摘 要:采用4種人工接種方法對(duì)大白菜根腫病進(jìn)行苗期接種鑒定。結(jié)果表明，蘸根法的發(fā)病率與病情指數(shù)最高;菌土法隨菌液濃度升高，發(fā)病率及病情指數(shù)均增加;浸芽法無(wú)論發(fā)病率還是病情指數(shù)均最低;注射法接種后50天調(diào)查的發(fā)病率及病情指數(shù)均明顯高于30天的調(diào)查結(jié)果。注射法在4種接種方法中操作最簡(jiǎn)單，適合育種中對(duì)大量材料進(jìn)行抗病性鑒定。

關(guān)鍵詞:大白菜;根腫病;接種鑒定

中圖分類號(hào):S341.1+9文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào):A文章編號(hào):1001-4942(2010)01-0078-02

大白菜根腫病是由蕓薹根腫菌(Plasmodiophora brassicae Woronin)侵染引起的一種世界性病害。該病為土傳真菌性病害，病原菌可在土壤中存活8年以上，受侵染的根組織大量增生，膨大形成瘤狀腫根，致使根的正常生理功能受到影響，根系生長(zhǎng)和吸收能力下降，植株生長(zhǎng)發(fā)育受阻，大白菜不能形成正常的葉球，甚至枯萎死亡。近年來(lái)，該病在山東省發(fā)生面積不斷擴(kuò)大，危害逐年加重。為準(zhǔn)確鑒定試材的抗病性，本試驗(yàn)采用4種接種方法對(duì)大白菜根腫病進(jìn)行了苗期接種鑒定，試圖找出一種在通常條件下快速而準(zhǔn)確的抗病性鑒定方法，為抗病育種提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料大白菜品種為“耐熱8號(hào)”。育苗基質(zhì)為青島市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院配制的育苗土(蘸根法所用基質(zhì)為珍珠巖)。

1.2 接種液的制備將預(yù)存于-18℃冰箱內(nèi)的大白菜根腫塊(取自本院蔬菜田)攪碎，四層紗布過(guò)濾，冷凍離心機(jī)4 000 r/min離心10 min，棄上清，用蒸餾水懸浮沉淀，共重復(fù)3次，最后棄上清，用蒸餾水將懸浮液孢子濃度調(diào)至2×108個(gè)/ml。4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 接種方法

1.3.1 注射法 將種子播于裝有消毒育苗基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)缽中，播后用移液器吸取菌液1 ml注射于種子下方，于25～28℃下培養(yǎng)。2008年8月4日播種，9月3日調(diào)查;2009年4月10日播種，5月31日調(diào)查發(fā)病情況。

1.3.2 浸芽法 2008年8月5日浸種，24℃催芽。8月6日待芽長(zhǎng)2 mm時(shí)進(jìn)行菌液浸泡，濃度同上，設(shè)3個(gè)處理，浸泡時(shí)間分別為15、30、45 min，后正常播種，于9月24日調(diào)查發(fā)病情況。

1.3.3 蘸根法 2008年8月6日采用珍珠巖作基質(zhì)播種，8月18日將無(wú)病蟲幼苗取出用自來(lái)水洗去基質(zhì)，吸干水分，放入育苗穴盤，將根部置于裝有菌液的塑料盒中，濃度同上。浸根時(shí)間分別為4、6、8 h，然后重新定植于裝有消毒育苗基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)缽中，9月24日調(diào)查發(fā)病情況。

1.3.4 菌土法 將營(yíng)養(yǎng)缽灌透底水，用直徑2 cm的打孔器在基質(zhì)上打深度為3 cm左右的孔，每孔均勻注入2 ml(孢子含量約40×104個(gè)/L)和0.5 ml菌液(孢子含量約10×104個(gè)/L)，2008年8月4日播種，9月4日調(diào)查發(fā)病情況。

1.4 調(diào)查分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[3]分級(jí)。

2 結(jié)果與分析

從表1可以看出，不同接種方法發(fā)病時(shí)間不同，對(duì)材料的鑒定結(jié)果也存在明顯差異。菌土法和注射法接種后30天，從外部即觀察到病害發(fā)生;蘸根法和浸芽法接種至發(fā)病時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，尤其浸芽法接種后50天發(fā)病仍較輕。

