顏 露，黃繩武

（浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，浙江杭州 310053）

惡性腫瘤已成為危害人類健康最嚴(yán)重的疾病之一。臨床上，對腫瘤采取綜合治療的措施，即手術(shù)、放療、化療相結(jié)合的治療方法?；熆善鸬揭欢ǖ闹委熥饔茫殡S著免疫抑制、骨髓抑制等嚴(yán)重毒副反應(yīng)，未必能確實提高患者的生存質(zhì)量、延長壽命。中藥抗腫瘤制劑具有毒副作用小和多靶點抗腫瘤的優(yōu)勢，在物質(zhì)基礎(chǔ)及多靶點作用等方面的研究有很大進展，本文對此作一綜述。

1 中藥抗腫瘤制劑物質(zhì)基礎(chǔ)研究

由于中藥作用的整體性、中藥成分和作用機制的復(fù)雜性，使中藥抗腫瘤制劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的闡明進展緩慢，成為制約共發(fā)展的瓶頸。尋找合理的研究方法，闡明藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用的本質(zhì)，建立科學(xué)的質(zhì)量控制方法，是研究的關(guān)鍵問題。

物質(zhì)基礎(chǔ)的研究主要運用“分離解析”研究思路及植物化學(xué)逐步分離、藥理活性示蹤模式。從宏觀到微觀，從整體到局部，從3個化學(xué)層次(整體-部位-成分)、4個藥理水平(整體動物-組織器官-細胞-分子基因)進行篩選,確定藥效物質(zhì)。雖然取得了一定進展，但存在活性成分≠藥效物質(zhì)≠中藥，制劑整體臨床有效而“活性成分”效果較差甚至無效等諸多問題[1]。由此，提出了許多新的、合理有效的研究方法和技術(shù)，主要有：

1.1 計算機輔助藥物設(shè)計分析技術(shù)

在計算機上建立三維化學(xué)分子結(jié)構(gòu)模型，通過計算機模擬探討藥物與靶點的相互作用關(guān)系，從分子層面上闡釋中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。鄭春松等[2]研究槲皮素抑瘤物質(zhì)基礎(chǔ)使用計算機模擬方法，通過分子對接，得到與靶酶最佳相互作用模式。槲皮素中色原酮結(jié)構(gòu)可與COX-2多個部位作用，發(fā)揮抑瘤作用，驗證了其是藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)。

1.2 血清藥理學(xué)和血清藥物化學(xué)分析方法

結(jié)合體外血清藥理活性測定方法，對血清中有效成分分離鑒定，將中藥入血成分進行體外活性篩選，最終確定有效成分和代謝產(chǎn)物。王喜軍等[3]對復(fù)方安替威膠囊物質(zhì)基礎(chǔ)的研究運用血清藥物化學(xué)分析方法，分析其入血成分，認為綠原酸、黃芩苷既是入血的主要成分，又是眾多代謝產(chǎn)物的前體化合物，最有可能成為藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，以其為指標(biāo)進行工藝及其相關(guān)研究，能體現(xiàn)藥物的內(nèi)在質(zhì)量。

1.3 譜效關(guān)系分析

通過建立各色譜峰表征的化學(xué)物質(zhì)和以藥理指標(biāo)為表征的藥效之間的關(guān)系，運用多元非線性回歸、主成分分析等方法分析數(shù)據(jù)，找出和藥效正相關(guān)的色譜峰，歸屬其代表的化學(xué)成分，確定中藥或復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

盧紅梅等[4]對魚腥草注射液進行譜效分析，發(fā)現(xiàn)色譜圖中17～21 min中的色譜峰是藥效的主要相關(guān)峰，包含的主要化合物有甲基正壬酮、癸酰乙醛、月桂醛、β-蒎烯、β-芳樟醇、1-壬醇、4-松油醇、α-松油醇，其中3種有效物質(zhì)的活性與文獻報道相符。

1.4 生物色譜技術(shù)

以各種具有生物活性的材料作為固定相，將活性大分子、活性細胞膜、甚至活細胞固著在色譜載體上，作為生物活性填料用于現(xiàn)代色譜技術(shù)，形成一種能模仿藥物與生物大分子、靶體或細胞間相互作用的色譜系統(tǒng)。色譜中的各種技術(shù)參數(shù)可定量表征藥物與生物大分子、靶體間相互作用，研究藥物與各種生物活性材料間的特異性結(jié)合情況，模擬生理或病理狀態(tài)下藥物在體內(nèi)生物活性表達的一些關(guān)鍵步驟，篩選活性成分，揭示藥物的吸收、分布、生物轉(zhuǎn)化、代謝等機理，探討藥物間的競爭、協(xié)同、拮抗等相互作用，具有一定的藥理學(xué)或生理學(xué)意義[5]。

