于曉敏，王賢親，何文斐，胡淑萍，楚生輝，賈娟，王秀勇，葉發(fā)青

(溫州醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，浙江 溫州 325035)

LC-ESI-MS法測(cè)定混合二元酸三種主要組分含量

于曉敏，王賢親，何文斐，胡淑萍，楚生輝，賈娟，王秀勇，葉發(fā)青

(溫州醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，浙江 溫州 325035)

目的：建立LC-ESI-MS測(cè)定混合二元酸中丁二酸、戊二酸和己二酸含量的方法。方法：色譜條件：色譜柱為Agilent Zorbax SB-C18（2.1 mm×150 mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇:0.1%甲酸=10:90(V/V)，柱溫25 ℃，流速0.4 mL/min。質(zhì)譜條件：ESI（電噴霧離子源），負(fù)離子模式檢測(cè)，選擇離子監(jiān)測(cè)(selected ion monitoring，SIM)方式定量，監(jiān)測(cè)離子峰分別是丁二酸m/z 117，戊二酸m/z 131，己二酸m/z 145。結(jié)果：丁二酸、戊二酸和己二酸在0.2～20μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.99204、0.99257、0.99327），三種二元酸的最低檢測(cè)極限都是0.05μg/mL，加樣回收率在97.15%～99.23%范圍內(nèi)，精密度RSD≤2%（n=5）。測(cè)得混合二元酸樣品中丁二酸、戊二酸和己二酸的含量分別為37.28%、33.40%和14.15%，三者合計(jì)84.83%。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確，靈敏度高，穩(wěn)定快速，且重現(xiàn)性好，適合于混合二元酸中丁二酸、戊二酸和己二酸含量的測(cè)定。

LC-ESI-MS；分離；丁二酸；戊二酸；己二酸；含量

混合二元酸是環(huán)己烷氧化制己二酸生產(chǎn)過(guò)程中的副產(chǎn)品，其中含有丁二酸、戊二酸、己二酸等組分，其組成復(fù)雜[1]，而這三種二元酸都是重要的有機(jī)化工原料，對(duì)混合二元酸的組成進(jìn)行測(cè)定、分離后重新利用，有很重要的社會(huì)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)意義。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道稱混合二元酸組成的測(cè)定方法有反相高效液相色譜內(nèi)標(biāo)法[2]、氣相色譜酯化法[3]、反相離子對(duì)色譜法[4-5]、高效液相色譜外標(biāo)法[6]、高效液相色譜面積歸一法[7]和液質(zhì)聯(lián)用法[8]。本研究用液質(zhì)聯(lián)用法采用選擇離子監(jiān)測(cè)技術(shù)檢測(cè)丁二酸、戊二酸、己二酸，與上述方法比較具有靈敏度高、選擇性好等優(yōu)點(diǎn)。在確定了線性范圍基礎(chǔ)上制定了線性回歸方程，測(cè)定了混合二元酸中丁二酸、戊二酸和己二酸的百分含量，為大規(guī)模分離混合二元酸提供了參考。

1 材料和方法

1.1 儀器與試藥 德國(guó)Bruker公司Esquire HCT質(zhì)譜儀，配ESI（電噴霧離子源），美國(guó)Agilent 1200 HPLC，電子天平（JY5002型，上海精密科學(xué)儀器有限公司），甲醇（德國(guó)Merck公司），甲酸（優(yōu)級(jí)純，美國(guó)Tedie公司），水（法國(guó)Millipore超純水系統(tǒng)），丁二酸、戊二酸、己二酸（均為國(guó)產(chǎn)分析純）。1.2 分析條件 質(zhì)譜條件：ESI（電噴霧離子源），負(fù)離子檢測(cè)，霧化氣壓力設(shè)為30 psi；干燥氣（N2）流速設(shè)為7 L/min，干燥氣溫度設(shè)為350 ℃。選擇離子監(jiān)測(cè)(selected ion monitoring，SIM)方式定量，丁二酸[M-H]-m/z 117，戊二酸[M-H]-m/z 131，己二酸[M-H]-m/z 145。

色譜條件：Agilent Zorbax SB-C18柱（2.1 mm×150 mm，5μm），流動(dòng)相：甲醇:0.1%甲酸=10:90(V/V)，柱溫25 ℃，流速：0.4 mL/min，進(jìn)樣量為10μL。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品溶液制備 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：分別精密稱取丁二酸、戊二酸和己二酸標(biāo)準(zhǔn)品0.1003 g、0.1003 g、0.1004 g，加水溶解，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，定容，搖勻，配制成1000μg/mL的混合二元酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于陰涼處保存。臨用前以水稀釋成各種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

