高學(xué)印 薛瑞敏 鄭秀玲 郭影 吉增良

妊娠期高血壓疾病(hypertensive disorder comp licating pregnancy,HDCP)是妊娠期一種嚴(yán)重的并發(fā)癥,國內(nèi)發(fā)病率約為7%～12%[1]。HDCP是圍產(chǎn)期母嬰死亡的重要原因之一。有研究認(rèn)為：子宮螺旋動脈的重鑄不良導(dǎo)致胎盤缺血,釋放某些因子入血引起母體廣泛的內(nèi)皮細(xì)胞損傷和功能紊亂是 HDCP發(fā)病的、中心環(huán)節(jié)[2]。血小板源性生長因子-A(platelet-derived growth factor,PDGF-A)是一種結(jié)締組織源性細(xì)胞的重要促有絲分裂劑,具有強(qiáng)烈的血管收縮作用,能進(jìn)一步誘導(dǎo)血小板聚集、激活,繼而巨噬細(xì)胞移行并活化,導(dǎo)致妊娠患者的胎盤蛻膜螺旋動脈發(fā)生急性粥樣硬化。HDCP患者體內(nèi)釋放過多的白介素-6(B cell differentiation factor-6,IL-6),刺激 PDGF-A產(chǎn)生,使動脈壁對低密度脂蛋白(low density lipop rotein,LDL)反應(yīng)性增高及血管收縮,從而引起血管損傷及血壓升高。LDL對增殖活躍期的血管內(nèi)皮細(xì)胞毒性作用很強(qiáng),促進(jìn)其老化,導(dǎo)致細(xì)胞功能失調(diào)[3]。本研究通過HE染色觀察胎盤組織學(xué)特征并檢測正常晚孕女性與妊娠期高血壓疾病患者胎盤PDGF-A的變化,旨在探討 PDGF-A與妊娠期高血壓疾病發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇 2006年 3月至 2007年 10月在河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院婦產(chǎn)科剖宮產(chǎn)分娩的產(chǎn)婦 59例,其中正常妊娠組 20例,年齡 22～30歲,平均年齡 26歲;孕周 36～41周,平均38周;為同期住院的無妊娠合并癥及并發(fā)癥的正常孕婦,均因胎位、產(chǎn)道異?；蛏鐣蛩氐刃衅蕦m產(chǎn)分娩。輕度子癇前期組21例年齡 22～33歲,平均年齡 28歲;孕周 35～41周,平均 37周;重度子癇前期組 18例,年齡 22～35歲,平均年齡 29歲;孕周 37～40周,平均 37周;無產(chǎn)科其它并發(fā)癥及妊娠合并癥,無高血壓及妊娠期高血壓疾病家族史。按參考文獻(xiàn)[4]診斷及分類。3組孕婦年齡、孕周差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 試劑：兔抗 PDHF-A多克隆抗體、DAB顯色劑等均購自北京奧博森生物技術(shù)有限公司。

1.2.2 胎盤標(biāo)本采集與制備：3組孕婦在剖宮產(chǎn)術(shù)中胎盤娩出后,從胎盤母體面中央(避開明顯纖維化、鈣化區(qū))切取胎盤組織 1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm,充分漂洗,置 10%甲醛溶液中固定 24 h以上,石蠟包埋,連續(xù)切片,厚度 2μm,HE染色觀察胎盤組織學(xué)特征,再進(jìn)行免疫組化染色。PDGF-A工作濃度均為1∶400。

