葛志華 李俊玫 高福祿 王春艷

衰老模型大鼠下頜下腺組織結(jié)構(gòu)的改變

葛志華 李俊玫 高福祿 王春艷

目的 觀察衰老大鼠下頜下腺組織結(jié)構(gòu)形態(tài)學改變。方法 D-半乳糖誘導大鼠衰老模型,取下頜下腺制備組織切片。光學顯微鏡下計算腺實質(zhì)、脂肪和纖維間質(zhì)的相對體積比。結(jié)果 正常組腺實質(zhì)相對體積比明顯高于模型組(P＜0.01);模型組脂肪和纖維間質(zhì)含量明顯高于正常組(P＜0.01)。結(jié)論 D-半乳糖模型大鼠下頜下腺腺實質(zhì)成分伴隨衰老逐漸減少而被脂肪和纖維間質(zhì)所替代。

衰老大鼠;下頜下腺;組織結(jié)構(gòu)

下頜下腺為三大唾液腺之一,是具有內(nèi)、外雙重分泌功能的腺體,70%的唾液和近 50種生物活性物質(zhì)由頜下腺分泌,它的功能已遠遠超過一般消化腺的范疇,在內(nèi)環(huán)境自穩(wěn)機制中發(fā)揮其獨特的作用[1]。多年來,人們從各個角度對其進行了深入的研究,但從抗衰老的角度對下頜下腺增齡性改變的研究卻少有報道。本實驗采用 D-半乳糖誘發(fā)亞急性衰老模型,以定量組織學技術(shù),觀察衰老大鼠下頜下腺組織結(jié)構(gòu)的變化與衰老的關(guān)系,為預防衰老性涎腺疾病奠定形態(tài)學的研究基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物的選擇及分組 選用 8周齡清潔級SD雌性大鼠 20只,體重 180～220 g,實驗大鼠購自河北省實驗動物中心,合格證編號：605106,飼養(yǎng)室溫度(22±2)℃,相對濕度 50%～70%,隨機分為正常組和模型組,每組 10只。

1.2 儀器 VT1000S振蕩切片機,德國 LEICA公司;OLYM-PUS光學顯微鏡,日本;ULTRACUTE超薄切片機,奧地利。

1.3 模型的建立及 2組動物的處理方法 正常組大鼠正常喂60 d。模型組大鼠腹腔注射 6%D-半乳糖(300mg?kg-1?d-1),1次 /d,連續(xù) 60 d。

1.4 取材、固定及染色 大鼠經(jīng) 10%水合氯醛(0.3 ml/100mg)腹腔注射麻醉后,開胸,經(jīng)左心室插管入主動脈,0.9%氧化鈉溶液沖凈血液后,用 4%多聚甲醛進行灌注固定(HE染色)、取雙側(cè)下頜下腺,常規(guī)方法制備 HE染色切片。

1.5 定量組織學方法 在光學顯微鏡下觀察 HE染色切片進行定量組織學研究。根據(jù)文獻中介紹的隨機點計數(shù)立體學方法[2,3],用含 100點的目鏡網(wǎng)格,400倍視野下進行計數(shù),分別計算各視野內(nèi)的腺實質(zhì)(包括導管及腺泡)、脂肪和纖維性間質(zhì)(包括血管、神經(jīng)和膠原纖維)所占的點數(shù)。分別計算出每張切片上各種組織成分的點數(shù)在總點數(shù)中所占比例,表示下頜下腺內(nèi)各種成分的相對體積比。

1.6 統(tǒng)計學分析 應(yīng)用 SPSS 11.0統(tǒng)計軟件,計量資料以±s表示,組間比較行兩樣本比較的 t檢驗,P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 HE染色組織學形態(tài)觀察 正常組下頜下腺各級導管及腺泡細胞密集,邊界清晰,無萎縮及塌陷。顆粒曲管(granular convoluted tubule,GCT)、紋狀管管腔較大,管壁上皮排列整齊,其頂部胞質(zhì)呈深紅色,為嗜酸性分泌顆粒。漿液性腺泡較多,細胞質(zhì)著深紫紅色,細胞核橢圓形,位于基部。粘液性腺泡數(shù)量較少,細胞質(zhì)著淺紫蘭色,核為扁圓形,位于細胞基底部(圖1)。模型組下頜下腺與正常組相比有明顯形態(tài)學改變,腺葉、導管及各種腺泡均呈不同程度的萎縮,間隙增寬(圖2)。GCT數(shù)目減少,有的部位失去管腔結(jié)構(gòu),細胞排列不整齊,呈簇狀堆集。腺組織趨于減少,結(jié)締組織明顯增加,可見血管及纖維增多。

2.2 定量組織學結(jié)果 2組腺實質(zhì)相對體積比比較,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。2組纖維間質(zhì)和脂肪體積比比較,差異亦有統(tǒng)計學意義(P＜0.01),模型組明顯高于正常組。伴隨衰老,脂肪和纖維間質(zhì)含量逐漸增多,脂肪和纖維間質(zhì)的平均體積比在正常組分別為(2.4±0.8)%和(15.8±1.7)%,模型組分別上升為(10.8±3.2)%和(29.3±2.5)%。見表 1。

圖1 正常組大鼠下頜下腺(HE×400)

圖2 模型組大鼠下頜下腺(HE×400)

