張 英, 石雪萍, 姜洪芳, 張衛(wèi)明, 金敬宏

(1.南京野生植物綜合利用研究院,江蘇南京210042;2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院,江蘇南京210095)

蔥(A llium schoenoprasumL.)屬于石蒜科蔥屬[1]。中國是世界上最大的蔥生產(chǎn)和出口國,年生產(chǎn)面積為650 000 hm2,在中國蔬菜產(chǎn)業(yè)中占重要地位[2]。蔥白為植物蔥的鱗莖,葉用蔥主要作為凍干蔬菜與調(diào)料,方便食品和休閑食品帶動了蔥產(chǎn)業(yè)的長足發(fā)展,同時其加工副產(chǎn)物蔥白大量增加,不僅造成資源浪費(fèi)且污染環(huán)境,因此綜合利用蔥白具有深遠(yuǎn)意義。傳統(tǒng)上蔥白被中醫(yī)藥所利用,其中含有揮發(fā)油、維生素和多糖類,干蔥白中多糖含量為10%～20%,因此蔥白多糖的開發(fā)利用極具可行性。而植物多糖的生理功能較廣泛,據(jù)資料報道多糖具有調(diào)節(jié)免疫、降血糖、降血脂、抗衰老等作用[3-6]。隨著社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人民生活水平的提高以及個人保健意識的加強(qiáng),功能保健食品越來越受消費(fèi)者關(guān)注[7]。作者以高脂飼料喂養(yǎng)的大鼠和酒精灌胃的小鼠為實(shí)驗(yàn)材料,形成高脂模型組和酒精肝模型組,進(jìn)一步研究蔥白多糖對血脂水平的影響以及對小鼠酒精肝的預(yù)防作用,為開發(fā)利用蔥白多糖提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

昆明雄性SD大、小鼠:由南京江寧青龍動物繁殖場提供;陽性對照物:血脂康膠囊,北大維信生物科技有限公司產(chǎn)品;水飛薊素膠囊:德國馬博士大藥廠生產(chǎn);蔥白多糖:作者所在實(shí)驗(yàn)室自制;高脂飼料:按衛(wèi)生部衛(wèi)生監(jiān)督司頒布的《保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗(yàn)方法》中的方法配制,基礎(chǔ)飼料78.8 g/dL,膽固醇1 g/dL,豬油10 g/dL、膽鹽0.2 g/dL、蛋黃粉10 g/dL;基礎(chǔ)飼料:按衛(wèi)生部衛(wèi)生監(jiān)督司頒布的《保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗(yàn)方法》中的方法配制。

酶法測定血清膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)血液生化指標(biāo)的試劑盒,南京建成生物工程研究所提供;酶法測定肝臟MDA、血清 GSH、TG的試劑盒:南京建成生物工程研究所提供。

電子天平SL-1001型:上海民橋電子儀器廠制造;分光光度計722型:上海第三分析儀器廠制造。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 蔥白粗多糖的制備 將蔥白洗凈、曬干后粉碎,過20目篩后,在蔥白多糖熱水浸提的最佳工藝條件下提取蔥白多糖,濃縮上清提取液后,加入4倍95%乙醇沉淀,靜置過夜后將沉淀得到的多糖用真空冷凍干燥法干燥,即得粗蔥白多糖[8-9]。

1.2.2 蔥白粗多糖中糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定 采用苯酚-

硫酸法測定蔥白粗多糖中多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

1.2.3 蔥白多糖的降血脂功能研究

1)實(shí)驗(yàn)動物分組:將健康成年昆明雄性SD大鼠70只,用基礎(chǔ)飼料平衡喂養(yǎng)8 d后,篩選出體重為160～220 g的60只進(jìn)行隨機(jī)分為6組,每組10只。設(shè)高脂對照組、空白對照組、陽性對照組、蔥白多糖低劑量組、中劑量組、高劑量組。

