吳強(qiáng)強(qiáng)，李國(guó)富，吳 江，高啟平

（1.上海海洋大學(xué)，上海 201306；2.通威股份有限公司，四川 成都 610081）

牛至油是從天然植物牛至（Origanum vulgareL.）中提取的精油，它具有獨(dú)特的抗菌機(jī)理和抗氧化性能，同時(shí)其活性成分的獨(dú)特香味能刺激消化道感受器，激活消化道酶的活性，促進(jìn)消化，提高飼料轉(zhuǎn)化率，而且無(wú)任何藥物殘留，不產(chǎn)生耐藥性[1]。牛至油預(yù)混劑是我國(guó)農(nóng)業(yè)部《飼料藥物添加劑使用規(guī)范》（農(nóng)牧發(fā) [2001]20號(hào)）批準(zhǔn)可在飼料中使用的一種飼料添加劑。目前國(guó)外對(duì)牛至油的研究主要集中在其對(duì)改善養(yǎng)殖產(chǎn)品抗氧化能力和延長(zhǎng)保存方面[2-4]，國(guó)內(nèi)對(duì)牛至油的研究主要在畜禽上[5-8]，而在水產(chǎn)上，國(guó)內(nèi)尚無(wú)研究文章發(fā)表。

本試驗(yàn)選用我國(guó)水產(chǎn)業(yè)廣泛養(yǎng)殖的建鯉為試驗(yàn)對(duì)象，在建鯉日糧中添加牛至油（有效含量5%），通過測(cè)定建鯉的生長(zhǎng)性能和血清抗氧化指標(biāo)，以期為今后在水產(chǎn)飼料中運(yùn)用牛至油提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)魚為當(dāng)年繁殖和培育的建鯉魚種（Cyprinus Carpio var.jian），購(gòu)自通威德陽(yáng)試驗(yàn)場(chǎng)，購(gòu)回后暫養(yǎng)于室外水泥池中投喂通威101魚種料暫養(yǎng)馴化15 d。牛至油由廣州美瑞康公司提供，有效成分含量5%。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)共設(shè)4個(gè)處理，每個(gè)處理3次重復(fù)，對(duì)照組參考NRC（1993）鯉魚營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)計(jì)基礎(chǔ)料作為對(duì)照組，3個(gè)試驗(yàn)組分別在此基礎(chǔ)上添加0.025%、0.05%、0.1%牛至油?；A(chǔ)飼料配方如表1所示；營(yíng)養(yǎng)成分：總能12 310 kJ/kg、粗蛋白34.0%、粗脂肪4.2%、粗纖維6.5%、粗灰分8.1%、有效磷0.75%。飼料原料來自四川通威公司，粉碎100%過40目篩，制粒在四川通威生產(chǎn)線上進(jìn)行，制成直徑2.5mm的硬顆粒飼料。

表1 基礎(chǔ)飼料配方及主要營(yíng)養(yǎng)組成

1.2.2 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)在成都通威水產(chǎn)科技園進(jìn)行。試驗(yàn)選用大小均勻、健康的建鯉魚種1 560尾，體重16.15 g±0.03 g，隨機(jī)放入12個(gè)室外水泥池中（3.5m×3.5m×1.2m）每池放養(yǎng)130尾。試驗(yàn)時(shí)間為2009年6月27日～2009年9月27日為期90 d，期間翻池一次以確定第2階段投飼量，日投飼率為魚體重的2%～6%，每天定時(shí)、定點(diǎn)投喂5次，根據(jù)試驗(yàn)魚攝食情況及天氣狀況適當(dāng)調(diào)節(jié)投喂量和次數(shù)。每天8:30和16:30測(cè)定各池溶氧和水溫，每5 d換水1次，每次換水1/3～1/2。試驗(yàn)期間水溫24～30℃，溶氧高于4mg/L，pH 值7.0～8.5，氨氮低于0.04mg/L。

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1 生產(chǎn)性能指標(biāo) 試驗(yàn)前、后對(duì)魚稱重，記錄投飼量，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)計(jì)算增重率、飼料系數(shù)、特定生長(zhǎng)率、蛋白質(zhì)效率。應(yīng)用公式如下：

