張燕翔 蘇 波

摘要病理教學(xué)切片的質(zhì)量直接影響著病理實驗教學(xué)的質(zhì)量,本文簡要分析病理教學(xué)切片制作的主要環(huán)節(jié)及標(biāo)準(zhǔn)化管理,以便更好的為病理教學(xué)服務(wù)。

關(guān)鍵詞教學(xué)切片制作環(huán)節(jié)質(zhì)量管理

中圖分類號:G427文獻標(biāo)識碼:A

病理學(xué)是醫(yī)學(xué)教育中實踐性很強的一門基礎(chǔ)學(xué)科。豍觀察常規(guī)HE切片的組織學(xué)改變是病理學(xué)研究和診斷重要的基本方法之一。在病理實驗教學(xué)過程中學(xué)生通過對病理切片的顯微鏡下觀察了解其病變特點、可能產(chǎn)生的臨床癥狀及疾病的發(fā)生發(fā)展過程和機制,從而對疾病做出準(zhǔn)確的病理診斷。所以,教學(xué)切片的制作和管理是病理學(xué)實驗教學(xué)的重要組成部分,也直接影響病理學(xué)實驗課的教學(xué)效果?，F(xiàn)就教學(xué)切片制作過程中的重要環(huán)節(jié)、注意事項以及切片管理做概括介紹。

1 教學(xué)切片的制作

1.1蠟塊的制作

(1)取材。教學(xué)標(biāo)本一般來自醫(yī)院手術(shù)切及尸體解剖組織,明確病理診斷后選取教學(xué)所需典型病例。取材時若條件許可,需帶有病灶周邊正常組織;若無法保證,則單獨取一小塊正常組織與病變部位共同包埋。這樣在最終制成的切片上既有病變組織,又有正常組織,便于對比觀察。取材一般厚度以0.2-0.3cm為適,含水量豐富或易脆的組織如腦、甲狀腺、癌組織等可適當(dāng)厚一點,而脂肪組織、平滑肌瘤等致密的或試劑不易滲入的組織應(yīng)取薄一些;淋巴結(jié)應(yīng)修掉兩側(cè)球冠,并盡量剔除周圍的脂肪組織。在切取纖維組織、肌肉組織、胃腸時,應(yīng)注意纖維及肌肉的走向,取材時盡可能按與纖維平行走向切取為佳。

(2)固定。新鮮標(biāo)本應(yīng)及時固定,教學(xué)標(biāo)本制作H.E切片所用固定劑為4%甲醛溶液。根據(jù)標(biāo)本體積大小不同調(diào)整固定時間,一般4-12小時或更長。固定組織時,應(yīng)該使用足量的固定液,多比少好,一般應(yīng)為組織體積的5—10倍,最少也不應(yīng)少于5倍。骨組織及鈣化病灶,經(jīng)過固定后,必先浸入脫鈣液(濃鹽酸10-15ml,溶于100ml生理鹽水中)脫鈣,才能進行常規(guī)切片,如脫鈣不全則切片易碎裂并損傷切片刀刃。

(3)脫水。組織經(jīng)過取材固定后,一般經(jīng)由70%,80%,90%,95%,以至無水酒精的脫水程序,各級濃度酒精內(nèi)處理的最短時間分別為2-4小時即可達到脫水的要求。但因用于制作教學(xué)切片的組織體積一般較大較厚,要求保持液體的濃度以保證脫水的作用,最好是以兩次95%酒精,兩次100%酒精重復(fù)進行脫水,以保證組織的水分脫凈。豎脫水時間應(yīng)視組織種類,組織塊大小,厚薄和固定劑的不同而異。

(4)透明。組織透明時間長短應(yīng)根據(jù)組織的性質(zhì)而異。例如腦組織和有血塊的組織,應(yīng)縮短在二甲苯內(nèi)留置時間,而肌肉組織和胃腸組織則應(yīng)稍延長,最好先投入酒精和透明劑等量混合液半小時,再入透明劑,并更換一次透明劑,待組織完全透明后進行浸蠟,一般需要半小時至1小時。透明過久則會導(dǎo)致組織過度硬化變脆。