2)高脂血癥大鼠造型及給藥:大鼠通過喂食高脂飼料形成高血脂癥動物模型。從實(shí)驗(yàn)開始到結(jié)束,高脂對照組、空白對照組用蒸餾水灌胃;蔥白多糖低劑量組、中劑量組、高劑量組的生藥劑量分別為 100、200、400 mg/kg(以體重計),每日一次 ;陽性對照組用血脂康膠囊內(nèi)容物灌胃,劑量為 100 mg/kg(以體重計),每日一次,每組動物單籠飼養(yǎng),自由攝取高脂飼料。連續(xù)灌胃30 d后,取尾血,測定血清膽固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)和血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的含量。

3)檢測方法:血清 TC、TG、HDL-C采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行酶法測定,批號為20090228。

4)數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理方法:采用SAS統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析,用Dunnett’s T檢驗(yàn)進(jìn)行各試驗(yàn)組與對照組的比較。

1.2.4 蔥白多糖對酒精肝預(yù)防作用研究

1)實(shí)驗(yàn)動物分組:將健康成年昆明雄性SD小鼠70只,用基礎(chǔ)飼料平衡喂養(yǎng)6 d后,篩選出體重為16～22 g的60只進(jìn)行隨機(jī)分為6組,每組 10只。設(shè)模型組、空白對照組、陽性對照組、蔥白多糖低劑量組、中劑量組、高劑量組共6組。

2)給藥方法:從實(shí)驗(yàn)開始到結(jié)束,模型組、空白對照組用蒸餾水灌胃;蔥白多糖低劑量組、中劑量組、高劑量組的生藥劑量分別為100、200、400 mg/kg(以體重計),每日一次;陽性對照組用水飛薊素膠囊內(nèi)容物灌胃,劑量為46.7 mg/kg(以體重計),每日一次,每組動物單籠飼養(yǎng),自由攝取飼料。連續(xù)灌胃30 d后,樣品組及模型組均0.12 mL/10 g體重灌胃50%酒精,空白組用蒸餾水灌胃,各組動物禁食及水16 h后處死,解剖取肝臟,稱重并測定肝臟丙二醛(MDA)、血清甘油三酯(TG)和谷胱甘肽(GSH)的含量。

3)檢測方法:肝臟 MDA、GSH、TG采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行酶法測定,批號為20090423。

4)數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理方法:采用SAS統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析,用Dunnett’s T檢驗(yàn)進(jìn)行各試驗(yàn)組與對照組的比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 蔥白粗多糖中糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定

采用苯酚-硫酸法,測得蔥白粗多糖中糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為63.5%。

2.2 蔥白多糖對大鼠降血脂功能的研究

2.2.1 對照組和模型組給藥前各指標(biāo)測定 正常對照組和各模型組動物在給藥前各組血脂及體重測定值,見表1。

表1 給藥前各組動物血脂及體重(x±s,n=8)Tab.1 Blood lipid and weight of each group before administration(x±s,n=8)

由表1可以看出大鼠通過喂食16 d的高脂飼料,已經(jīng)成功地形成了高血脂癥動物模型。大鼠對高脂飼料相當(dāng)敏感,并且絕大多數(shù)動物的血脂升高幅度也比較接近。其中也有個別動物的血脂水平響應(yīng)遲緩的,在本試驗(yàn)中按規(guī)則予以剔除。

2.2.2 各實(shí)驗(yàn)組給藥后各指標(biāo)測定 給藥30 d后各組血脂及體重測定值,結(jié)果見表2。

表2 給藥后各組動物血脂及體重(x±s)Tab.2 Blood lipid and weight of each group after administration(x±s)

由表2可見,大鼠喂食蔥白多糖高劑量組30 d后,與高脂模型組比較甘油三酯水平降低顯著(P<0.05)。蔥白多糖高劑量組降低膽固醇作用稍好,與中、低劑量組沒有顯著性差異。蔥白多糖3個劑量組均對高密度脂蛋白升高顯著(P<0.05),但劑量間沒有顯著性差異。3個蔥白樣品組的的 HDLC指標(biāo)值高于正常對照組,但 TG和 TC指標(biāo)值均高于正常對照組。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蔥白多糖對大鼠有一定降血脂功能,且降血脂效果優(yōu)于血脂康。

