史惠蓉,衛(wèi) 玲,張瑞濤

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科鄭州 450052 2)甘肅省腫瘤醫(yī)院婦瘤科蘭州 730050

△女,1956年4月生,博士,教授,研究方向:婦科腫瘤,E-mail:huirongshi@yahoo.com.cn

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)惡性腫瘤,目前卵巢癌發(fā)生發(fā)展的分子生物學(xué)機(jī)制仍不清楚。近年來(lái)圍繞卵巢腫瘤標(biāo)志物的研究[1]表明,由泛素(ubiquitin,Ub)參與組成的泛素-蛋白酶體復(fù)合通路(ubiquitin-proteasome pathway,UPP)不僅對(duì)異常蛋白質(zhì)有著降解作用,而且能調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程,與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。細(xì)胞周期調(diào)控因子細(xì)胞周期蛋白B1(Cyclin B1)的異常擴(kuò)增與過(guò)表達(dá)與許多惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展及其預(yù)后關(guān)系密切[2-3]。作者應(yīng)用免疫組織化學(xué) SP法檢測(cè)卵巢腫瘤組織中Ub和Cyclin B1的表達(dá)情況,初步探討其與上皮性卵巢癌的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2004年至 2007年婦產(chǎn)科手術(shù)切除標(biāo)本 90例,患者年齡30～72歲,中位年齡 51歲。所有標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)檢查確診,術(shù)前均未行放化療及其他治療。其中上皮性卵巢癌 50例(漿液性囊腺癌36例,黏液性囊腺癌9例,子宮內(nèi)膜樣癌5例);FIGO分期:I期9例,Ⅱ期10例,Ⅲ期28例,Ⅳ期3例;分化程度:G1級(jí)15例,G2級(jí) 14例,G3級(jí) 21例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 23例,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 27例。卵巢良性腫瘤組織 20例(漿液性囊腺瘤 16例,黏液性囊腺瘤 4例)。正常卵巢組織 20例,為同期因子宮肌瘤行子宮切除術(shù)同時(shí)切除的卵巢組織標(biāo)本,術(shù)后病理學(xué)檢查示卵巢組織無(wú)病變。

1.2 主要試劑 Ub兔抗人單克隆抗體購(gòu)自福建邁新生物技術(shù)有限公司,Cyclin B1鼠抗人單克隆抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,均為即用型工作液。通用型SP免疫組織化學(xué)試劑盒及DAB顯色試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 3種組織中Ub與Cyclin B1蛋白檢測(cè)方法蠟塊連續(xù)切片,厚 3～5μm,采用 SP免疫組織化學(xué)法檢測(cè),嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。以PBS代替一抗為陰性對(duì)照,以乳癌組織石蠟切片為陽(yáng)性對(duì)照。Ub陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核,呈棕黃色或淡棕黃色;Cyclin B1主要定位于細(xì)胞質(zhì),呈棕黃色或淡黃色。結(jié)果判定參考文獻(xiàn)[4]。①按染色強(qiáng)度計(jì)分:無(wú)著色為 0分,淡棕黃色為 1分,棕黃色為 2分。②按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分(用 400倍顯微鏡觀察,取 10個(gè)視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù) 100個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞,計(jì)算其平均值):陽(yáng)性細(xì)胞 ＜5%為 0分, 5%～為 1分,25%～為 2分,50%～為 3分,75%～為4分。以上2項(xiàng)評(píng)分相加,0分為(-),1～6分為(+)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。不同卵巢組織中Ub及Cyclin B1陽(yáng)性表達(dá)率的比較采用Fisher確切概率法及χ2檢驗(yàn),上皮性卵巢癌組織中Ub和Cyclin B1表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系采用 χ2檢驗(yàn)及校正 χ2檢驗(yàn),上皮性卵巢癌組織中Ub和Cyclin B1表達(dá)的關(guān)聯(lián)性分析采用Pearson列聯(lián)系數(shù)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同卵巢組織中Ub及Cyclin B1蛋白的表達(dá)

結(jié)果見(jiàn)圖1、表1。

圖1 不同卵巢組織中Ub(A)及Cyclin B1(B)蛋白的表達(dá)(SP,×400)

表1 不同卵巢組織中Ub和Cyclin B 1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較 例(%)

