協(xié)作組病理組規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。45例胃癌標(biāo)本中,按浸潤(rùn)深度分為淺肌層組(14例)、深肌層組(15例)及外膜組(16例);按有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分為轉(zhuǎn)移組(22例)和無(wú)轉(zhuǎn)移組(23例)。所有患者術(shù)前均未接受化療、放療及免疫治療。45例均為胃腺癌,每例標(biāo)本分別取無(wú)壞死癌灶及遠(yuǎn)離癌灶的手術(shù)殘端組織(正常組織),全部標(biāo)本均經(jīng)40 g/L多聚甲醛固定,石蠟包埋,4μm厚連續(xù)切片備用。

1.2 2種組織中KISS-1和MMP-9蛋白檢測(cè) 羊抗人KISS-1單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)DAKO公司,兔抗人MMP-9多克隆抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。采用SP法,KISS-1一抗工作濃度為1: 200,MMP-9為即用型工作液,DAB顯色,蘇木素復(fù)染。染色步驟嚴(yán)格按說(shuō)明書進(jìn)行,以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照,分別用已知結(jié)腸和肝臟陽(yáng)性切片作為KISS-1和MMP-9的陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果判定:KISS-1和MMP-9陽(yáng)性信號(hào)定位于胞質(zhì),呈棕黃色顆粒,顯色強(qiáng)時(shí)為棕褐色。計(jì)數(shù)不少于 5個(gè)高倍視野或1 000個(gè)細(xì)胞,計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分率。參照文獻(xiàn)[2-3],根據(jù)染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞百分率綜合計(jì)分。陽(yáng)性細(xì)胞百分率＜10%為 1分,10%～為 2分,＞50%為3分;按染色強(qiáng)度:陰性為0分,淡黃色染色為 1分,中度黃色染色為 2分,棕褐色染色為 3分。以 2者之積計(jì)總分,總分 ＜3分為陰性,≥3分為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 12.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。2種組織KISS-1和MMP-9蛋白陽(yáng)性率的比較采用配對(duì) χ2檢驗(yàn),不同病理特征的胃癌組織中KISS-1和MMP-9蛋白陽(yáng)性率的比較采用χ2檢驗(yàn),對(duì)胃癌組織中KISS-1和MMP-9蛋白表達(dá)的關(guān)系行Pearson關(guān)聯(lián)性分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 2種組織中KISS-1及MMP-9蛋白的表達(dá)正常胃黏膜和胃癌組織中KISS-1及MMP-9蛋白的表達(dá)見圖1和表1、2。可知,胃癌組織中KISS-1蛋白的表達(dá)低于正常胃黏膜,MMP-9蛋白的表達(dá)高于正常胃黏膜。不同病理特征的胃癌組織中KISS-1及MMP-9蛋白的表達(dá)見表3。

圖1 正常胃黏膜(A)及胃癌組織(B)中K ISS-1和MM P-9蛋白的表達(dá)(SP,×400)1:KISS-1蛋白;2:MMP-9蛋白。

表1 正常胃黏膜及胃癌組織中K ISS-1蛋白的表達(dá) 例

表2 正常胃黏膜及胃癌組織中MM P-9蛋白的表達(dá)

表3 不同病理特征的胃癌組織中K ISS-1和MMP-9蛋白的表達(dá)

2.2 胃癌組織中KISS-1蛋白與MMP-9蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性分析 見表4。

表4 K ISS-1蛋白與MM P-9蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性分析 例

3 討論

KISS-1基因是Lee等于1996年發(fā)現(xiàn)的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因,與多種腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),部分學(xué)者[4]認(rèn)為 KISS-1同時(shí)參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。Kostadima等[5]從272例乳癌組織中提取KISS-1 mRNA,結(jié)果顯示在有轉(zhuǎn)移的乳癌組織中KISS-1表達(dá)沉默。該研究結(jié)果顯示,KISS-1蛋白在胃癌組織中的表達(dá)低于正常胃黏膜;在浸潤(rùn)淺肌層、深肌層和外膜層胃癌組織中,KISS-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率呈降低趨勢(shì);有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組降低,表明KISS-1參與胃癌的發(fā)生發(fā)展及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程,可能是KISS-1通過(guò)信號(hào)傳導(dǎo)通路促使細(xì)胞內(nèi)第二信使 1,2-二酰甘油和 1,4,5-三磷酸肌醇產(chǎn)生增多,增加細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平,進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的增生,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化和凋亡,同時(shí)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞過(guò)度黏附而使其移動(dòng)能力受抑[6]。

MMP-9是MMPs家族中重要的一員,被激活之后形成Ⅳ型膠原酶,降解、破壞靠近腫瘤表面的細(xì)胞外基質(zhì),從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向周圍組織浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[7-8]。該研究結(jié)果顯示,MMP-9蛋白在胃癌組織中的表達(dá)高于正常胃黏膜;在浸潤(rùn)淺肌層、深肌層和外膜層癌組織中MMP-9蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率呈增高趨勢(shì);有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中其陽(yáng)性表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,推測(cè)MMP-9蛋白表達(dá)升高可導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)降解增加,進(jìn)而促使胃癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的發(fā)生。

此外,該研究結(jié)果還顯示,胃癌組織中KISS-1與MMP-9蛋白的表達(dá)呈負(fù)關(guān)聯(lián),可能是KISS-1通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)抑制性蛋白IκBα降解胞質(zhì)中p65/ p50 NF-κB蛋白,使其與MMP-9啟動(dòng)子的結(jié)合降低,進(jìn)而減少 MMP-9的合成,導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)降解減少、腫瘤細(xì)胞黏附能力增強(qiáng)及移行能力下降,進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的機(jī)動(dòng)性、趨化性和侵襲性[9]。

綜上所述,KISS-1和MMP-9的表達(dá)和胃癌的發(fā)生發(fā)展及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān),聯(lián)合檢測(cè) 2者有望用于胃癌的早期診斷和預(yù)后判斷。

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