曹利蓉

(烏魯木齊鐵路局疾病控制所，新疆 烏魯木齊 830011)

從1995年以來，我們一直參加由鐵道部勞衛(wèi)司組織的全路疾控所微生物質(zhì)控考核，通過每次盲樣的分離鑒定，能很快提高我們實(shí)驗(yàn)室處理各種樣品的能力。與以往不同2008年微生物質(zhì)控考核鐵道部勞衛(wèi)司要求在最短時(shí)間上傳檢驗(yàn)結(jié)果，其余的生化反應(yīng)、原始記錄在5天內(nèi)寄出?，F(xiàn)將質(zhì)控考核情況及檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下:

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 質(zhì)控樣品 鐵道部勞衛(wèi)所下發(fā)的凍干盲樣菌種2支，編號(hào)為10號(hào)、31號(hào)。

1.1.2 培養(yǎng)基 本次質(zhì)控考核所用培養(yǎng)基由杭州微生物試劑廠生產(chǎn)。細(xì)菌生化鑒定系統(tǒng)由法國生物梅里埃公司生產(chǎn) API20E，均在有效期內(nèi)使用。

1.1.3 診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清、致瀉大腸埃希菌診斷血清由蘭州生物制品研究所生產(chǎn)，在有效期內(nèi)使用。

1.2 方法

GB/T4789.1～4789.31—2003《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)》

2 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

2.1 增菌

無菌操作開啟真空凍干菌種管，加無菌生理鹽水0.5 mL溶解，分別吸取2滴加入2 mL營養(yǎng)肉湯和7.5%NaCl肉湯、GN增菌液，36℃培養(yǎng)4～6 h。觀察結(jié)果見表1。

表1 增菌實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果

2.2 分離

各取一環(huán)菌液直接接種到普通營養(yǎng)瓊脂平板、血瓊脂平板(購買)、SS、WS、EMB、TCBS、麥康凱瓊脂平板，36℃ 18～24 h培養(yǎng)。31號(hào)菌在普通營養(yǎng)瓊脂平板上見淺黃色菌落，在血瓊脂平板上見較大的淺黃色菌落，有透明溶血環(huán)，其它培養(yǎng)基均不生長。10號(hào)菌在SS、WS平板上可見兩種菌落，主要為無色半透明，中間帶黑心的小菌落，偶見散在粉紅色中等大小、圓形不透明菌落。

2.3 初步鑒定

31號(hào)菌挑取血平板上單個(gè)菌落涂片做 G染色鏡檢:G+球菌，呈葡萄狀排列。做血漿凝固酶試驗(yàn)為(+);生理鹽水對照(－)。

31號(hào)菌根據(jù)血平板上菌落特征及溶血、革蘭氏染色(G+球菌)、血漿凝固酶(+)可判定為金黃色葡萄球菌［1］，在24 h內(nèi)將檢驗(yàn)結(jié)果上傳至鐵道部勞衛(wèi)司。

10號(hào)菌(主要菌)挑取帶黑心的單個(gè)菌落涂片做G染色鏡檢:G－桿菌，無芽孢;氧化酶(－);用沙門氏菌診斷血清A～F多價(jià)O凝集(+)，再依次用O2、O4、O8、O9、凝集，結(jié)果O9(+)，根據(jù)O9(D群)的確定，用d;g;m來確定H相，結(jié)果Hg (+)，Hm(+)。

根據(jù)血清凝集結(jié)果初步判定:10號(hào)帶黑心的菌為腸炎沙門氏菌。

10號(hào)菌(次要菌)挑取粉紅色的單個(gè)菌落涂片做 G染色鏡檢:G－短桿菌，無芽孢;氧化酶(－);用致瀉性大腸埃希菌血清凝集:EIEC(－); EPEC(－);ETEC(－);EHEC(－)，根據(jù)菌落特征及血清學(xué)凝集可初步判定:10號(hào)菌(次要菌)為非致瀉性大腸埃希氏菌。將檢驗(yàn)結(jié)果上傳至鐵道部勞衛(wèi)司。

2.4 生化特征

分別挑取10號(hào)(主要菌、次要菌)接種于TSI上做初步生化反應(yīng)結(jié)果見表2。

10號(hào)(主要菌)用 API20E鑒定，編碼為6704552，提示為沙門氏菌;補(bǔ)充試驗(yàn):葡萄糖胺(+)，西蒙氏枸櫞酸鹽(+)。

10號(hào)(次要菌)用API20E鑒定條上，編碼為5144552，提示為大腸埃希氏菌。

生化反應(yīng)結(jié)果與初步判定結(jié)果是相吻合的，最終我們的檢測結(jié)果完全正確，并且10號(hào)菌是全路第一個(gè)報(bào)出。

表2 生化反應(yīng)結(jié)果

3 討論與小結(jié)

根據(jù)鐵道部勞衛(wèi)司考核情況通報(bào)，我所微生物考核結(jié)果快速、正確，名列第一。從考核結(jié)果顯示，積累一定的細(xì)菌鑒定經(jīng)驗(yàn)是我們?nèi)〉煤贸煽兊年P(guān)鍵。

在細(xì)菌鑒定過程中檢驗(yàn)人員應(yīng)思路清晰，可以增菌和劃平板同時(shí)進(jìn)行［2］，選擇鑒定的方向，而不是所有的生化反應(yīng)全做，毫無目的。在血清學(xué)試驗(yàn)過程中，其中有一瓶A～F多價(jià)O血清不凝，可能是效價(jià)存在問題，其他疾控所也存在同樣的問題，生物制品所在出售診斷血清時(shí)應(yīng)保證其效價(jià)。

衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)質(zhì)量控制直接關(guān)系到細(xì)菌學(xué)檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，因此疾控所應(yīng)積極參加上級(jí)衛(wèi)生部門組織的能力驗(yàn)證和實(shí)驗(yàn)室間比對活動(dòng)，從而找出差距，總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，以利于提高實(shí)驗(yàn)室的檢測水平。

［1］ GB/T4789.10—2003，食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)［S］.

［2］ 何曉青.衛(wèi)生防疫細(xì)菌檢驗(yàn)［M］.南昌:新華出版社，1989. 302.