摘 要:本研究以濰縣青和喜諾曉蘿卜為試材，針對影響花藥培養(yǎng)的因素——活性炭和NO-3/NH+4，以改良Keller培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基進(jìn)行試驗。結(jié)果表明，濰縣青適宜誘導(dǎo)培養(yǎng)基為添加0.15%活性炭的基本培養(yǎng)基，喜諾曉蘿卜的適宜誘導(dǎo)培養(yǎng)基為NO-3/NH+4為2∶1的基本培養(yǎng)基。并據(jù)此建立了兩種青蘿卜的花藥培養(yǎng)體系，擴(kuò)大了可以應(yīng)用花藥培養(yǎng)技術(shù)的蘿卜基因型范圍。

關(guān)鍵詞:青蘿卜;花藥培養(yǎng);單倍體

中圖分類號:S631.103.2文獻(xiàn)標(biāo)識號:A文章編號:1001-4942(2010)02-0033-02

單倍體在作物遺傳育種研究中具有重要的意義，花藥培養(yǎng)是獲得單倍體的一個簡單有效的途徑，目前已經(jīng)在多種作物上成功應(yīng)用[1~7]。蘿卜是一種深受人民群眾喜愛的蔬菜作物，利用單倍體可以加快蘿卜的育種進(jìn)程，因此花藥培養(yǎng)在蘿卜上的應(yīng)用研究較多，已有成功的報道[4~6]。但目前成功進(jìn)行花藥培養(yǎng)的蘿卜基因型范圍較小，同時成胚率較低。本試驗研究了兩種青蘿卜材料的花藥培養(yǎng)體系，以期擴(kuò)大基因型范圍，提高成胚率，為花藥培養(yǎng)技術(shù)在蘿卜上的應(yīng)用提供有益的借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗共采用2個蘿卜品種(表1)。2009年4月中旬露地直播，6月初抽薹開花。期間田間常規(guī)管理，控制病蟲害發(fā)生。

1.2 方法

1.2.1 花蕾選擇與預(yù)處理 盛花期選擇健壯植株約2~4 mm的花蕾，連枝一同取下，封在罐頭瓶中置于4℃冰箱中低溫處理3 d。

1.2.2 胚狀體誘導(dǎo)方法 將花蕾從冰箱中取出，先用75%酒精消毒30 s，然后用0.1%升汞消毒10 min，最后接種于含有不同炭濃度和NO-3/NH+4不同配比的改良Keller培養(yǎng)基[3]上。培養(yǎng)皿直徑為60 mm，每皿接種36個花藥。接種后將培養(yǎng)皿用封口膜封口置于35℃培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)24 h，之后取出放在25℃培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)20 d左右即可誘導(dǎo)成胚。

1.2.3 活性炭對成胚的影響 以改良Keller培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，活性炭濃度設(shè)為0、0.05%、0.1%、0.15%和0.2%，其中0.05%濃度為基本培養(yǎng)基含量。每處理接種9皿，重復(fù)3次。

1.2.4 NO-3/NH+4對成胚的影響 以改良Keller培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，保持其中NH4NO3含量不變，調(diào)整KNO3和(NH4)2SO4含量使NO-3/NH+4比值為4∶1、3∶1、2.5∶1、2∶1和1∶1，其中2∶1含量為基本培養(yǎng)基含量。每處理接種9皿，重復(fù)3次。

1.2.5 成胚率 成胚率(%)=胚狀體個數(shù)/培養(yǎng)花藥個數(shù)×100

3 結(jié)論與討論

在花藥培養(yǎng)體系中，單倍體胚狀體的誘導(dǎo)階段最適培養(yǎng)基差異較大，而在生芽、生根培養(yǎng)階段在相同培養(yǎng)基上的長勢無明顯區(qū)別[6]，因此建立花藥培養(yǎng)體系的關(guān)鍵在于單倍體胚狀體誘導(dǎo)培養(yǎng)基的選擇。本研究得到了兩種青蘿卜具有較高成胚率的單倍體誘導(dǎo)培養(yǎng)基，基于此可以建立兩種青蘿卜的花藥培養(yǎng)體系，擴(kuò)大可以成胚的蘿卜基因型范圍。

研究中發(fā)現(xiàn)活性炭在一定濃度范圍內(nèi)能夠提高蘿卜花藥培養(yǎng)單倍體胚狀體的誘導(dǎo)率，超出一定濃度后則降低，因此適量的活性炭對濰縣青蘿卜花藥培養(yǎng)單倍體誘導(dǎo)有促進(jìn)作用。

氮素的量和不同形態(tài)氮素的比例對培養(yǎng)效果有明顯的影響[7]，這在本試驗中兩種青蘿卜單倍體胚狀體誘導(dǎo)過程中得到了進(jìn)一步的證實。在本試驗中NO-3/NH+4比例甚至起到了決定性的作用，因此是否可以認(rèn)為蘿卜花藥單倍體胚狀體的發(fā)生與氮素以及氮素不同形態(tài)的比例有關(guān)，此問題需要進(jìn)一步探討。

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