周 清 曾 桔 潘 昕 溫金蓮

(廣東藥學(xué)院，廣州 510006)

傳統(tǒng)固相萃取使用最多的吸附劑為非選擇性的吸附劑，分子印跡聚合物作為固相萃取固定相彌補(bǔ)了傳統(tǒng)方法的不足，提高了選擇性，可以實(shí)現(xiàn)目標(biāo)成分的富集，還能夠排除基體/背景的影響，實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確、快速和高效的含量測(cè)定，因此分子印跡固相萃取(molecularly imprinted solid phase extraction，MI-SPE)已經(jīng)成為分子印跡技術(shù)中具有應(yīng)用前景的研究方向之一。MI-SPE的應(yīng)用越來(lái)越受到重視，主要包括環(huán)境樣品痕量檢測(cè)、藥物分析與分離、生物與臨床樣品分析及食品工業(yè)等方面，該技術(shù)有著廣泛的應(yīng)用前景[1-5]。

筆者采用本體聚合法合成印跡聚合物，以非那西汀(Phenacetin，Acetophenetidine)為模板分子。非那西汀又名對(duì)乙酰氨基苯乙醚，白色有光澤的鱗片狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末。常用的檢測(cè)方法有分光光度法、高效液相色譜法、氣相色譜法等。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：TU-1810型，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；

恒溫水浴鍋：HH-6型，金壇市精達(dá)儀器制造廠；

恒溫振蕩器：THZ-82型，江蘇金壇市宏華儀器廠；

超聲波清洗器：DL-360A型，上海之信儀器有限公司；

磁力加熱攪拌器：791型，江蘇金壇市華歐實(shí)驗(yàn)儀器廠；

固相萃取小柱及篩板：深圳逗點(diǎn)生物科技有限公司;

非那西汀：標(biāo)準(zhǔn)品，0.25 g/瓶，百靈威公司；

偶氮二異丁腈(AIBN)：AR，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；

甲基丙烯酸(MAA)：AR，成都市科龍化學(xué)試劑廠；

乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)：AR，廣州雙鍵貿(mào)易有限公司；

乙腈：AR，天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司；

甲醇、乙酸：AR，廣州化學(xué)試劑廠；

丙酮：AR，天津市富宇精細(xì)化工有限公司。

1.2 聚合物的制備

精密稱取模板分子(非那西汀)0.179 9 g置于25 mL安瓿瓶中，加入8 mL氯仿并超聲震蕩，待模板分子全部溶解后，加入4 mL甲基丙烯酸(MAA)、6 mL乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)、30 mg偶氮二異丁腈(AIBN)，通氮?dú)? min，超聲震蕩5 min使其充分混勻后，再通氮?dú)?0 min，低溫真空封管后，置于60℃恒溫水浴鍋中聚合反應(yīng)24 h，得白色塊狀聚合物。

取出聚合物用研缽研磨，過(guò)74 μm篩，用丙酮沉降3次，取粒徑均勻部分在通風(fēng)櫥中揮干殘留的丙酮。取適量聚合物用濾紙包好，置于索氏提取器中用甲醇-乙酸(100∶20)混合液加熱連續(xù)回流24 h，然后再用純甲醇加熱連續(xù)回流24 h，用紫外檢查回流液做跟蹤檢測(cè)，直至模板分子被洗滌干凈。

取出聚合物置于60℃烘箱干燥12 h，密閉存放于干燥器中待用。

1.3 絡(luò)合量測(cè)定

(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密稱取非那西汀0.134 5 g，用乙腈溶解定容至150 mL，搖勻，得濃度為5 mmol/L的非那西汀母液，經(jīng)稀釋后得到濃度依次為0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.1、0.4、0.6 mmol/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。用1 cm石英比色皿，以乙腈為參比，取中間濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液掃描紫外吸收譜圖，得到最大吸收波長(zhǎng)為250.5 nm。在250.5 nm波長(zhǎng)下，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液系列的吸光度，以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度c(mmol/L)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

(2)絡(luò)合量Q的測(cè)定

精密稱取模板聚合物9份，每份30 mg，置于15 mL具塞錐形瓶中，其中一個(gè)記為空白對(duì)照，僅加入5 mL乙腈；其余編號(hào)1～8號(hào)，依次加入0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.1、0.4、0.6 mmol/L的非那西汀溶液5 mL。將上述9份樣品置于振蕩器上，在室溫下振蕩24 h。用針筒吸取清液，濾膜過(guò)濾后取濾液，用紫外分光光度法直接測(cè)定(或稀釋后測(cè)定)吸附后的吸光度，計(jì)算模板聚合物對(duì)非那西汀的吸附量Q1。