H.L.Wang等[6]用人血清白蛋白生物色譜技術(shù)研究茵陳蒿甲醇提取物在色譜柱上的結(jié)合狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)5個主要的保留峰并鑒定了其中兩個化合物濱蒿內(nèi)酯和茵陳新酯，表明這兩個化合物具有生理活性。

1.5 系統(tǒng)生物學(xué)

將代謝組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)等整合起來，使用高通量的篩選技術(shù)通過本質(zhì)和表征的變化揭示體內(nèi)物質(zhì)的變化[7]。如利用代謝組學(xué)評價中藥對病理機體的回調(diào)能力及其影響機體的多種途徑；采用基因芯片技術(shù)、蛋白質(zhì)組相關(guān)分析技術(shù)，將中藥的多組分、多靶點、多途徑作用特點與基因、蛋白表達關(guān)聯(lián)起來，比較各自不同的表達差異，確定不同有效成分對基因及蛋白表達靶點。對于復(fù)方，根據(jù)表達量的多少與復(fù)方的君、臣、佐、使理論和用藥劑量，分析不同有效成分對應(yīng)基因及蛋白靶點的相互作用、復(fù)方各組成單藥之間的密切關(guān)系，闡明復(fù)方的組成原理[8]。

王喜軍等[9]將代謝組學(xué)用于茵陳蒿湯的研究發(fā)現(xiàn)茵陳蒿湯對造模后的標(biāo)記物回調(diào)作用明顯，說明其對肝臟疾病有預(yù)防作用，從藥物代謝組學(xué)角度對經(jīng)典方劑防治肝損傷給出了全新解釋。

近期提出了基于熱力學(xué)觀和還原整合的研究方法[1]及體內(nèi)外物質(zhì)組關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)分析[10-11]。前者通過測定中藥的藥效活性物質(zhì)對生物體生長代謝的干預(yù)作用引起的能量轉(zhuǎn)移和產(chǎn)熱變化，推斷藥物的生物活性，具有準(zhǔn)確、靈敏、高通量、普適性好、實時、動態(tài)、在線等優(yōu)點；后者在全面分析中藥組分及其在生物體內(nèi)形成的代謝物組的基礎(chǔ)上，確定在生物體內(nèi)具有適宜藥代動力學(xué)特征的成分組作為潛在藥效物質(zhì)組，并通過化學(xué)信息學(xué)手段，闡明中藥成分組與其在生物體內(nèi)的潛在藥效物質(zhì)組之間的網(wǎng)絡(luò)對應(yīng)關(guān)系，針對體內(nèi)潛在藥效物質(zhì)組進行多重藥效篩選與確證，在體外、體內(nèi)兩個層次揭示中藥的復(fù)雜藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，是中藥物質(zhì)基礎(chǔ)研究的一個重要補充。

2 中藥抗腫瘤制劑多靶點作用研究

以往對腫瘤的治療主要應(yīng)用單靶點的高選擇性配體化學(xué)藥物分子，很難達到預(yù)期效果或毒性很大，難以治愈腫瘤這種涉及多基因，影響多個組織或細胞的疾病。因此提出了多靶點藥物治療以克服單靶點藥物的局限性，中藥抗腫瘤制劑是一種天然的多靶點制劑，具有多角度攻擊和調(diào)節(jié)疾病網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)中的多個環(huán)節(jié)、不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點[12]。目前，對其多靶點作用的研究主要有：

2.1 抑制腫瘤血管生成

陳剛等[13]用C57BL小鼠接種Lewis肺癌細胞造模，用川芎嗪注射液 50、100、200 mg/（kg·d）腹腔注射 21 d 后，檢測腫瘤體積、重量、肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)及微血管密度，并用Western Blot法和免疫組化法分析腫瘤細胞VEGF表達，結(jié)果顯示川芎嗪能減少小鼠Lewis肺癌腫瘤體積、重量和肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)，并降低腫瘤微血管密度，抑制腫瘤細胞VEGF表達。

2.2 誘導(dǎo)細胞凋亡

趙益等[14]研究腫節(jié)風(fēng)注射液抗腫瘤作用，發(fā)現(xiàn)其可促使早期凋亡和中晚期凋亡的細胞出現(xiàn)凋亡小體，誘導(dǎo)細胞凋亡，對腫瘤具有良好的抑制作用。