2.2 上皮性卵巢癌組織中Ub和Cyclin B1蛋白的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 結(jié)果見(jiàn)表 2?？芍掀ば月殉舶┙M織中Ub、Cyclin B1的表達(dá)與FIGO分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

表2 上皮性卵巢癌組織中Ub和Cyclin B1蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 例(%)

2.3 上皮性卵巢癌組織中Ub和Cyclin B1蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性分析 結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 上皮性卵巢癌組織中Ub和Cyclin B 1蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性 例

3 討論

Ub參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程、細(xì)胞增生與分化、蛋白質(zhì)降解、DNA修復(fù)以及信號(hào)傳導(dǎo)等多種細(xì)胞生理過(guò)程[5-6]。Cyclin B1是細(xì)胞周期G2/M期限制點(diǎn)的主要調(diào)控元件,與p34cdc2形成復(fù)合物,稱(chēng)為有絲分裂促進(jìn)因子。Bazzaro等[7]研究表明,與正常卵巢組織相比,卵巢癌組織中存在Ub蛋白的蓄積,在低分化的卵巢癌組織中Ub蛋白水平升高更加明顯。Takeno等[8]認(rèn)為,Cyclin B1的過(guò)表達(dá)與腫瘤的發(fā)生和預(yù)后有關(guān),同時(shí)與腫瘤的分期、大小和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

該研究結(jié)果顯示,上皮性卵巢癌組織中存在 Ub和Cyclin B1的過(guò)表達(dá),提示Ub和Cyclin B1與卵巢癌關(guān)系密切。FIGO分期較晚、組織分化較差和伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的上皮性卵巢癌組織中Ub和Cyclin B1表達(dá)較高,提示Ub和Cyclin B1與卵巢癌的惡性進(jìn)展和轉(zhuǎn)移有關(guān),可作為評(píng)估上皮性卵巢癌的惡性程度及預(yù)后的指標(biāo)。此外,該研究結(jié)果還顯示上皮性卵巢癌組織中Ub與Cyclin B1蛋白的表達(dá)有關(guān)聯(lián),提示 2者可能協(xié)同參與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)異常,共同促進(jìn)卵巢癌的惡性進(jìn)展和轉(zhuǎn)移。

綜上所述,Ub和Cyclin B1與卵巢癌的關(guān)系密切,可能協(xié)同參與卵巢癌的惡性進(jìn)展和轉(zhuǎn)移,在此基礎(chǔ)上深入研究 2者與卵巢癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,有助于進(jìn)一步了解卵巢癌發(fā)病的分子機(jī)制,指導(dǎo)臨床的診斷、治療和預(yù)后判斷。

[1]Ciechanover A.Intracellular protein degradation from a vague idea through the lysosome and the ubiquitin-proteasome system and on to human diseases and drug targeting [J].Ann N Y Acad Sci,2006,1 116:1

[2]Viallard JF,Lacombe F,Dupouy M,et al.Different expression profiles of human cyclin B1 in normal PHA-stimulated T lymphocytes and leukemic T cells[J].Cytometry,2000, 39(2):117

[3]Nozoe T,Honda M,Inutsuka S,etal.Significance of immunohistochemical expression of manganese superoxide dismutase as amarker ofmalignantpotential in colorectal carcinoma[J].Oncol Rep,2003,10(1):39

[4]Mani A,Gelmann EP.The ubiquitin-proteasome pathway and its role in cancer[J].JClin Oncol,2005,23(21):4 776

[5]Sheherbik N,Haines DS.Ub on the move[J].JCell Biochem,2004,93(1):11

[6]Shigemasa K,Gu L,O'Brien TJ,et al.Skp 2overexpression is a prognostic factor in patients with ovarian adenocarcinoma[J].Clin Cancer Res,2003,9(5):1 756

[7]Bazzaro M,Lee MK,Zoso A,etal.Ubiquitin-proteasome system stress sensitizes ovarian cancer to proteasome inhibitorinduced apop tosis[J].Cancer Res,2006,66(7):3 754

[8]Takeno S,Noguchi T,Kikuchi R,et al.Prognostic value of cyclin B1 in patientswith esophageal squamous cell carcinoma[J].Cancer,2002,94(11):2 874