從發(fā)病率和病情指數(shù)看，蘸根法在所有方法中發(fā)病率和病情指數(shù)均最高，3個(gè)處理的發(fā)病率均達(dá)100%，并且病情指數(shù)差異不明顯。浸芽法3個(gè)處理的發(fā)病率和病情指數(shù)均較低，并且隨浸泡時(shí)間延長(zhǎng)，發(fā)病率和病情指數(shù)并未隨之增大。菌土法中使用了2個(gè)菌液濃度，隨接種液濃度增大，發(fā)病率及病情指數(shù)均隨之增大。注射法2008年接種后30天調(diào)查發(fā)病率為47.06%，病情指數(shù)為14.38;2009年接種后50天調(diào)查發(fā)病率為79.17%，病情指數(shù)為34.72。表14種接種方法試驗(yàn)結(jié)果

接種方法浸芽法15min30min45min蘸根法4h6h8h菌土法10×104個(gè)/L40×104個(gè)/L注射法2008年2009年

播種至調(diào)查日數(shù)50505050505030303050

發(fā)病率(%)33.3343.2434.2110010010041.1865.7147.0679.17

病情指數(shù)19.0511.5816.9275.8974.3180.6117.6451.8414.3834.72

注:除菌土法外，其它各法菌液濃度均相同。

3 小結(jié)與討論

從調(diào)查結(jié)果看，在接種濃度相同的情況下，蘸根法的發(fā)病率與病情指數(shù)最高，這可能因?yàn)樵摲苁勾蟀撞擞酌绺等娼佑|菌液，3個(gè)時(shí)間處理間病情指數(shù)差異不明顯，因此以后可將其蘸根時(shí)間定為4 h。該接種方法準(zhǔn)確率高，但操作較為繁瑣，不適合大量材料的篩選鑒定。菌土法的結(jié)果表明，隨菌液濃度升高，發(fā)病率及病情指數(shù)均增加，因此該法的使用要嚴(yán)格進(jìn)行濃度試驗(yàn)，以防止在材料篩選中造成偏差。浸芽法的3個(gè)時(shí)間處理的發(fā)病率和病情指數(shù)均較低，因此該法雖然操作簡(jiǎn)便，但不適用于接種鑒定。注射法只進(jìn)行了一個(gè)菌液濃度的試驗(yàn)，2008年發(fā)病率和病情指數(shù)偏低，可能與調(diào)查過(guò)早有關(guān)。注射法在4種接種方法中，操作最簡(jiǎn)單，適合育種中對(duì)大量材料進(jìn)行抗病性鑒定。因此有關(guān)注射法接種濃度和適宜調(diào)查時(shí)間，還需進(jìn)一步試驗(yàn)研究。

本試驗(yàn)中由于播種至調(diào)查日期不同，可能導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果的差異，尤其菌土法和注射法調(diào)查過(guò)早，可能是造成發(fā)病率和病情指數(shù)偏低的主要原因，今后將統(tǒng)一調(diào)查時(shí)間對(duì)幾種方法進(jìn)一步試驗(yàn)，以找出適用于抗病育種最準(zhǔn)確簡(jiǎn)便的抗病性鑒定方法。

參 考 文 獻(xiàn):

[1] 孫保亞，沈向群，郭海峰，等.十字花科植物根腫病及抗病育種研究進(jìn)展[J].中國(guó)蔬菜，2005，4:34-37.

[2] 唐文華.北京十字花科蔬菜根腫病的發(fā)生和鑒定[J].植物保護(hù)學(xué)報(bào)，1990，16(1):17-18.

[3] 李曉歐，吳飛燕.大白菜根腫病苗期人工接種抗病性鑒定技術(shù)初報(bào)[J].中國(guó)蔬菜，1990，6:6-9.

[4] 丁云花，簡(jiǎn)元才.十字花科蔬菜根腫病菌生理小種及接種方法[J].中國(guó)蔬菜，2005，8:29-31.