1.2.3 免疫組化判定標(biāo)準(zhǔn)：以細(xì)胞胞漿有棕褐色顆粒沉著為陽性細(xì)胞,計(jì)數(shù)每個(gè)視野所含細(xì)胞數(shù),計(jì)數(shù)其中陽性細(xì)胞數(shù)及著色強(qiáng)度。根據(jù)陽性細(xì)胞所占比例及著色強(qiáng)度綜合制定免疫組化半定量記分標(biāo)準(zhǔn)：①陽性細(xì)胞記分：無陽性細(xì)胞為 0分;＜25%為 1分;25%～50%為 2分;＞50%為 3分。②著色強(qiáng)度記分：細(xì)胞內(nèi)無染色或染色與背景一致為 0分;細(xì)胞漿內(nèi)可見少量淡黃色顆粒,明顯高于背景為 1分;細(xì)胞漿內(nèi)可見較多深棕色顆粒為 2分;細(xì)胞漿內(nèi)可見大量深棕色或褐色顆粒為 3分。兩個(gè)分值相加為最終判定結(jié)果：0～2分(-),3～4分(+),5～6分(++)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用 SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)量資料以±s表示,采用單因素方差分析,等級資料采用秩和檢驗(yàn),P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HE染色觀察胎盤組織學(xué)特征 正常孕足月胎盤絨毛和輕度子癇前期胎盤絨毛中滋養(yǎng)細(xì)胞以合體滋養(yǎng)細(xì)胞為主,細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞比較少見,胎盤蛻膜纖維化不明顯(圖 1、2),而重度子癇前期胎盤絨毛中,細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞明顯增生,滋養(yǎng)細(xì)胞下基底膜增厚,絨毛間質(zhì)纖維蛋白沉積,合體細(xì)胞結(jié)節(jié)增多,合體細(xì)胞出芽,發(fā)生纖維素樣壞死的絨毛增多,絨毛血管增多,絨毛大部分不成熟,胎盤蛻膜間質(zhì)細(xì)胞呈大小不等塊狀、桿狀,蛻膜血管內(nèi)皮細(xì)胞纖維化,蛻膜纖維素性壞死也明顯增多(圖 3)。2.2 胎盤組織中 PDGF-A的定位及表達(dá) PDGF-A表達(dá)主要定位于細(xì)胞漿,陽性細(xì)胞著色呈棕色、褐色,主要分布于胎盤細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞,在蛻膜間質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞也有少量表達(dá)。正常妊娠組 PDGF-A表達(dá)為弱陽性(圖 4、5);輕度子癇前期組PDGF-A表達(dá)為陽性(圖 6、7);重度子癇前期組 PDGF-A表達(dá)為強(qiáng)陽性(圖 8、9)。正常妊娠組PDGF-A表達(dá)水平低于輕度子癇前期組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);輕度子癇前期組和重度子癇前期組中 PDGF-A表達(dá)水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表 1。本研究發(fā)現(xiàn),HDCP患者胎盤蛻膜間質(zhì)細(xì)胞呈大小不等塊狀、桿狀,蛻膜血管內(nèi)皮細(xì)胞纖維化,且在該處組織中 PDGF-A呈陽性表達(dá)。

表 1 3組 PDGF-A不同程度陽性表達(dá)情況比較 例

3 討論

HDCP是妊娠期特有的疾病,妊娠終止后多數(shù)病理變化可以逆轉(zhuǎn),說明胎盤這一器官可能在 HDCP發(fā)病中起到重要的作用。近年來研究表明,重度子癇前期患者在胎盤形成過程中存在著螺旋小動脈血管重鑄異常的現(xiàn)象,其滋養(yǎng)細(xì)胞侵蝕能力下降,侵蝕范圍縮小,浸潤僅達(dá)蛻膜段,子宮螺旋動脈未經(jīng)歷正常妊娠時(shí)的變化卻保持著相對狹窄的管徑和對縮血管物質(zhì)的反應(yīng),從而造成胎盤缺血[5]。本研究顯示：重度子癇前期胎盤絨毛中,細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞明顯增生,滋養(yǎng)細(xì)胞下基底膜增厚,絨毛間質(zhì)纖維蛋白沉積,合體細(xì)胞結(jié)節(jié)增多,合體細(xì)胞出芽,發(fā)生纖維素樣壞死的絨毛增多,絨毛血管增多,絨毛大部分不成熟,胎盤蛻膜間質(zhì)細(xì)胞呈大小不等塊狀、桿狀,蛻膜血管內(nèi)皮細(xì)胞纖維化,蛻膜纖維素性壞死也明顯增多。與胎盤缺血血氧所致的一系列病理變化相一致。

研究表明,胎盤的胎兒面血管內(nèi)皮層及滋養(yǎng)層均有 PDGF及其受體表達(dá),且在重度子癇前期患者組織的閉塞性動脈炎處陽性細(xì)胞染色更深[6]。HDCP患者血循環(huán)中 TNF-α、血栓素等升高,刺激內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、血小板,使之活化,血小板 α-顆粒中的PDGF-A釋放增多,從而使胎盤病變血管局部,產(chǎn)生PDGF-A等血管活性物質(zhì)增多[7]。胎盤淺著床,局部缺血缺氧,缺氧激活原癌基因 sis促進(jìn)PDGF-A過量表達(dá),致使螺旋動脈在多種生長因子共同作用下呈現(xiàn)粥樣硬化改變[6]。本研究表明,重度子癇前期胎盤細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞、蛻膜間質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá) PDGF-A的強(qiáng)度明顯高于對照組,并且隨著 HDCP的病情加重,PDGF-A表達(dá)增高,提示胎盤中 PDGF-A表達(dá)增高,可能阻礙了 HDCP胎盤母體面螺旋動脈血管重塑,導(dǎo)致病變血管強(qiáng)烈收縮,局部缺血缺氧,細(xì)胞毒性因子釋放增多,形成惡性循環(huán)。

圖1 正常妊娠組胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞(HE×400)