1.3.2 血清制備 試驗(yàn)結(jié)束后，停飼24 h，每池隨機(jī)取魚5尾，尾靜脈采血，4℃冰箱過夜，3 000 r/min 4℃離心10min分離獲得血清，血清置于－20℃保存待測(cè)。

1.3.3 測(cè)定方法 抗氧化指標(biāo)均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測(cè)定。總抗氧化能力（T-AOC）測(cè)定采用還原三價(jià)鐵，與菲啉類物質(zhì)形成絡(luò)合物比色法，T-AOC活力定義：每分鐘每毫升樣品使反應(yīng)體系的吸光度值增加0.01為一個(gè)總抗氧化能力單位。采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定超氧物歧化酶（SOD）活力，SOD的活力定義為每毫升樣品SOD抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD量為一個(gè)SOD活力單位（U）。采用TBA法測(cè)定丙二醛（MDA）含量，丙二醛（MDA）含量測(cè)定采用硫代巴比妥酸比色法（單位:nmol/mL）。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS17.0對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，所有指標(biāo)采用單因子方差分析（ANOVA）進(jìn)行分析，用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。數(shù)值以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 牛至油對(duì)建鯉魚種生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，0.025%、0.05%和0.1%添加組分別較對(duì)照組增重率提高了6.1%、7.4%、3.7%；試驗(yàn)組較對(duì)照組均降低了飼料系數(shù)，其中0.025%、0.05%組較對(duì)照組降低了 5.0%、5.1%（P<0.05），0.1%組差與對(duì)照組相比差異不顯著；試驗(yàn)組較對(duì)照組顯著提高了蛋白質(zhì)效率，其中以0.05%組最為顯著，比對(duì)照組提高了6.8%。

表2 牛至油對(duì)建鯉生長(zhǎng)性能的影響

2.2 牛至油對(duì)建鯉血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表3可知：試驗(yàn)組較對(duì)照組顯著提高了TAOC（P<0.05），但試驗(yàn)組間無(wú)顯著差異，試驗(yàn)組較對(duì)照組提高分別提高35%、35%和38%，0.01%牛至油添加組提高最為顯著；與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組均顯著提高了血清 SOD （P<0.05），0.025%、0.05%0.1%比對(duì)照組組分別提高17.2%、17.0%和18.5%；添加0.025%、0.05%和0.1%牛至油試驗(yàn)組顯著降低了血清中MDA（p<0.05），其中0.025%組降低最顯著，達(dá)33%。

表3 牛至油對(duì)建鯉血清抗氧化能力指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 牛至油提高建鯉生產(chǎn)性能

試驗(yàn)結(jié)果表明，在基礎(chǔ)料中添加0.025%、0.05%牛至油顯著提高了建鯉魚種增重率，蛋白效率和特定生長(zhǎng)率，降低飼料系數(shù)，這一結(jié)果與Dr Claire Yew Yoke Ching[9]在南美白對(duì)蝦中和泰國(guó)Kasetsart大學(xué)的Orapint Jintasataporn博士在雜交鲇上的試驗(yàn)結(jié)果一致。一般認(rèn)為牛至油抗菌活性通過對(duì)細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)蛋白的變性和凝固來實(shí)現(xiàn)的，通過改變H+和K+的滲透性使細(xì)胞胞質(zhì)膜上的酚相互作用，離子成分的分散導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)關(guān)鍵過程受阻，從而使細(xì)胞成分滲漏，水分失去平衡，最終使細(xì)菌發(fā)生死亡[10]，良好的抗菌性能能抑制動(dòng)物腸道有害菌的生長(zhǎng)，促進(jìn)維持腸道菌落平衡，促進(jìn)腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，提高飼料利用率。胡倡華等[11]研究表明牛至油能夠防止和抑制動(dòng)物消化道系統(tǒng)病原微生物的生長(zhǎng)繁殖，這也有利于增強(qiáng)消化酶的活性，從而提高對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和利用，以促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)。雷必勇[12]在仔豬日糧中添加牛至油結(jié)果表明：牛至油可提高十二指腸和空腸的絨毛長(zhǎng)度，表明牛至油促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)可能是由于牛至油改善了腸粘膜的形態(tài)結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)了腸上皮細(xì)胞的吸收能力，改善動(dòng)物生產(chǎn)性能。