(5)浸蠟。在整個浸蠟過程中,骨、皮膚和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等致密組織需要較長時間。含血多的組織,肌肉和纖維束在蠟內(nèi)易過硬而發(fā)脆,故浸蠟時間應(yīng)縮短。浸蠟可以分兩級或三級進行,以排除透明劑,浸蠟時間1-4小時或更長。

(6)包埋。組織包埋時應(yīng)保持平整,用組織的最大面包理,囊壁、管腔組織還要注意方位,應(yīng)豎直包埋。病變區(qū)域與正常區(qū)域分開取材的組織應(yīng)間隔包埋在一起,以便于對比觀察。零碎組織也應(yīng)包埋在一起,并使之保持在同一水平面上。

1.2 切片

切片時刀口應(yīng)鋒利,防止出現(xiàn)刀痕和皺褶現(xiàn)象; 厚度一般為4-6微米,切片的要求是完整、均勻、完整。較難切的部分應(yīng)放上面,如皮膚的表皮,胃腸適的漿膜等,以減少組織的斷裂現(xiàn)象。展片水溫應(yīng)在40℃一45℃之間,水溫過高,會引起組織細胞散開,水溫過低,切片皺褶無法攤平。

1.3 染色

H.E染色的關(guān)鍵在于深淺適度,對比鮮明,蘇木素內(nèi)染色時間要根據(jù)染料的新舊、切片的類型而定,一般為5- 10min。鹽酸酒精分化后水洗必須充分,一般應(yīng)流水沖洗10-15分鐘,以防鹽酸殘留份致切片褪色并有促進藍化作用。不可用堿性溶液促進藍化,這樣處理切片易褪色,無法長期保存。最后伊紅復(fù)染30秒。染色理想的切片顯微鏡下觀察應(yīng)是:細胞核與細胞漿應(yīng)藍紅相映,核漿對比良好,核膜及核染色質(zhì)顆粒清晰可見。豏

1.4 封片

使用中性樹膠濕封切片,不可干封,以免細胞收縮、龜裂或出現(xiàn)黑色結(jié)晶樣小點。豐中性樹膠稀釋度應(yīng)適當(dāng),以均勻充滿蓋玻片不產(chǎn)生氣泡且樹膠不及外溢為佳。

2 教學(xué)切片的日常保存及管理

2.1教學(xué)切片的日常保存

教學(xué)切片制作完畢應(yīng)記錄制作時間、制作數(shù)量、病理診斷名稱,并統(tǒng)一編號后放入切片盒,置于切片柜中。切片柜應(yīng)保持清涼干燥,避免與化學(xué)試劑同放一室。由于(下轉(zhuǎn)第77頁)(上接第70頁)切片久置褪色,加上實驗課的破損,每次使用后應(yīng)及時清理,更換褪色及破損切片,并記錄需繼續(xù)補充的教學(xué)切片種類,及時增補。

2.2切片的教學(xué)管理

教學(xué)切片主要在平常實習(xí)課中使用,其丟失與破損大多也在課堂,因此,切片的課堂管理就顯得尤為重要。筆者所在單位在上課前即向?qū)W生介紹完整的切片制作流程,告之典型標(biāo)本取得的困難,增強學(xué)生愛惜切片的意識,同時加強顯微鏡規(guī)范操作的培訓(xùn),從而有效地減少了切片的損失。

病理教學(xué)切片的使用者主要是二年級的醫(yī)學(xué)生,其制作從標(biāo)本從取材到封固都有十分嚴格的要求。每一項處理都直接影響切片質(zhì)量,而教學(xué)切片的質(zhì)量又直接影響到整個病理學(xué)的教學(xué)質(zhì)量和水平。應(yīng)把好每一關(guān),加強學(xué)習(xí),通過實踐不斷探索總結(jié)、積累經(jīng)驗,以更好地為教學(xué)服務(wù)。