2.3 蔥白多糖對小鼠酒精肝預(yù)防作用的研究

給藥30 d后各組小鼠肝臟MDA、血清 TG和GSH值及體重測定值,見表3。

由表3可見,小鼠喂食蔥白多糖溶液高劑量組30 d后,與酒精模型組比較甘油三酯水平降低顯著(P<0.05);蔥白多糖3個劑量組對丙二醛均降低顯著(P<0.05),但3個劑量組之間沒有顯著性差異。蔥白多糖高、中、低劑量組與酒精模型組比較均有升高谷胱甘肽的作用,但只有高劑量組有顯著性差異(P<0.05)。3個蔥白樣品對照組的 TG和MDA指標(biāo)值均高于正常對照組,GSH指標(biāo)值基本沒變化。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,蔥白多糖對小鼠具有一定的酒精肝預(yù)防作用,但效果不如水飛薊素膠囊明顯。

表3 給藥后各組動物血脂及體重(x±s)Tab.3 Blood lipid and weight of each group after administration(x±s)

3 結(jié) 語

1)高脂血癥主要是指血清膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)高于正常值上限的脂代謝障礙病癥[10]。根據(jù)損傷反應(yīng)學(xué)說,動脈粥樣硬化首先由高血脂使動脈的內(nèi)膜受到損傷引起,動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展與血清 TC、TG水平有關(guān)。高密度脂蛋白(HDL)被認(rèn)為是一種抗動脈粥樣硬化的脂蛋白,其作用機(jī)制是充當(dāng)逆向轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇的載體,在限制動脈膽固醇的沉積和清除膽固醇上起著重要作用,大量流行病學(xué)調(diào)查證明,血液中 HDL-C水平與冠心病發(fā)病率成負(fù)相關(guān),冠心病患者中 HDL-C低于正常下限值者約占30%～50%[11]。本研究表明,蔥白多糖對降低大鼠血清 TG作用明顯,并能顯著提高 HDL-C的含量,因此,蔥白多糖對預(yù)防動脈粥樣硬化和冠心病的發(fā)生有一定意義,為今后的開發(fā)利用蔥白多糖提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

2)酒精對肝損傷的毒性作用是通過脂質(zhì)過氧化作用進(jìn)行的。當(dāng)機(jī)體攝入酒精時,體內(nèi)肝組織細(xì)胞中的自由基代謝平衡就會失調(diào),對自由基的防御能力也會下降,過量自由基可使生物膜脂質(zhì)雙分子層中的不飽和脂肪酸過氧化,而形成脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物,從而使膜結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生障礙。過氧化脂質(zhì)的代謝產(chǎn)物MDA,進(jìn)一步與磷脂酰乙醇胺和蛋白質(zhì)交聯(lián),生成無活性脂褐質(zhì),沉積于組織細(xì)胞,破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu),最后導(dǎo)致細(xì)胞無法維持正常代謝而死亡[12]。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明,與模型組比較,蔥白多糖各劑量組MDA含量均降低顯著。另外,谷胱甘肽是人體內(nèi)一種重要的抗氧化劑,能清除體內(nèi)的自由基,清潔凈化體內(nèi)環(huán)境污染,增進(jìn)人的身心健康。隨著機(jī)體對酒精的攝入,體內(nèi)自由基水平的不斷增多,谷胱甘肽的活性會降低[13]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與模型組比較,蔥白多糖高劑量組的小鼠 GSH含量增加顯著,說明蔥白多糖對小鼠的酒精肝有一定的預(yù)防保護(hù)作用,雖然不及陽性對照物水飛薊素膠囊明顯,但是由于蔥白多糖是一種植物來源的多糖,必將為天然保健品行業(yè)注入新的元素。

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