李惠敏　黃丹瑩

[摘要] 目的:建立田大夫婦科膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法:采用TLC法對(duì)處方中延胡索進(jìn)行定性鑒別,并用HPLC法對(duì)處方中三七進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果:薄層色譜斑點(diǎn)清晰,專屬性強(qiáng);在11.54～577.00 μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系(r=0.999 8);平均回收率99.71%,RSD=1.70%(n=9)。結(jié)論:該方法準(zhǔn)確靈敏、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好,能有效控制該制劑的質(zhì)量。

[關(guān)鍵詞] 田大夫婦科膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);TLC;HPLC;人參皂苷Rg1;

[中圖分類號(hào)] R927.1

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A

[文章編號(hào)] 1674-4721(2009)08(a)-050-02

田大夫婦科膠囊是由三七,延胡索,川芎,五靈脂等10味中藥組成的中藥復(fù)方制劑,適用于氣滯血瘀,癥瘕積聚,經(jīng)期腹痛,月經(jīng)失調(diào)。為了更好控制該制劑的質(zhì)量,本文分別對(duì)處方的延胡索進(jìn)行鑒別及三七進(jìn)行含量測(cè)定,所實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確,適合作為法定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 材料、儀器和試藥

1.1 材料

田大夫婦科膠囊及其陰性對(duì)照均由惠州市九惠制藥有限公司提供;延胡索對(duì)照藥材(批號(hào):120928-200604),延胡索乙素對(duì)照品(批號(hào):0726-200208),人參皂苷Rg1對(duì)照品(批號(hào):110203-200726)均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.2 儀器及試劑試藥

KQ-250超聲波清洗器:昆山市超聲儀器有限公司;YB-Z真空恒溫干燥箱:天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠;瑞士Mettler AE-240及AE-200電子分析天平;Agilent 1100 Series高效液相色譜儀;CAMAG PEPROSTAR3 薄層色譜成像系統(tǒng)。

硅膠預(yù)制板:煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所;水為雙蒸水,乙腈為色譜純,其他試劑、試藥均為分析純。

2 測(cè)定方法與結(jié)果

2.1 延胡索薄層色譜鑒別

取本品內(nèi)容物1 g,加甲醇50 ml,超聲處理30 min,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?0 ml使溶解,用濃氨溶液調(diào)至堿性(pH:9～10),用乙醚振搖提取3次,每次10 ml,合并乙醚液,揮干,殘?jiān)蛹状? ml溶解,作為供試品溶液。另取延胡索對(duì)照藥材1 g,同法制成對(duì)照藥材液。再取延胡索乙素對(duì)照品,加甲醇制成每1毫升含0.5 mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各4 μl,分別點(diǎn)于同1個(gè)1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以甲苯-丙酮(9∶2)為展開(kāi)劑,展開(kāi),展至約10 cm,取出,晾干,置碘缸中約3 min后取出,揮盡板上吸附的碘后,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上,顯相同顏色熒光斑點(diǎn),陰性對(duì)照無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

2.2 三七含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm;進(jìn)樣量為10 μl;流速為1.0 ml/min。在此條件下人參皂苷Rg1與其他組分分離度大于1.5,理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計(jì)算不低于3 000。

2.2.2 供試品溶液制備 取裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物,混勻,取約2 g,精密稱定,置索氏提取器中,加三氯甲烷適量,加熱回流3 h,棄去三氯甲烷液,藥渣揮盡溶劑,連同濾紙筒移入100 ml離心管中,精密加水飽和的正丁醇50 ml,稱定重量,密塞,放置過(guò)夜,超聲處理1 h,放冷,用水飽和的正丁醇補(bǔ)足減失的重量,濾過(guò),棄去初濾液,精密量取續(xù)濾液20 ml,蒸干,殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5 ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),即得[1]。