2.3 抑制端粒酶活性

Kim等[15]實驗發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中端粒酶活性表達呈陽性，正常組織中端粒酶活性表達呈陰性。腫瘤細胞由于缺乏調(diào)節(jié)端粒酶的機制，有無限增殖的能力。因此抑制端粒酶活性成為治療腫瘤的一個靶點?？鄥A是中藥苦參抗腫瘤的主要活性成分之一，將不同濃度的苦參堿加入肝癌細胞株HepG-2細胞，發(fā)現(xiàn)苦參堿在750 μg/ml濃度可抑制端粒酶活性，明顯下調(diào)人類端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（hTERT）啟動子的表達[16]。彭彥輝等[17]研究苦參堿對腸癌HT-29細胞株作用表明苦參堿通過抑制DNA合成和誘導(dǎo)細胞凋亡來抑制腫瘤細胞增殖，抑制端粒酶活性是苦參堿抑制腫瘤細胞增殖的一個重要途徑。

3 中藥抗腫瘤制劑新工藝研究

3.1 中藥抗腫瘤靶向制劑

中藥抗腫瘤靶向制劑可分為被動靶向制劑和主動靶向制劑。被動靶向制劑的研究主要有：脂質(zhì)體、納米粒和乳劑等。El-Samaligy MS等[18]創(chuàng)造性地把水飛薊素包裹在由卵磷脂、膽固醇、環(huán)己胺、吐溫-80組成的脂質(zhì)體中，并通過頰黏膜給藥提高水飛薊素的生物利用度。吳旭錦[19]等以小麥胚芽油為油相，聚氧乙烯氫化蓖麻油為表面活性劑，制備紫蘇子油納米乳，提高紫蘇子油的溶解度和穩(wěn)定性，重現(xiàn)性好，有一定的靶向效應(yīng)。

主動靶向制劑多由被動靶向制劑經(jīng)修飾而來，可增加對特定組織或器官的靶向性，主要的研究有經(jīng)修飾的脂質(zhì)體、微球和微囊、納米粒等。時軍等[20]用聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂乙醇胺修飾足葉乙苷脂質(zhì)體膜制得足葉乙苷長循環(huán)脂質(zhì)體，提高了脂質(zhì)體的靶向性、穩(wěn)定性和包封率。張方宇等[21]采用逆向蒸發(fā)-短時超聲法制備苦參堿脂質(zhì)體，用乳糖酰磷脂酰乙醇胺修飾苦參堿脂質(zhì)體得到乳糖脂苦參堿脂質(zhì)體，對肝區(qū)有特異性親合力，強化靶向作用，在肝臟中相對于其他臟器的靶向效率有顯著性差異。體外對人肝癌HepG2細胞的殺傷率也大大增加，有望成為一種新型靶向抗肝癌藥物。

3.2 中藥抗腫瘤緩控釋制劑

研究主要集中在：滲透泵片、微球和微丸、納米粒等。劉占軍等[22]以二羥基二過碘酸合鎳鉀為引發(fā)劑，在殼聚糖上接枝醋酸乙烯酯，后者水溶液中生成殼聚糖納米粒，再利用超聲震蕩技術(shù)將0.5～5.0mg的紫杉醇與上述納米粒混合制備負載紫杉醇的殼聚糖納米粒。制劑粒徑均勻，穩(wěn)定性好，包封率高，體外釋藥具有明顯的緩釋作用。朱陵君等[23]以mPEGPCL為原料，采用乳化-揮發(fā)法，制備負載漢防己甲素的高分子納米微球，制劑具有明顯緩釋特征。何燕等[24]比較了燈盞花素凝膠骨架片和滲透泵片的釋放行為，得出以L-PEO為輔料制備的燈盞花素雙層滲透泵片具有良好的控釋釋放行為，穩(wěn)定性高，體內(nèi)外順應(yīng)性好，有較好的發(fā)展前景。

4 結(jié)語

我國中藥資源豐富，有著悠久的應(yīng)用歷史和臨床經(jīng)驗。近年來，我國學(xué)者在中藥抗腫瘤制劑方面做了大量研究，取得了顯著的成績。但仍需在以下方面深入研究:物質(zhì)基礎(chǔ)方面，加強對中藥抗腫瘤制劑物質(zhì)基礎(chǔ)和整體作用的研究等；制劑工藝方面，加強對主動靶向制劑、控釋制劑及二者相結(jié)合制劑的研究。同時，注意結(jié)合中藥藥理學(xué)、免疫學(xué)、細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等多學(xué)科研究方法和多種技術(shù)手段，推動中藥完善發(fā)展。為提高腫瘤患者的生命質(zhì)量、促進人類健康做出更大的貢獻。

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