3.2 牛至油提高建鯉血清抗氧化能力

T-AOC是機(jī)體內(nèi)抗氧化能力的總體體現(xiàn)，是酶促（SOD、CAT、GST、GSH-Px等）和非酶促（維生素、氨基酸和金屬蛋白等）兩方面因子抗氧化能力的總合。SOD對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，它能清除超氧陰離子自由基（O2-），保護(hù)細(xì)胞免受損傷[13]；脂質(zhì)過氧化是指活性氧、自由基攻擊生物膜中多聚不飽和脂肪酸（PUFA）而引起的一系列氧化過程，此過程可產(chǎn)生一系列脂質(zhì)過氧化物（LPO)，從而對(duì)生物體造成一種氧化脅迫狀態(tài)，當(dāng)這種氧化脅迫超出了生物體的抗氧化防御系統(tǒng)的保護(hù)能力的時(shí)候，就會(huì)對(duì)生物體造成毒害[14]。而丙二醛（MDA）是自由基引發(fā)的脂質(zhì)過氧化作用的最終分解產(chǎn)物，MDA含量的多少可以間接反映活性氧自由基含量的多少以及組織細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的強(qiáng)度或速率。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加牛至油后，鯉血清T-AOC和SOD顯著提高，MDA含量顯著地降低，表明牛至油可以增強(qiáng)建鯉血清抗氧化能力，減輕魚體的脂質(zhì)過氧化作用。其可能機(jī)制是牛至油抗氧化作用主要是其酚羥基類化合物。它們既可抑制自由基的產(chǎn)生，也可直接清除自由基，還可以增強(qiáng)機(jī)體本身抗氧化系統(tǒng)的功能，從多個(gè)環(huán)節(jié)阻斷自由基的損傷作用。

[1] 伍 睿，葉 其，陳能煜，等.牛至化學(xué)成分的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2001，12（6）：13-16.

[2] Botsoglou N A,Florou-PaneriP,ChristakiE,et al.Performance of rabbits and oxidative stability of muscle tissues as affected by dietary supplementation with oregano essential oil[J].Arch Anim Nutr,2004,58(3):209-218.

[3] BurtS A,Reinders R D.Antibacterial activity of selected plant essential oils against escherichia coli O157:H7[J].Lett Appl Microbiol,2003,36(3):162-167.

[4] Botsoglou N A,Govaris A,Botsoglou E N,et al.Antioxidant activity of dietary oregano essential oil and alpha-tocopheryl acetate supplementation in long-term frozen stored Turkey Meat[J].Agric Food Chem,2003,51(10):29-30

[5] 田 輝，李 萍，賴東美.牛至揮發(fā)油的GC-MS分析[J].中藥材，2006，29（9）：920-921.

[6] 林清華，張楚富，劉眾文.牛至揮發(fā)油對(duì)小鼠特異性免疫功能的影響[J].應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào).1997，3（4）：89-91.

[7]邱楚武.牛至油在仔豬飼料中的應(yīng)用試驗(yàn)[J].糧食與飼料工業(yè).2003，（7）：32.

[8] 杜云良.牛至提取物防治雞大腸桿菌病的研究 [J].中國(guó)家禽，2000，22（6）：8-9.

[9] Dr Claire Yew Yoke Ching.Oregano essential oil improves production and disease contral[J].Feed&feed Ingredients，2008，25.

[10]何蘭花.新型植物抗生素一牛至油[J].畜牧與獸醫(yī)，2004，（5）：24-25.

[11]胡倡華，馮 杰.一新型非藥物生長(zhǎng)促進(jìn)劑一牛至油[J].飼料廣角，2000，（18）：2.

[12]雷必勇.牛至油、納米氧化鋅及高劑量氧化鋅在仔豬日糧中的應(yīng)用效果比較研究[D].雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004.

[13]Mourente G,Bell JG,Tocher D R.Does dietary tocopherol level affect fatty acidmetabolism in fish [J].Fish Physiol Biochem,2007,33:269-280.

[14]Ossi R,Tapani L,Palvi P,et al.Glutathione-dependent defence system and monooxygenase enzyme activities inArcticcharr Salvelinusalpinus（L.）exposed to ozone[J].Aquaculture,2000,185:219-233.