2.2.3 對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品適量,加甲醇制成每1毫升含人參皂苷Rg 10.2 mg的溶液,即得。取缺三七樣品,稱取相當(dāng)于供試品的量,按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2.4 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 精密稱取對(duì)照品0.050 60 g,置50 ml量瓶,加甲醇使溶解,稀釋至刻度,搖勻,作為加樣回收用人參皂苷Rg1對(duì)照品貯備液(每1毫升含人參皂苷Rg 11.012 mg)。加樣回收供試品溶液的制備:精密稱取田大夫婦科膠囊(批號(hào)20080402,平均裝量0.415 1 g,含量0.48 mg/粒)供試品約1.0 g,分別置索氏提取器中,加三氯甲烷適量,加熱回流3 h,棄去三氯甲烷液,藥渣揮盡溶劑,連同濾紙筒移入100 ml離心管中,精密加入上述加樣回收用對(duì)照品貯備液2 ml,精密加水飽和的正丁醇50 ml,稱定重量,密塞,放置過(guò)夜,超聲處理1 h,放冷,再稱定重量,用水飽和的正丁醇補(bǔ)足減失的重量[2],濾過(guò),棄去初濾液,精密量取續(xù)濾液20 ml,蒸干,殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5 ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。結(jié)果平均回收率為99.71%,RSD=1.70%(n=9)。

2.2.5 精密度 分別由3名檢驗(yàn)員在不同時(shí)間,用同一臺(tái)設(shè)備,按含量測(cè)定方法測(cè)定同一批號(hào)田大夫婦科膠囊,結(jié)果平均值為0.48 mg/粒,RSD為0.9%。

2.2.6 專屬性 精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 μl,分別注入高效液相色譜儀[3],按含量測(cè)定方法測(cè)定。結(jié)果未見(jiàn)陰性對(duì)照溶液對(duì)試驗(yàn)有干擾。

2.2.7 線性 精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品0.011 54 g至20 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì)照品貯備液(577 μg/ml)。濃度1～3:精密吸取1 ml貯備液置50、20、10 ml量瓶中,加甲醇至刻度;濃度4～7:精密吸取1、2、3、4 ml貯備液置5 ml量瓶中,加甲醇至刻度;濃度8:貯備液[4]。以上8個(gè)濃度溶液注入液相色譜儀,以峰面積為縱坐標(biāo)、人參皂苷Rg1濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo),在11.54～577.00 μg/ml范圍內(nèi),得回歸方程為:Y=3.458,X=-3.733 4,r=0.999 8。

2.2.8 耐用性 取同一供試品溶液,使用不同色譜柱(Kromasil 100-5C18 250 mm×4.6 mm、phenomenex Gemini C18 250 mm×4.60 mm 5 μm、Venusil XBP-C18 4.60 mm×150 mm,5 μm),按擬定方法進(jìn)行含量測(cè)定,結(jié)果不同色譜柱測(cè)得結(jié)果RSD為1.4%,表明人參皂苷Rg1含量測(cè)定結(jié)果不受色譜柱影響[5]。

2.2.9 供試品含量測(cè)定 取不同批號(hào)的田大夫婦科膠囊3批,按擬定含量測(cè)定方法測(cè)定人參皂苷Rg1的含量,結(jié)果批號(hào)20080402含量為0.482 mg/粒,批號(hào)20080505含量為0.615 mg/粒,批號(hào)20080507含量為0.750 mg/粒。

3 討論

3.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

采用《中國(guó)藥典》2005年版(一部)三七藥材[含量測(cè)定]項(xiàng)下測(cè)定波長(zhǎng)203 nm為本品測(cè)定波長(zhǎng)。

3.2 提取方法與時(shí)間的選擇

曾嘗試11種提取方法,但以本文采用方法較為理想。分別考察超聲處理10、30、60 min提取效果,試驗(yàn)結(jié)果表明超聲30 min以上樣品的含量較超聲10 min的要高,為使提取完全,選擇了提取方式為超聲60 min。

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