田麗 王玉新 張石嶺 郭文潮

胚胎停育是婦科的常見病之一。合子內(nèi)在的缺陷是引起胚胎早死及胚胎停育的重要原因。本文對 69例胚胎停育絨毛進(jìn)行染色體分析,報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 69例絨毛來自因有自然流產(chǎn)先兆,前來河北省人民醫(yī)院婦科門診、三優(yōu)門診就診以及在婦科病房住院的患者,均 B型超聲(B超)檢查提示：“胚胎停育”或“難免流產(chǎn)”,而行清宮術(shù)。流產(chǎn)胚胎在孕 37～80 d,孕婦年齡 20～40歲。

1.2 絨毛染色體的直接制備法 在無菌負(fù)壓吸宮術(shù)中獲得絨毛組織,選出優(yōu)質(zhì)絨毛組織約 10mg左右,直接放入預(yù)溫 37℃低滲液(1%枸櫞酸鈉內(nèi)含秋水仙素 0.1～0.4μg/ml)5 ml,混勻。低滲 30 min。預(yù)固定加甲醇冰醋酸 =(3∶1)1 ml,混勻5min。更換新鮮固定液室溫固定 30m in。然后棄去固定液,順管壁加入 60%冰醋酸 1m l,1～2m in,由管底部緩緩加入甲醇3ml,然后輕輕混勻,10 min(在固定 5min時用滴管把絨毛挑出)然后離心 5m in去上清液。在加入新鮮固定液 2～3滴,輕輕混勻,以冰片進(jìn)行滴片,立即放入 60℃烤箱 16～24h或 37℃放置 72 h。自然令卻后即可顯帶,核型分析 3個,計(jì)數(shù) 20個以上[1]。結(jié)構(gòu)異?；蚯逗象w增加計(jì)數(shù)及分析。同時對 69例夫婦進(jìn)行外周血染色體分析。

2 結(jié)果

在對 69例絨毛染色體進(jìn)行核型分析中,正常核型 33例,異常核型 36例,異常率為 52.17%。絨毛染色體異常核型見表1。

3 討論

孕早期胚胎染色體異常是胚胎停育最重要的原因之一。自然流產(chǎn)胚胎染色體畸變者約占流產(chǎn)胚胎的 42%[2]。國內(nèi)外文獻(xiàn)均有報(bào)道：自然流產(chǎn)中胚胎染色體異常約占 50%左右。本文結(jié)果顯示胚胎染色體異常率 52.17%與報(bào)道相近。大約70%的人類胚胎都在著床前后死亡,染色體的非整倍體被認(rèn)為是造成人類胚胎這種低著床率和早期丟失的一個重要原因。這種染色體數(shù)目畸變的主要發(fā)生源自雙親之一方的配子形成時或妊娠初期受精卵卵裂時出現(xiàn)染色體不分離,則導(dǎo)致該染色體增多或減少一條,亦即導(dǎo)致三體性或單體性。21-三體在活產(chǎn)兒中最常見,13-三體、18-三體也?？梢?而其它常染色體三體的罕見大多導(dǎo)致流產(chǎn)。性染色體的三體在活產(chǎn)女嬰中有見,性染色體的單體性不僅見子流產(chǎn)兒,也見于兒童或成人。在本文流產(chǎn)絨毛染色體分析中,常染色體三體是最多見的數(shù)目畸變,檢出 32例,占異常核型的88.9%(32/36),它涉及 2、3、7、8、13、14、16、21、和 22號染色體。 性染色體單體數(shù)目畸變,本文 4例,占異常核型的 11.0%(4/36),45,x,這種畸變,除減數(shù)分裂時性染色體不分離,導(dǎo)致減少一條性染色休外,其中大約 3/4是父系性染色體丟失[3]。

表 1 絨毛染色體異常核型

三倍體在流產(chǎn)兒中也十分常見。本文 2例,占 5.6%(2/36),這種染色體的數(shù)目異常可源自新的突變,或源自雙親之一方配子形成中的異常有絲分裂或源自精母細(xì)胞或卵母細(xì)胞減數(shù)分裂中的異常,也可源自雙受精等。這類染色體異常一般在孕 8周以前流產(chǎn),曾有極少數(shù)純?nèi)扼w的活嬰報(bào)告[4]在流產(chǎn)絨毛染色體分析中,染色體結(jié)構(gòu)異常本文檢出 4例(常染色體結(jié)構(gòu)異常 3例,性染色體結(jié)構(gòu)異常 1例)。例 1：染色體核型：13-三體,雙親外周血染色體檢查均正常,異常染色體來自新的突變。例 2：染色體核型：46;XY,-13,+der(13)t(5;13)(5q22;13p 13),雙親外周血染色體檢查,父親核型正常,母親核型為 46,XX,t(5;13)(q22;p 13)。異常染色體來自母親相互易位的染色體配子,在減速分裂中,通過同源染色休間的配對、交換和分離,形成 18種類型的配子,其中一種異常配子與正常配予結(jié)合,即形成為 5號染色體長臂部分,13號染色體短臂部分單體的衍生染色體胚胎導(dǎo)致流產(chǎn)。例 3：46,XY,inv(9)/46,inv(9),-7,+der(7)t(7;13)(7q35;I3q13),雙親外周血染色體檢查,父親核型正常,母親核型為 46,XX,inv(9)的9號染色體臂間倒位,屬于多態(tài)變異,它在人群中的發(fā)生率為1%[5]。多態(tài)現(xiàn)象通常沒有不良的臨床后果。但目前許多資料都傾向于多態(tài)現(xiàn)象與異常妊娠有關(guān)。9號染色體臂間倒位的遺傳主要決定于重復(fù)的或缺失片斷的長短及其所含基因的致死效應(yīng)[6]。本文出現(xiàn)的嵌合型染色體異常,是否與之相關(guān),尚待進(jìn)一步研究。本文另一例 9號染色體臂間倒位者,其絨毛染色體核型為：47,XY,inv(9),+21。例 4：46,xy(y≥18),父親核型為 46,XY(y≥18),母有二次胚胎停育史,之后,隨訪生育一正常女孩。Y染色體大小差異亦屬于多態(tài)變異,大Y異染色質(zhì)中 DNA過多重復(fù)在某些方面可能造成有絲分裂發(fā)生錯誤或影響基因調(diào)節(jié)及細(xì)胞分化紊亂[7],從而導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局。染色體異常是導(dǎo)致胚胎停育的重要因素之一。進(jìn)行染色體檢查,對胚胎停育的病因、診斷及再次妊娠具有重要的指導(dǎo)意義。

1 朱俊真,左一鵬主編.產(chǎn)前實(shí)驗(yàn)室診斷.第 1版.石家莊：河北科學(xué)技術(shù)出版社,1992.31.

2 夏家輝,李麓蕓主編.染色體病.第 1版.北京：科學(xué)出版社,1989.269.

3 夏家輝,李麓蕓主編.染色體病.第 1版.北京：科學(xué)出版,1989.226.

4 周煥庚,夏家輝,李麓蕓主編.人類染色體.第 1版.北京：科學(xué)出版社,1987.249.

5 夏家輝,李麓蕓主編.染色體病.第 1版.北京：科學(xué)出版社,1989.273.

6 郭小寶,阮永銘,李文典,等.9號染色體臂間倒位的遺傳效應(yīng)分析.中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志 ,2006,23：365.

7 巫新春,曹云霞,從林,等.50對胚胎停育夫婦染色體分析.中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志,2006,23：112.