3 討論

下頜下腺為三大唾液腺之一,傳統(tǒng)的觀念認為下頜下腺為外分泌腺,自從 1936年以來人們陸續(xù)在下頜下腺中發(fā)現(xiàn)和提純了神經(jīng)生長因子(NGF)、上皮生長因子(EGF)等近 50種生物活性物質(zhì),其中有些因子完全達到激素的標準。原位雜交技術(shù)的應(yīng)用,使人們發(fā)現(xiàn)在鼠下頜下腺 GCT細胞內(nèi)有 EGFmRNA、NGFmRNA等表達,證明下頜下腺內(nèi)許多生物活性物質(zhì)是由下頜下腺 GCT細胞自身合成分泌的[1],它的功能已遠遠超過一般消化腺的范疇。因此認為下頜下腺是具有外分泌和內(nèi)分泌雙重功能的腺體。

表1 2組大鼠下頜下腺不同組織相對體積比較n=10,%,±s

表1 2組大鼠下頜下腺不同組織相對體積比較n=10,%,±s

組別 纖維間質(zhì) 脂肪 腺實質(zhì)正常組 15.8±1.7 2.4±0.8 81.8±1.6模型組 29.3±2.5 10.8±3.2 59.9±2.4 t值 13.999 8.133 23.754 P值 0.000 0.000 0.000

光鏡下,正常下頜下腺實質(zhì)由分泌部和導管組成,分泌部以漿液性腺泡為主,導管的組成則因不同物種而異,包括人在內(nèi)的大多數(shù)動物其導管包括閏管、紋狀管和小葉間導管;而在嚙齒類(主要是大鼠和小鼠)動物則是由閏管、顆粒曲管、紋狀管和小葉間導管組成[2]。動物一生中腺體的體積未增加,腺實質(zhì)成分相對體積的減少量,實際上表示了腺實質(zhì)成分隨增齡而真正減少的量。這種腺體內(nèi)功能單位的喪失可能與老年人涎腺功能的改變有關(guān)。本研究結(jié)果表明,與正常組相比,模型組腺實質(zhì)的平均體積減少,而腺體內(nèi)脂肪組織含量卻隨衰老而增多(P＜0.01),腺體內(nèi)的纖維間質(zhì)也逐漸增多(P＜0.05)?？梢?下頜下腺實質(zhì)成分隨齡喪失的體積,由于腺體內(nèi)脂肪和纖維間質(zhì)含量的逐漸增加得到了適當?shù)难a充,從而維持了下頜下腺的體積基本不變。這與葛志華等[3,4]的糖尿病時,與正常組比較,下頜下腺組織間質(zhì)增多,細胞縮小,血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)水平提高,C-fos在腺實質(zhì)細胞中分泌減少的結(jié)論是相符合的。

上述研究結(jié)果再次證實下頜下腺隨著年齡的增長,實質(zhì)成分逐漸減少,脂肪和纖維間質(zhì)的量逐漸增加[5,6]。也就是說,功能性的腺實質(zhì)逐漸被脂肪和纖維組織所替代,這也是人類涎腺組織學上增齡性改變的規(guī)律。對于深入理解和研究下頜下腺功能對機體的影響及對衰老病人涎腺功能減退性疾病的預防、治療具有重要意義。

1 于海忠,趙淑敏,葛志華.D-半乳糖衰老大鼠下頜下腺超微結(jié)構(gòu)的改變 .河北醫(yī)藥 ,2009,31：1287-1288.

2 賈雪梅,熊惠平,齊易祥.頜下腺的研究進展.解剖學雜志,2000,23：184-186.

3 葛志華,王春艷,張俊川,等,VEGF在 db/db自發(fā)性糖尿病小鼠下頜下腺的表達.河北醫(yī)學,2001,7：1057-1060.

4 葛志華,高福祿,王春艷,等.C-fos在 db/db自發(fā)性糖尿病小鼠下頜下腺的表達.中國組織化學與細胞化學雜志,2006,15：559-561.

5 Waterhouse JP.Replacement of functional parenchymal cells by fat and connective tissue in human submandibular salivary glands：an agerelated change.JOral Pathol,1973,2：16.

6 Scott J.Ouantitative age changes in the histological structure of human submandibular salivay glands.Arch Oral Biol,1977,22：221.

The changes in organizationa l structure of submandibu lar gland in aging rats induced by D-galactose

GE Zhihua＊,LIJunmei＊,GAO Fulu,et al.＊Office of Science and Reseach,Affiliated Hospital of Chengde Medical College,Hebei,Chengde 067000,China

Ob jective To observe themorphological changes of the organizational structure of submandibular glands of aging rats induced by D-galactose.M ethods D-galactose senescencemodel was used in this research.The submandibu lar glands were made into tissue sections.Under light microscope,the relative tissue ratio of parenchyma,adipose tissue and interstitial fiber of submandibular gland was calculated.Results the relative volume ratio of thegland parenchyma components in normal submandibular glandswas significantly higher than that inmodelgroup,and the ratio of lipid and interstitial fibre in model group was significantly higher than that in normal group.Conclusion The evident alterations of histomorphology occur in submandibu lar gland with aging progress.The gland parenchyma components decrease singnificantly and it is replased by adipose tissue and interstitial fiber.

aging rats;submandibular gland;organizational structure

R 781.7

A

1002-7386(2010)06-0661-02

項目來源：河北省科學技術(shù)研究與發(fā)展計劃項目 (編號：09276102D-7)

067000 河北省承德市,承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院科研處(葛志華、李俊玫);河北師范大學(高福祿);承德醫(yī)學院組胚教研室(王春艷)

王春艷,067000 承德醫(yī)學院組胚教研室;E-mail：ycw 23922@163.com

2010-01-27)