空白聚合物測(cè)定方法同上，吸附量記為Q2。Q1與Q2之差Q即為特異性吸附量。

1.4 固相萃取回收試驗(yàn)

(1)固相萃取柱的前處理

稱取模板聚合物和空白聚合物各0.5 g，分別裝入固相萃取小柱中(柱容量5 mL，直徑8 mm)，干法裝柱，用乙腈潤(rùn)濕聚合物，裝好篩板。用乙腈沖洗，每次約3 mL，洗10次以上。

(2)固相萃取

取濃度為0.03 mmol/L的非那西汀溶液3 mL上樣，萃取時(shí)間約5 min，收集過(guò)柱液。用乙腈為空白對(duì)照液，用紫外分光光度法定量測(cè)定過(guò)柱液吸光度，計(jì)算萃取率。

用乙腈-乙酸(100∶10)混合液3 mL洗脫，洗脫時(shí)間約5 min，收集洗脫液；用乙腈-乙酸(100∶10)為空白對(duì)照，用紫外分光光度法定量測(cè)定洗脫液吸光度。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

按1.3(1)所述方法，以乙腈為參比，測(cè)定非那西汀系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度A，得到的線性回歸方程為c=-0.003+0.066A，r=0.999 9。

2.2 絡(luò)合量的測(cè)定

按1.3(2)所述方法，測(cè)定起始底物濃度變化時(shí)，聚合物對(duì)非那西汀的吸附量，吸附量的計(jì)算公式為Q=1 000V(c0-c)/30(c0為吸附前標(biāo)準(zhǔn)溶液的起始濃度、c為吸附后溶液濃度)。

表1 非那西汀模板聚合物吸附量Q1

從表1數(shù)據(jù)可以看出，非那西汀模板聚合物的吸附量的總趨勢(shì)是隨著溶液濃度的增加而增大。

表2 空白聚合物吸附量Q2

從表2數(shù)據(jù)可以看到，空白聚合物吸附量的總趨勢(shì)是隨著溶液濃度的增加而增大。圖1為模板聚合物Q1與空白聚合物Q2數(shù)據(jù)比較柱狀圖。

圖1 模板聚合物Q1與空白聚合物Q2數(shù)據(jù)比較柱狀圖

從表1、表2和圖1可看到，雖然非那西汀模板聚合物和空白聚合物的吸附量總趨勢(shì)是隨著溶液的濃度增大而增大，但明顯看到模板聚合物的吸附能力比空白聚合物的吸附能力強(qiáng)的多，因此可以認(rèn)為非那西汀模板聚合物對(duì)非那西汀具有特異性吸附的性能。

2.3 固相萃取試驗(yàn)結(jié)果

按1.4所述方法完成固相萃取試驗(yàn)，得到試驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

表3中數(shù)據(jù)顯示，雖然兩個(gè)小柱的過(guò)柱液的吸光度都較標(biāo)準(zhǔn)溶液有比較大幅度的下降，但由數(shù)據(jù)可以看出，模板聚合物的吸附能力明顯優(yōu)于空白聚合物的吸附能力；用乙腈-乙酸(體積比100∶10)為洗脫液洗脫時(shí)，僅需洗脫一次，固相萃取柱(模板)上的非那西汀幾乎全部被洗脫下來(lái)，說(shuō)明洗脫效果較好。

表3 固相萃取試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

對(duì)非那西汀印跡聚合物的固相萃取性能做了初步研究，而對(duì)固相萃取的壓力、時(shí)間、溶劑、洗脫劑等沒(méi)有進(jìn)行更細(xì)致的探討，得到的一次性萃取率為74.2%。根據(jù)色譜相關(guān)理論，如果換用極性更低的溶劑來(lái)溶解非那西汀，萃取率會(huì)更高。本研究用于固相萃取的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0.03 mmol/L，是根據(jù)系列試驗(yàn)所得出的結(jié)論，如果換用濃度更低的樣品溶液，萃取率會(huì)更高。由于柱容量的限制，不宜選用濃度太大的樣品上樣。另外，洗脫時(shí)可以通過(guò)變換洗脫劑、增加洗脫時(shí)間、洗脫次數(shù)等方式來(lái)提高洗脫率。

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[2] Thurman E M, Mills M S. Solid phase extraction: principles and practice[M]. New York: John Wiley & Sons,1998:200-210.

[3] Fritz J S. Analytical solid-phase extraction[M]. New York: Wiley-VCH, 1999.

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