圖 2 輕度子癇前期組絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞(HE×400)

圖 3 重度子癇前期組絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞(HE×400)

圖 4 正常妊娠組胎盤絨毛PDGF-A的弱陽性表達(dá)(×400)

圖9 重度子癇前期組胎盤蛻膜滋養(yǎng)細(xì)胞PDGF-A的強(qiáng)陽性表達(dá)(×400)

圖5正常妊娠組胎盤蛻膜PDGF-A的弱陽性表達(dá)(×400)

圖 6輕度子癇前期組胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞 PDGFA的陽性表達(dá)(×400)

圖 7輕度子癇前期組胎盤蛻膜滋養(yǎng)細(xì)胞 PDGF-A的陽性表達(dá)(×400)

圖 8重度子癇前期組胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞 PDGF-A的強(qiáng)陽性表達(dá)(×400)

PDGF-A對蛻膜間質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞具有強(qiáng)大趨化作用。Kimatrai等[8]研究發(fā)現(xiàn),蛻膜的主要成分蛻膜間質(zhì)細(xì)胞在結(jié)構(gòu)及功能上都與具有收縮活性的成纖維細(xì)胞相似,PDGF-A不但能誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞收縮也能誘導(dǎo)蛻膜間質(zhì)細(xì)胞收縮。本研究發(fā)現(xiàn),重度子癇前期胎盤絨毛中,細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞明顯增生,滋養(yǎng)細(xì)胞下基底膜增厚,絨毛間質(zhì)纖維蛋白沉積,合體細(xì)胞結(jié)節(jié)增多,胎盤蛻膜間質(zhì)細(xì)胞呈大小不等塊狀、桿狀,蛻膜血管內(nèi)皮細(xì)胞纖維化,且在該處組織中 PDGF-A呈陽性表達(dá),提示胎盤有不規(guī)則的纖維化,表明HDCP患者胎盤蛻膜PDGF-A表達(dá)的增高加速了蛻膜纖維化,促進(jìn)蛻膜間質(zhì)細(xì)胞收縮,從另一個(gè)方面加重了胎盤缺血缺氧。Mendoza等[9]研究表明,PDGF-A功能的表達(dá)具有劑量依賴性,低劑量能促進(jìn)血管新生,高劑量促使毛細(xì)血管豐富的組織纖維化。胎盤是毛細(xì)血管豐富的組織,對PDGF-1的表達(dá)敏感。本研究結(jié)果顯示正常晚孕組 PDGF-A表達(dá)水平低于輕度子癇前期組,但兩者比較無顯著差異,重度子癇前期組和輕度子癇前期組中 PDGF-A表達(dá)水平比較明顯升高,提示隨著PDGF-A水平升高,胎盤纖維化逐漸加重。

綜上所述,PDGF-A在 HDCP的發(fā)生發(fā)展中的影響是多方面的,隨著研究的不斷深入,將對其作用機(jī)制有進(jìn)一步的了解,為臨床防治 HDCP提供更多的理論依據(jù)。

1 李淑賢.MP妊娠高血壓綜合征監(jiān)測系統(tǒng)對妊娠期高血壓綜合征的預(yù)測價(jià)值.河北醫(yī)藥,2009,31：1138.

2 Robers JM,Lina KY.Recent insights into the pathogenesis of preeclampsin.Placenta,2002,23：359-372.

3 Floege J,Eitner F,Alpers CE.A new look at platelet-derived growth factor in renal disease.JAm Soc Nephrol,2008,19：12-23.

4 樂杰主編.婦產(chǎn)科學(xué).第 6版.北京：人民衛(wèi)生出版社,2004.97-106.

5 劉棣臨.全國妊高征及其并發(fā)癥的診斷及處理學(xué)術(shù)研討會紀(jì)要.中華婦產(chǎn)科雜志,1993,28：262-267.

6 Gurski Gurski MR,Gonzalez E,Brown EG,et al.Immunochem ical localization of platelet-derived growth factor in placenta and its possible role in pre-ec lampsia.J Investig Med,1999,47：128-133.

7 Parker SB,Dobrian AD,Wade SS,et al.AT(1)receptor inhibition does not reduce arterial wall hypertrophy or PDGF-A expression in renal hypertension.Am JPhysiol Heart Circ Physiol,2000,278：613-622.

8 Kimatrai M,Oliver C,Abadia-Molina AC,et al.Contractile activity of human decidual stromal cells.J Clin Endocrinol Metab,2003,88：844-849.

9 Mendoza AE,Young R,Orkin SH.Increased platelet-derived growth factor A-chain expression in human uterine smooth muscle cells during the physiologic hypertrophy of pregnancy.Proc Natl Acad Sci USA,1990,87：2177-2181.