待測(cè)樣品溶液的制備：精密稱取混合二元酸樣品0.0500 g，加水溶解，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，定容，搖勻，配制成500μg/mL的樣品儲(chǔ)備液，于陰涼處保存。臨用前以水稀釋成各種濃度的待測(cè)溶液。

2 結(jié)果

2.1 丁二酸、戊二酸和己二酸質(zhì)量色譜圖 在1.2分析條件下，三種化合物分離效果較好，結(jié)果顯示丁二酸、戊二酸和己二酸的保留時(shí)間分別為1.7 min、2.7 min和6.3 min，見(jiàn)圖1，所對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜圖見(jiàn)圖2。

圖lLC-ESI-MS色譜圖

圖2 丁二酸、戊二酸和己二酸的一級(jí)質(zhì)譜圖

2.2 待測(cè)混合二元酸樣品組成成分的定性檢測(cè)結(jié)果顯示在1.7 min、2.7 min和6.3 min有顯著的峰形，同2.1結(jié)果比較可知，待測(cè)樣品溶液中含有丁二酸、戊二酸和己二酸，所對(duì)應(yīng)的色譜圖見(jiàn)圖3。

圖3 樣品LC-ESI-MS色譜圖

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定及最小檢測(cè)限 分別精密量取1.3中配制的1000μg/mL混合二元酸標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋，配制成0.2、0.5、1、2、5、10、20μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)混合二元酸溶液。按1.2條件，將上述各濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣10μL，測(cè)得數(shù)據(jù)在0.2～20 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程分別為：

丁二酸 y=5370.23x+19248.62，r=0.99204；戊二酸 y=10243.74x+31007.374，r=0.99257；己二酸 y=23647.73x+57714.82，r=0.99327。

丁二酸、戊二酸和己二酸的最低檢測(cè)限，當(dāng)S/N=3時(shí)，分別為0.05μg/mL、0.05μg/mL和0.05 μg/mL。

2.4 加樣回收率試驗(yàn) 取500μg/mL的樣品儲(chǔ)備液適量，加水稀釋到2μg/mL（丁二酸、戊二酸和己二酸濃度分別是0.7456、0.668、0.283μg/mL）的樣品溶液，分別加入標(biāo)準(zhǔn)品丁二酸、戊二酸和己二酸適量，分別按1.2條件進(jìn)行檢測(cè)各5次，計(jì)算回收率，結(jié)果如表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)（n=5，%）

2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 分別以0.5μg/mL、2μg/mL和10μg/mL的標(biāo)樣溶液，以1.2條件進(jìn)行檢測(cè)，分別重復(fù)5次，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 精密度試驗(yàn)（n=5，%）

2.6 樣品組成成分的定量檢測(cè) 取500μg/mL的樣品儲(chǔ)備液，分別配制成2μg/mL、8μg/mL和30μg/mL的樣品溶液，按1.2條件進(jìn)行檢測(cè)，數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

表3 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

對(duì)二元酸的檢測(cè)方法中，主要應(yīng)用的是高效液相色譜法，但此法專屬性差，靈敏度低，在復(fù)雜的化工廢料定量方面會(huì)產(chǎn)生誤差。予氣相色譜法，在樣品檢測(cè)之前需要衍生化，樣品處理較復(fù)雜、費(fèi)時(shí)。而選擇LC-MS檢測(cè)法，采用離子監(jiān)測(cè)（SIM）技術(shù)，只監(jiān)測(cè)待測(cè)物相對(duì)應(yīng)的特征離子，不相關(guān)的雜質(zhì)將不出峰，這樣可以大大提高專屬性，減少雜質(zhì)的干擾，具有靈敏度高（檢測(cè)限為0.05μg/mL）、專屬性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。選擇2.1 mm×150 mm的細(xì)柱，與常規(guī)4.6 mm×150 mm柱子比較具有更高的效率，細(xì)柱時(shí)流量小，有利于流動(dòng)相的霧化、質(zhì)譜的離子化效果。以甲醇-0.1%甲酸（10:90）為流動(dòng)相，加0.1%甲酸有利于峰形的優(yōu)化。

LC-ESI-MS法測(cè)定混合二元酸濃度，具有簡(jiǎn)便、靈敏、可靠的特點(diǎn)，可適用于化工廢水中混合二元酸的定性及定量測(cè)定。

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Q503

B

1000-2138(2010)01-0056-03

2008-11-27

溫州市科技局科研基金資助項(xiàng)目（G20060098）。

于曉敏（1974-），女，黑龍江齊齊哈爾人，講師，碩士。

葉發(fā)青，教授，碩士生導(dǎo)師，Email：yfq@wzmc.net。

毛文明）

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